葡萄糖-组胺美拉德产物的生成及对HL-7702细胞生长抑制和细胞周期的影响

探讨了葡萄糖-组胺美拉德产物(MRPs)和组胺(Histamine)对人正常肝细胞(HL-7702)生长抑制和细胞周期可能的作用和影响。用不同剂量的葡萄糖-组胺美拉德产物和组胺处理HL-7702细胞,用MTT方法分别检测美拉德产物和组胺对HL-7702细胞的生长抑制效果;用Annexin检测法,在流式细胞仪下观察两种药物对HL-7702细胞周期分布的影响。MRPs和组胺作用于HL-7702细胞24、48、72 h后,对细胞均有生长抑制作用,其抑制作用呈现剂量和时间依赖性。但组胺对HL-7702细胞的生长抑制作用明显强于MRPs;MRPs产物和组胺两种药物作用于细胞72 h后对细胞周期都有一定的影响,其中组胺的作用明显强于MRPs。葡萄糖和组胺生成的产物能显著消减组胺对HL-7702细胞的杀伤作用。     

小麦低聚肽对H2O2所致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

分析小麦低聚肽氨基酸组成和相对分子质量分布,并对其保护过氧化氢所致人肝癌细胞(HepG2)氧化损伤的作用进行了研究。首先采用不同浓度小麦低聚肽作用HepG2细胞4 h,然后用150μmol/L过氧化氢氧化损伤细胞4 h,以细胞存活率、细胞内活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)含量评价小麦低聚肽对HepG2细胞的保护作用。结果表明,小麦低聚肽相对分子质量小于1 000的组分高达93.44%,谷氨酸及脯氨酸含量较高;小麦低聚肽具有增加细胞存活率、抑制细胞内ROS生成、降低细胞内MDA含量的活性,对减少HepG2细胞的氧化应激及提高细胞抗氧化能力具有较好的作用效果。本研究从细胞水平上揭示了小麦低聚肽对过氧化氢所致的肝脏损伤具有一定的预防保护作用。     

乌鸡低聚肽的成分分析及抗氧化活性研究

在对乌鸡低聚肽氨基酸组成及相对分子质量分布分析的基础上,对其保护过氧化氢(H2O2)所致人肝癌细胞(Hep G2)氧化损伤的作用进行了研究。采用不同浓度乌鸡低聚肽作用Hep G2细胞4 h,然后用150μmol/L H2O2对细胞进行氧化损伤,4 h后以细胞存活率、细胞内活性氧(ROS)水平、一氧化氮(NO)及乳酸脱氢酶(LDH)释放量评价乌鸡低聚肽对H2O2所致Hep G2细胞氧化损伤的保护作用。研究结果表明,乌鸡低聚肽中谷氨酸含量最高(17.26%),其次是天冬氨酸(9.52%);相对分子质量小于1000 u的组分高达92.33%;乌鸡低聚肽具有提高细胞存活率、抑制细胞内ROS生成、减少NO及LDH释放的功能,对降低Hep G2细胞的氧化应激水平及提高细胞抗氧化能力具有较好的作用效果。从细胞水平上揭示了乌鸡低聚肽对过氧化所致的氧化损伤具有一定的预防保护作用。     

牡蛎肽螯合锌成分分析、结构表征及促细胞增殖作用

为探究一种补锌产品——牡蛎肽螯合锌的组成成分、结构特征及促细胞增殖作用,分别研究了牡蛎肽螯合锌的氨基酸组成、相对分子量分布、锌含量,并采用傅里叶红外光谱、扫描电镜对牡蛎肽螯合锌进行表征分析,利用HL-7702人肝细胞进行增殖培养试验。结果表明:牡蛎肽螯合锌相比牡蛎肽在氨基酸组成及相对分子量分布上有明显差异,牡蛎肽螯合锌中锌的质量百分比为4.48%。红外光谱检测表明,牡蛎肽中羧基上的C==O和氨基上的N—H均参与了螯合反应。扫描电镜结果显示,牡蛎肽与牡蛎肽螯合锌之间的表面形貌特征存在明显区别,为不同种类物质。MTT法检测结果证明,牡蛎肽螯合锌安全性高,在一定程度上促进了HL-7702人肝细胞的增殖。     

食物黄酮异荭草素及其银纳米颗粒的保肝活性

为提高食物黄酮异荭草素（Iso）的生物活性和预防苯并（a）芘（BaP）诱发的肝损伤提供一定的依据，以Iso及其银纳米颗粒（Iso-AgNPs）为研究对象，建立食品高温有害产物BaP损伤HL-7702人肝细胞模型，基于细胞凋亡、自噬和焦亡3种程序性死亡方式，通过MTT、台盼蓝染色、荧光标记、流式细胞术、Western blotting等方法检测Iso-AgNPs的保肝作用。结果表明：相较于Iso，Iso-AgNPs能更好地钝化BaP对HL-7702人肝细胞活力的抑制作用，促进细胞增殖，显著抑制BaP诱导的HL-7702人肝细胞凋亡性、自噬性和焦亡性损伤。因此，Iso-AgNPs可提高Iso的生物活性且预防肝细胞损伤。     

胶原蛋白多肽铬对四氧嘧啶损伤肝细胞的保护作用

研究了胶原蛋白多肽铬(CPCC)对四氧嘧啶损伤肝细胞HL-7702的保护作用,并探讨其作用机理.方法是将肝细胞HL-7702分为正常对照组、四氧嘧啶组、胶原蛋白多肽铬组及四氧嘧啶 胶原蛋白多肽铬组,分别检测细胞存活率、细胞胞内活性氧(ROS)、胞外超氧阴离子(O2.-)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力、脂质过氧化物丙二醛(MDA)含量,并检测胶原蛋白多肽铬在过氧化氢(H2O2)模型组中的作用.结果表明胶原蛋白多肽铬处理使四氧嘧啶损伤肝细胞存活率增加,胞内ROS生成减少,O2.-含量、SOD与GSH-Px低偿性升高及MDA含量降低.结论是胶原蛋白多肽铬处理对四氧嘧啶损伤肝细胞具有一定的保护作用,其作用机制可能与三价铬抗氧化性能有关.     

葡萄籽原花青素提取物对砷诱导人肝细胞HL-7702损伤的保护作用及其机制

目的：研究葡萄籽原花青素提取物（grape seed proanthocyanidin extract,GSPE）对砷诱导的人肝细胞 HL-7702损伤的保护作用及其机制,为砷中毒的防治和GSPE的抗氧化研究提供理论依据。方法：将人肝细胞HL-7702 分为对照组、砷染毒组（25 μmol/L）、GSPE干预组（5、10、25、50 mg/L）以及GSPE单独干预组（50 mg/L）, 分别处理24 h和48 h后,分别测定天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate transaminase,AST）、丙氨酸氨基转移酶 （alanine aminotransferase,ALT）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平以及总抗氧化能力（total antioxidant capacity,T-AOC）变化。噻 唑蓝（3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-yl)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT）法分析细胞生存率,利用实时定量聚 合酶链式反应以及Western blot法检测HL-7702细胞中核因子E2相关因子（nuclear factor erythroid-2 related factor 2, Nrf2）、血红素氧合酶1（heme oxygenase 1,HO-1）、醌氧化还原酶1（quinone oxidoreductase 1,NQO1）和谷 胱甘肽巯基转移酶（glutathione S-transferase,GST）的mRNA以及蛋白表达。结果：MTT实验发现,与对照组比 较,高浓度砷（≥25 μmol/L）染毒组细胞存活率显著降低（P＜0.05）。GSPE干预组（＞10 mg/L）细胞中的ALT 和AST活力、MDA水平显著低于砷染毒组（P＜0.05）,SOD活力、GSH含量以及T-AOC水平显著高于砷染毒组 （P＜0.05）,GSPE干预组HL-7702细胞中Nrf2、HO-1、NQO1、GST的mRNA及蛋白表达增高（P＜0.05）。结 论：GSPE对砷诱导的人肝细胞HL-7702氧化损伤具有拮抗作用,且具有一定的剂量效应关系,其机制可能是通过 激活Nrf2介导的抗氧化信号通路,提高细胞抗氧化能力,从而改善砷引起的肝损伤。     

低聚葡萄籽原花青素联合顺铂对A549细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨低聚葡萄籽原花青素(oligomer grape seed proanthocyanidins,O-GSP)联合顺铂(cisdichlorodiamineplatinum(Ⅱ),DDP)对A549细胞增殖、细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响。方法:体外培养A549细胞,四甲基偶氮唑蓝法检测DDP和O-GSP单独及联合用药对A549细胞存活率的影响;流式细胞仪检测O-GSP联合DDP对A549细胞周期的影响;Western Blot检测促细胞周期相关蛋白CDK 4、Cyclin D1和p-Rb的表达。结果:DDP(≥5 mg/L)和O-GSP(≥16 mg/L)单独用药均对A549细胞增殖有抑制作用,且两者同时作用对细胞增殖抑制具有联合作用。5 mg/L DDP单独用药可以于S期阻滞A549细胞,4 mg/L O-GSP单独用药可以于G_0/G_1期阻滞A549细胞,两者联合可显著降低细胞周期调控蛋白CDK 4、Cyclin D1和p-Rb的表达(P0.05)。结论:O-GSP可以联合DDP抑制A549细胞增殖,且这种联合作用与Cyclin D1-CDK 4-Rb通路介导的细胞周期调控有关。     

肉桂醛对HL－60细胞的生长抑制及诱导凋亡作用研究

目的：探讨肉桂醛对HL-60细胞的增殖及凋亡的影响。方法：采用台盼蓝细胞计数和四甲基偶氮唑蓝(MTT)法研究肉桂醛对HL-60细胞增殖的抑制作用;采用流失细胞仪(FCM)、荧光显微镜(FM)、扫描电镜(SEM)以及透射电镜(TEM)探讨肉桂醛对HL-60细胞的诱导凋亡作用。结果：台盼蓝细胞计数和MTT法结果表明：肉桂醛对HL-60细胞的增殖有明显抑制作用,抑制作用与肉桂醛质量浓度及作用时间呈依赖关系,其半数致死质量浓度为34.87μg/mL;流式细胞仪检测结果表明：肉桂醛(终质量浓度20μg/mL)作用16h后,HL-60细胞早期凋亡比例为32.6%;该组细胞在荧光显微镜、扫描电镜以及透射电镜观察下均呈现早期凋亡特征。结论：肉桂醛能抑制HL-60细胞增殖并促进其凋亡。     

自主研发复合低聚肽对乙醇损伤的GES-1细胞修复作用的研究

目的:探讨实验室自主研发复合低聚肽对乙醇损伤的人胃黏膜上皮细胞(GES-1)的修复作用。用4%的乙醇诱导人胃黏膜上皮细胞(GES-1)3 h建立胃黏膜损伤模型。方法:将细胞分为空白组,模型组,阳性对照组(奥美拉唑),复合低聚肽的低、中、高剂量组,小麦低聚肽组,考察各组分对乙醇损伤的GES-1细胞的治疗作用。结果:复合低聚肽粉对损伤细胞的增殖、抗氧化、ADH酶活力均有增强效果,并呈现浓度依赖性,高剂量组的效果最好。其促进细胞增殖,降低细胞内氧化应激水平、增强ADH酶活力的能力强于小麦低聚肽的单独作用。因此,实验室自主研发复合低聚肽粉具有一定的治疗胃黏膜损伤的作用。     

三种黄酮醇化合物对H2O2 和CCl4 诱导的人肝细胞体外损伤的保护作用比较

黄酮醇是一类广泛存在于植物界中的多酚物质,并具有许多生理作用,在食品中具有较大的应用潜力。通过一些生化实验方法,研究了3 种黄酮醇(山奈素、槲皮素、杨梅黄酮)对由H2O2 和CCl4 诱导的人肝细胞(HL-7702细胞系)体外氧化损伤的保护作用,并研究了3 种黄酮醇的化学结构与其细胞保护作用之间的关系。结果表明,3种黄酮醇(20、40、60μmol/L)与肝细胞预先作用30min,再进行诱导损伤,可以提高肝细胞的细胞活率和还原型谷胱甘肽(GSH)含量水平,降低乳酸脱氢酶(LDH)渗出率和丙二醛(MDA)生成量。3 种黄酮醇的细胞保护能力大小顺序为槲皮素>杨梅黄酮>山奈素。结果显示,黄酮醇的细胞保护能力大小与其分子结构中B 环上羟基数目的多少无关。     

古尼虫草抗肿瘤活性成分的提取分离及活性测定

虫草是一类珍贵的生物资源,本实验对古尼虫草菌丝体甲醇提取物的抗肿瘤活性成分进行了研究。通过甲醇浸提、正己烷、乙酸乙酯萃取得到古尼虫草甲醇粗提物0.6194g,其得率为2.06%。将得到的甲醇粗提物用乙醚:正己烷:甲醇=5:5:1的溶液为洗脱剂进行硅胶柱层析分离纯化,获得3个组分(FB1、FB2、FB3)。通过红外光谱和核磁共振H谱对分离组分FB3进行了初步检测,结果显示为甾体类化合物。采用MTT比色法检测分离组分FB3的抗肿瘤活性,发现其对MCF-7和HL-7702细胞株有抑制作用,最强抑制率达84.54%。     

Isolation and characterization of antitumor polysaccharides from the marine mollusk Ruditapes philippinarum

Aqueous purified extract (PE) was isolated from the crude extract (CE) of the marine mollusk, Ruditapes philippinarum. Two water-soluble polysaccharides, PEF1 and PEF2, were purified from PE. The chemical structures were determined using FTIR, GC, HPLC and ¹³C NMR. The results indicated that PEF1 and PEF2 were homoglucan–protein complexes with a protein content of 26.0 and 8.2%, and their average molecular weights were about 2.0 × 10⁶ and 5.0 × 10³, respectively. The glucan moiety of PEF1 was mainly a (1 → 6)-branched (1 → 4)-α-d-glucan, while that of PEF2 contained (1 → 4)-α-d-glucan and (1 → 6)-β-d-glucan. PE fractions contained large quantities of glutamic acid and aspartic acid, but no cysteine. The antitumor activities were tested both in vitro and in vivo. PE showed significantly the highest tumoricidal activity against human hepatoma SMMC-7721 cells, and PEF1 had better cytotoxicity than PEF2. There was no observed cytotoxicity in human hepatocyte HL-7702 cells within the experimental concentration range for all PE fractions. PE showed antitumor activity against solid tumor Sarcoma 180 in a dose-dependent manner. It also demonstrated stimulating effect on murine lymphocyte proliferation induced by concanavalin A. The results demonstrated that the presence of bound protein, compositional glucan and moderate molecular mass would be helpful to the enhancement of antitumor activities. This study suggested that the polysaccharides isolated from the marine mollusk had a potential application as natural antitumor and immunomodulator agents.     

New alkaloids from Capparis spinosa: Structure and X-ray crystallographic analysis

Fruits of Capparis spinosa contain a significant amount of compounds with many health benefits. Three new alkaloids, capparisine A (1), capparisine B (2), capparisine C (3), and two known alkaloids, 2-(5-hydroxymethyl-2-formylpyrrol-1-yl) propionic acid lactone (4), and N-(3′-maleimidy1)-5-hydroxymethyl-2-pyrrole formaldehyde (5) were isolated from the fruits of C. spinosa L. The five compounds were purified by solvent separation, column chromatography, and preparative HPLC, consecutively. The chemical structures of compounds 1–5 were established on the basis of a spectroscopic analysis, and the stereochemistries of compounds 1 and 2 were proved by X-ray crystallographic analysis. Nevertheless, the five compounds had no inhibitory effect on the human hepatocyte cell line HL-7702 apoptosis induced by Act D (200 ng/ml) and TNF-α (20 ng/ml) with high content screening assay.     

西施舌多糖对人食管癌EC-9706细胞增殖及抗氧化活性的影响

目的:研究西施舌多糖对人食管癌细胞株EC-9706的增殖及抗氧化活性的影响。方法:体外培养人食管癌细胞株EC-9706,用MTT法研究不同浓度西施舌多糖对人食管癌细胞增殖的影响,并检测不同浓度西施舌多糖对体外培养食管癌细胞和小鼠原代培养肝细胞的超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,以及对细胞培养上清液总抗氧化活性（T-AOC）和抑制羟自由基（·OH）活性的影响。结果:西施舌多糖对食管癌细胞株EC-9706增殖的抑制作用随浓度增大和培养时间延长而增加。西施舌多糖能提高体外培养细胞的抗氧化活性,而且在西施舌多糖浓度相同的条件下,小鼠肝细胞SOD、CAT、T-AOC和抑制羟自由基活性均高于食管癌细胞。结论:西施舌多糖能抑制人食管癌EC-9706细胞的增殖,增强体外培养细胞的抗氧化活性。      

Nuclear factor-kappaB as a switch in regulation of resveratrol-mediated apoptosis and erythrocytic differentiation in human leukaemia cells

Resveratrol exerts functions relating apoptosis and differentiation; nonetheless, the mechanisms remain unclear. We examined the regulation of resveratrol on apoptosis and erythrocytic (E)-differentiation in leukaemia cells. The results showed that resveratrol treatment for 24 h induced apoptosis in human leukaemia NB4, HL-60, and U937 cells. Resveratrol-treated K562 cells underwent erythrocyte (E)-differentiation and cell cycle arrest in S-phase, without apoptotic induction in the early stage, but with marked apoptosis in the later stages. Resveratrol-induced apoptosis could be accompanied by P38 downregulation, and E-differentiation could occur with PI3K/Akt upregulation. Downstream NF-κB was increased by resveratrol treatment for 24 h, while luciferase activity was decreased by resveratrol treatment for 72 h. Similar changes were discovered for nuclear levels and NF-κB-DNA binding activity. In conclusion, resveratrol induced differential responses through different signalling pathways, including PI3K/Akt and P38/MAPK, leading to opposing expressions of NF-κB. NF-κB could be a switch for regulating E-differentiation and apoptosis in resveratrol-stimulated K562 cells.     

Methyl jasmonate enhances antioxidant activity and flavonoid content in blackberries (Rubus sp.) and promotes antiproliferation of human cancer cells

The effects of preharvest methyl jasmonate (MJ) application on fruit quality, antioxidant activity and flavonoid content in blackberries (Rubus sp.) were determined. Anticancer activity against human lung A549 cells and HL-60 leukemia cells was also evaluated. Three blackberry cultivars (Chester Thornless, Hull Thornless and Triple Crown) were used in these experiments. Blackberries treated with MJ (0.01 and 0.1 mM) had higher soluble solids content, and lower titratable acids than untreated fruit as well as enhanced content of flavonoids and increased antioxidant capacity. Extracts of treated fruit showed enhanced inhibition of A549 cell and HL-60 cell proliferation and induced the apoptosis of HL-60 cells. Cultivar Hull Thornless had higher soluble solids and lower titratable acids compared to cv. Chester Thornless and Triple Crown. On the basis of fresh weight of fruit, Hull Thornless also had significantly higher anthocyanin, total phenolic content, antioxidant and antiproliferation activity than other two cultivars.     

叔丁基对苯二酚对人正常肝细胞的毒性

目的:研究叔丁基对苯二酚在大鼠体内代谢后的浓度及在该浓度范围内的体外细胞毒性。方法:大鼠高剂量(700mg/kg)灌胃后,运用液相色谱/质谱联用法检测血清中叔丁基对苯二酚的浓度。以人正常肝细胞HL7702为研究对象,采用MTT法检测叔丁基对苯二酚的细胞毒性,采用倒置显微镜观察细胞形态变化,并评估叔丁基对苯二酚在体内浓度范围内的体外细胞毒性。结果:叔丁基对苯二酚抑制细胞生长,并使细胞形态学特征改变;随着浓度升高(0.01～1.2mmol/L)和细胞培养时间延长(12～48h),其对细胞的毒性作用加剧(细胞毒性等级0～4);细胞培养时间为12、24、48h时,半致死浓度分别为0.63、0.34、0.16mmol/L;大鼠血清中叔丁基对苯二酚的浓度≤0.12mmol/L,细胞毒性等级0～2级。结论:经口进入体内的叔丁基对苯二酚,代谢后的体内浓度不会引起高细胞毒性反应。