啤酒酿造原料中黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A同时检测分析方法研究

研究建立同时检测啤酒及酿造原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的免疫亲和柱净化-柱后化学衍生-高效液相色谱方法。样品经过甲醇-水(80∶20,v/v)提取,通过免疫亲和柱进行富集和净化,采用Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱,以乙腈-2%乙酸(40∶60,v/v)为流动相,等度洗脱,柱后以0.5%碘溶液衍生、改变波长荧光检测。结果表明,黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A检出限分别为0.05μg/kg(AFB1)、3.19μg/kg(ZEA)和0.22μg/kg(OTA),标准曲线的线性范围分别为0.2~10.0μg/L、10.0~1000.0μg/L和5.0~50.0μg/L;在大麦样品中加标回收率为90.0%~109.5%,相对标准偏差为2.18%~4.94%。被检37个样品的真菌毒素含量检测结果表明,正常贮存下的啤酒原料均未检测出真菌毒素,但在霉变大麦样品中可以检测出少量的真菌毒素。     

基于超导体包被的免疫荧光快检试纸法同时测定玉米中3种毒素的适用性研究

应用基于超导体包被的免疫荧光快速定量检测技术，建立了一种AFB1-ZEN-DON三合一联检卡法，可同时快速测定玉米中的黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮（ZEN）、呕吐毒素（DON）三种常见真菌毒素。对质控样准确度、加标回收率、检测限、定量限进行测定，检测多个玉米样品并与液相色谱法的检测结果进行对比，评估方法的适用性。结果表明，AFB1-ZEN-DON三合一联检卡检测AFB1含量在0.5～30μg/kg,ZEN含量在5～200μg/kg,DON含量在100～2 500μg/kg的范围内线性良好。AFB1在5～20μg/kg加标量范围时，回收率为97.62%～99.37%,ZEN在50～150μg/kg加标量范围时，回收率为98.03%～104.07%, DON在500～2000μg/kg加标量范围时，回收率为102.49%～108.53%。与液相色谱法相比，使用该方法检测AFB1相对偏差在–2.84%～11.91%,ZEN相对偏差在–3.43%～18.12%,DON相对偏差在1.83%～12.91%，均在液相色谱法允许偏差20%、15%和23%之内。该方法检测AFB1检测限为0....     

污染物赭曲霉素在大麦、麦芽、啤酒中的测量

利用ELISA(RIDASCREEN)方法研究大麦、麦芽、啤酒样品中存在的赭曲霉素A(OTA)。OTA的检测限很低，啤酒是0．08μg／L、大麦和麦芽是0．4μg／L。在29种大麦样品中有26种OTA含量是在0．53～12μg／kg之间。在24种麦芽样品中有23种OTA含量在0．5～6．6μg／kg之间，仅有一种麦芽样品没有检出OTA。在150种啤酒样品中有42种OTA含量在0．1～8．10μg／L之间(占28％)，108种啤酒样品(占72％)没有发现OTA，仅有一种啤酒样品OTA含量高于5μg／L。     

快速测定乳制品中黄曲霉毒素B1、M1

建立一种快速检测乳制品中黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1, AFB1)、M1(Aflatoxin M1,AFM1)的检测方法。用60%甲醇-水提取样品,1∶4纯水稀释,用酶联免疫法测定样本中的AFB1和AFM1。加标浓度为0.2μg/kg,0.4μg/kg和0.8μg/kg浓度AFB1、AFM1标准品,用酶联免疫法测定,每个浓度做三次平行,分别计算AFB1、AFM1回收率。AFB1的回收率分别为:98.7%、97.3%及103.6%;AFM1的回收率为:100.5%、99.2%及101.5%;方法检出为0.03μg/kg。此方法对AFB1、AFM1的回收率结果均在90%～110%之间,符合国标方法中对酶联免疫试剂盒回收率的要求(50%～120%),方法快速、稳定,适用于乳制品中AFB1和AFM1的检测。     

免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱荧光法快速检测玉米粉中黄曲霉毒素B1

本文建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱荧光法-陕速检测玉米粉中黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）的方法。样品经甲醇/水（4∶1.v/v）浸提,免疫亲和柱净化,高效液相色谱分离,光化学柱后衍生,荧光检测器测定。结果表明：AFB1在2.5-150μg/L具有良好的线性关系,相关系数为R-2=0.9998,检测限为1.0μg/kg,平均回收率为84.0%-96.3%,RSD范围为0.7%-2.5%。该方法具有快速、准确和重复性好的优点,适用于大批次玉米及玉米粉制品中AFB1的检测。     

高效液相色谱法测定玉米中的黄曲霉毒素

目的建立一种定量检测玉米中黄曲霉毒素的高效液相色谱方法。方法样品用甲醇-盐酸溶液提取、正己烷脱脂,再经二氯甲烷萃取和硅胶柱净化,最后与TFA进行衍生反应,以甲醇-乙腈-水为流动相,C18柱分离并通过荧光检测器定量。结果4种黄曲霉毒素在15 min内得到良好的基线分离,样品中AFB1、AFB2、AFG1、AFG2的检出限分别为0.04、0.02、0.10和0.04μg/kg。0.10-50.00μg/kg AFB1加标回收率为78.2%-85.9%,相对标准偏差为10%-16%;10.00和40.00μg/kg总黄曲霉毒素加标回收率分别为86.5%和89.2%,相对标准偏差分别为13%和9.2%。盲样测定结果在给定浓度范围内。结论该方法灵敏度高、稳定性好、成本低,可以用于玉米中黄曲霉毒素的定量检测,并具有推广应用的前景。     

高效液相色谱和高效液相色谱-离子阱质谱测定花生、玉米和大米中黄曲霉毒素方法比较

比较花生、玉米和大米中黄曲霉毒素(AFT)测定的两种分析方法。样品经70%甲醇溶液(含NaCl 4g/100mL)提取,自制免疫亲和柱净化。洗脱液一分为二,一份经正己烷、三氟乙酸衍生后用配有荧光检测器的液相色谱检测;另一份无需衍生用液相色谱-串联离子阱质谱检测。液相色谱测定的AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的检出限(RSN=3)分别为0.5～1.5μg/kg,相关系数在0.9979～0.9999,加标回收率50.29%～126.54%;液相色谱-串联质谱测定的AFB1、AFB2、AFG1和AFG2的检出限分别为0.1～0.2μg/kg;相关系数在0.9993～0.9998,加标回收率50.38%～121.27%。结果表明液相色谱-离子阱质谱法无论在选择性还是在灵敏度上都优于高效液相色谱。     

HPLC法测定啤酒原料中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素

建立了一种利用多功能净化柱-高效液相色谱检测啤酒大麦和麦芽中脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素（DON）含量的方法。把该方法和GC／ECD方法进行了对比,线形回归分析表明两种方法的检测结果接近。分析了10种国产、进口的大麦和麦芽,大麦和麦芽中DON最高污染水平分别为1．23μg／g、0．24μg／g。该方法可应用于啤酒酿造原料中DON污染情况的检测分析。     

免疫亲和柱净化-柱后衍生高效液相色谱荧光法快速检测玉米粉中黄曲霉毒素B_1

本文建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱荧光法-陕速检测玉米粉中黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB1)的方法。样品经甲醇/水(4∶1.v/v)浸提,免疫亲和柱净化,高效液相色谱分离,光化学柱后衍生,荧光检测器测定。结果表明:AFB_1在2.5~150μg/L具有良好的线性关系,相关系数为R~2=0.9998,检测限为1.0μg/kg,平均回收率为84.0%~96.3%,RSD范围为0.7%~2.5%。该方法具有快速、准确和重复性好的优点,适用于大批次玉米及玉米粉制品中AFB1的检测。     

免疫磁性微球预处理结合超高效液相色谱-串联质谱法快速检测花生和花生油中黄曲霉毒素B1

目的设计并合成一种功能化免疫磁性微球,结合超高效液相色谱-串联质谱法(ultraperformance liquidchromatography-tandemmassspectrometry,UPLC-MS/MS)快速提取和检测花生和花生油中黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)。方法样品经过甲醇-水溶液(70:30,V:V)提取,1.6 mg免疫磁性微球富集净化,用1.00 mL甲醇洗脱,采用Waters ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,电喷雾离子源在正离子模式下分析AFB1的含量。结果该材料能够在15 min实现AFB1的快速提取净化。与UPLC-MS/MS联用,本方法的线性范围在0.1~50.0μg/L,检出限为0.04μg/kg,定量限为0.14μg/kg,相对标准偏差(relativestandard deviation,RSD)为2.2%。将本研究建立的方法用于检测花生及花生油中AFB1,方法回收率大于80%,重复性数据满足实验要求。与基于免疫亲和柱的国家标准方法进行了性能比较,结果与国家标准方法基本一致。结论该方法操作简单、用时短,可用于花生和花生油中AFB1的检测。     

A Survey of Barley,Malt and Beer Contamination with Ochratoxin A in Turkey

The presence of ochratoxin A (OTA) was investigated in barley, malt and beer samples using an ELISA method (RIDASCREEN). The lower detection limit of this OTA test was 0.08 μg/L for beer and 0.4 μg/kg for barley and malt. In 26 out of 29 barley samples the OTA content was between 0.53–12 μg/kg. OTA was between 0.5–6.6 μg/kg in 23 out of 24 malt samples. Only one malt sample had no detectable OTA using RIDASCREEN. The OTA content was between 0.1–8.10 μg/L in 42 out of 150 beer samples (28%) and in 108 beer samples OTA was not found at detectable levels (72%). Only one beer sample contained more than 5 μg/L OTA.     

制麦和酿造过程中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的初步研究

2008年江苏某农场的赤霉病感染相对严重的KA-4B大麦中,脱氧雪腐镰刀茵烯醇（DON）的含量为1．91mg/kg。以此大麦为原料,实验室规模下进行制麦和酿造实验,结果表明,浸麦可以洗去大麦本身含有的绝大部分DON;而大麦内部没有被洗掉的镰孢霉属真菌孢子在发芽阶段重新萌发、生长代谢,形成并积累大量的DON;焙燥阶段不能破坏DON,成品麦芽和麦根中DON的含量分别是原大麦中DON含量的51％和89％。麦芽中的DON可以经过糖化和发酵过程流入到啤酒中,啤酒中DON的总含量是麦芽粉中DON总量的86％。而同一年份相邻农场的基本未感染赤霉病的KA-4B大麦中,DON含量低于0．1mg/kg,绿麦芽和麦根中均检测到低于0．1mg／kg的DON,而成品麦芽、麦汁和啤酒中均未检测到DON。制麦及酿造实验表明,与基本未感染赤霉病的KA-4B大麦相比,赤霉病感染程度严重的KA-4B大麦微生物污染严重,DON含量相对高,大麦品质较差,发芽率较低,麦芽浸出率低,所制得麦汁的过滤速度快,麦汁和啤酒的色度均较高。     

Occurrence of Aspergillus spp. and aflatoxin B1 in Malaysian foods used for human consumption

Malaysian population widely consumes the cereal-based foods, oilseeds, nuts, and spices in their daily diet. Mycotoxigenic fungi are well known to invade food products under storage conditions and produce mycotoxins that have threat to human and animal health. Therefore, determining toxigenic fungi and aflatoxin B(1) (AFB1) in foods used for human consumption is of prime importance to develop suitable management strategies and to minimize risk. Ninety-five food products marketed in Penang, Malaysia were randomly collected from different supermarkets and were analyzed for presence of Aspergillus spp. by agar plate assay and AFB1 by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). A. flavus was the dominant fungi in all foods followed by A. niger. Fifty-five A. flavus strains were tested for their ability to produce aflatoxins on rice grain substrate. Thirty-six (65.4%) strains out of 55 produced AFB1 ranging from 1700 to 4400 μg/kg and 17 strains (31%) produced AFB2 ranging from 620 to 1670 μg/kg. Natural occurrence of AFB1 could be detected in 72.6% food products ranging from 0.54 to 15.33 μg/kg with a mean of 1.95 μg/kg. Maximum AFB1 levels were detected in peanut products ranging from 1.47 to 15.33 μg/kg. AFB1 levels detected in all food products were below the Malaysian permissible limits (<35 μg/kg). Aspergillus spp. and AFB1 was not detected in any cookies tested. Although this survey was not comprehensive, it provides valuable information on aflatoxin levels in foods marketed in Malaysia.     

4 种方法脱除花生油中黄曲霉毒素B1的研究

采用4 种方法脱除花生油中黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）,对比研究4 种方法的脱除效果以及对花生油酸价、过氧化值、VE含量、植物甾醇含量的影响。探究碱法脱除花生油中黄曲霉毒素的作用机理、安全性、油中游离碱残留及花生油风味的影响。花生（三级）经压榨后油中AFB1含量为21.50 μg/kg,经碱液处理（碱液pH 13.44、碱液占花生质量10%、30 min）后花生油AFB1残留量降至2.00 μg/kg,脱除率90.7%;膨润土一次吸附（膨润土用量质量分数2.0%、吸附时间30 min）花生油AFB1残留量为0.13 μg/kg,脱除率99.4%;膨润土复吸（首次吸附用量质量分数1.0%、复吸用量质量分数0.5%、每次吸附时间30 min）花生油AFB1残留量为0.10 μg/kg,脱除率为99.5%;碱炼脱酸（温度50 ℃、超碱用量0.8%、30 min）花生油AFB1残留量为0.10 μg/kg,脱除率为99.5%。碱液处理法比其他方法花生油中VE保留率最高,经感官评定比较,该方法花生油风味损失最低。     

以未发芽大麦替代麦芽酿造啤酒及其麦香改善研究

本文研究了利用酶制剂Ondea Pro进行大麦啤酒的生产,对其麦汁糖谱、氨基酸谱、蛋白质区分、α-氨基氮和大麦啤酒理化成分及风味物质等指标进行了检测,特别是对麦香物质呋喃酮、2-乙酰吡咯、2-乙酰-1-吡咯啉、麦芽酚、2-甲基吡嗪、乙基吡嗪、乙酰呋喃和甲基糠醛等化合物进行了分析,并邀请专业品酒委员进行了感官品评。研究结果发现,利用Ondea Pro酶生产的麦汁,能够满足酵母发酵需求,然而大麦啤酒存在明显的麦香缺陷。通过额外添加不同比例的焦香麦芽,分析大麦啤酒中主要麦香物质的变化规律,结合感官品评,结果表明添加1%的焦香麦芽酿造而成的大麦啤酒,其主要麦香物质和品评口感与麦芽啤酒接近。添加少量焦香麦芽生产的大麦啤酒市场潜力具大,极具推广价值。      

Transfer of aflatoxin B1 and fumonisin B1 from naturally contaminated raw materials to beer during an industrial brewing process

The aim of this research was to determine the fate of aflatoxins (AFs) and fumonisins (FBs) naturally occurring in raw materials (maize grit and malted barley) during four industrial brewing processes. The aflatoxin B₁ (AFB₁) level in raw materials varied from 0.31 to 14.85 µg kg^?1, while the fumonisin B₁ (FB₁) level (only in maize grit) varied from 1146 to 3194 µg kg^?1. The concentration in finished beer ranged from 0.0015 to 0.022 µg l^?1 for AFB₁ and from 37 to 89 µg l^?1 for FB₁; the other aflatoxins and fumonisin B₂ were not found in beer samples. The average percentage of toxins recovered in finished beer, referring to the amounts contained in raw materials, were 1.5% ± 0.8% for AFB₁ and 50.7% ± 4.7% for FB₁. These results were mainly due to the different solubility of the two mycotoxins during the mashing process. If raw materials comply with the limits fixed by European Commission Regulations, the contribution of a moderate daily consumption of beer to AFB₁ and FB₁ intake does not contribute significantly to the exposure of the consumer.     

Determination of ochratoxin A in brewing materials and beer by ultra performance liquid chromatography with fluorescence detection

In 2008–2009 the total set of 237 samples of malting barley, malt, hop, wort, and beer was analysed for ochratoxin A (OTA) contamination using the ultra performance liquid chromatography (UPLC) coupled to fluorescence detection (FLD). The UPLC method is a fast technique with low limits of detection and quantification (LOD and LOQ) compared to other methods used routinely. LOD and LOQ values were 0.0003 and 0.001 ng/ml for beer, 0.05 and 0.2 μg/kg for barley and malt, 0.16 and 0.5 μg/kg for hop, respectively.     

同时检测玉米中黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制

研究制备了一种可同时快速定量检测黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1,AFB1)和赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的二联时间分辨荧光免疫层析试纸条.采用铕系时间分辨荧光微球分别标记AFB1和OTA单克隆抗体,优化荧光微球活化pH值、标记的抗体浓度、荧光探针使用量、检测线包被原浓度、质控线羊抗鼠Ig...     

固相微萃取-气相色谱/串联质谱在线酯交换测定啤酒原料的亚油酸甘油酯

利用固相微萃取气相串联质谱（SPME-GC-MS/MS）在线酯交换建立了定量分析啤酒原料（麦芽和大米）的亚油酸甘油酯的方法。通过研究不同因素对酯交换及萃取效果的影响,确定在线酯交换固相微萃取的最佳条件:2.0mL样品稀释液添加0.75mL氢氧化钾/甲醇（10.7mmol/L）和1.0g氯化钠,用85μmPA萃取头在65℃下酯交换和萃取60min。为降低基体效应对定量准确性的影响,以三亚油酸甘油酯为外标分别建立了麦芽和大米的标准曲线。该方法在麦芽和大米中检出限为0.132、0.579μg/g,三亚油酸甘油酯加标回收率为116%和114%。此方法相比于传统方法,所需样品量少、准确性高、操作过程简便,适用于啤酒原料的亚油酸甘油酯的日常高效检测。      

郫县豆瓣加工过程中黄曲霉毒素B1的变化及关键控制点研究

采用酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒法测定豆瓣在加工过程中各关键环节样品（包括制曲过程、甜瓣子发酵、辣椒醅发酵和豆瓣酱的后熟期等阶段）的黄曲霉毒素B1（AFB1）含量的变化,探究影响AFB1含量的关键控制点,为以后降低豆瓣中AFB1含量的研究提供方向。测定结果表明,豆瓣制曲阶段AFB1含量变化不明显,在0～0.25 μg/kg范围内;甜瓣子发酵过程和豆瓣酱后熟阶段AFB1含量呈显著上升趋势,从甜瓣子发酵初期的0.175 μg/kg增加至1.09 μg/kg,最后到成熟豆瓣酱的2.63 μg/kg;辣椒醅阶段AFB1含量总体保持稳定,为0.80 μg/kg。由于AFB1含量从制曲后期到豆瓣酱的成熟总体呈上升趋势,且甜瓣子的发酵阶段与豆瓣酱的后熟期是控制豆瓣AFB1含量的关键点,应加强对相关操作及其环境的控制与管理。