发酵条件对根霉产脂肪酶的影响

通过单因素实验和正交实验,对MHL4.07菌摇瓶发酵产脂肪酶的培养基组成和培养条件进行了研究,结果表明:最佳发酵培养基配方为橄榄油15.0g/L、玉米浆40.0g/L、NH4Cl20.0g/L、豆饼粉20.0g/L、MgSO40.5g/L、KH2PO410.0g/L、KCl1.0g/L。最佳发酵条件为种子培养84h、接种量7%、初始pH6.5、装液量50mL/250mL三角瓶,培养温度28℃,摇床转速160r/min,发酵培养96h。在此条件下,最高脂肪酶产量达到60.54U/mL,比优化前提高了44.5%。     

根霉ZM-10产脂肪酶发酵条件的研究

通过对从酒厂筛选出的1株根霉Rhizopus ZM-10产脂肪酶发酵条件的研究,得到较优培养基配方为:蔗糖3%、蛋白胨1%、豆饼粉3%,初始pH8.0.产酶的最适温度为30℃,培养周期为72 h.在此条件下所得的脂肪酶,在有机相中催化己酸乙酯的作用显著提高.     

根霉脂肪酶降解壳聚糖条件研究

以德氏根霉(Rhizopus delemar)为菌种,采用固态发酵法生产脂肪酶,并用此酶对壳聚糖进行非专一性水解.研究了脂肪酶降解壳聚糖的多种影响因素,包括温度、pH、底物浓度、酶浓度、反应时间和常见金属离子等.结果表明,在45℃、pH5.0务件下,该脂肪酶能显著地降解壳聚糖,反应6h后,壳聚糖溶液的粘度即下降为原溶液的8%.适当增加酶浓度可使降解速度加快,但此酶促反应不遵循Michealis-Menten动力学方程.     

根霉脂肪酶发酵优化和酶性质的研究

对少根根霉发酵条件进行了优化.对比了二十余种碳源和氮源,正交实验选出根霉产脂肪酶的最优培养基:全脂豆粉4%,MgSO4 0.1%,K2HPO4 0.5%,(NH4)2SO4 0.2%,花生油1%,pH自然.特别对复合氮源进行了研究,有机复合氮源效果不大,有机氮源和无机氮源复合可获得较高的酶活.在温度26.5℃,转速130r/min,装液量70～100mL,上述培养基条件下,发酵酶活力最高单位315 U/mL.另外考察了酶的基本性质,利用该株菌产脂肪酶催化合成单甘酯取得良好的效果,说明该株少根根霉脂肪酶有良好的1,3位置专一性和催化活性.     

1株耐热脂肪酶产生菌的筛选及产酶条件研究

通过固体平板法,从食堂下水道污泥中筛选到1株耐热脂肪酶产生菌LJM-1,采用摇床培养法对该菌株的产酶条件进行了研究,结果表明,该菌株产脂肪酶的适宜培养基组成是:玉米粉淀粉6.0%﹑酵母粉3.5%﹑KH2PO40.3%﹑MgSO4.7H2O0.05%、(NH4)2SO40.5%﹑NaCl0.1%;适宜培养条件:培养温度40℃,初始pH7.7,摇床转速150r/min,装液量100mL/250mL三角瓶,接种量2.5%(体积分数),种龄72h,发酵时间48h。在此条件下,脂肪酶最高酶活为112.6U/mL。在单因素试验的基础上,采用正交试验对棉粕发酵脱毒条件进行了优化,得到最佳发酵条件是:初始pH7.7,培养温度40℃,接种量1.5%,发酵周期2d,酶活力达131.6U/mL。     

低能N~+离子注入选育少根根霉脂肪酶高产菌株

以提高霉菌脂肪酶产量为目的,采用低能N+离子注入技术,对少根根霉BUCT-11进行了诱变选育研究。结果表明:经N+离子注入诱变,筛选到高产脂肪酶突变株N103,在摇瓶发酵条件下,测得脂肪酶水解酶活为175U/mL,为出发菌株产量的165%,且具有较好的遗传稳定性。     

用筛选抗性突变株法选育碱性脂肪酶的高产菌

以圆弧青霉白色变株ＰＢ２２７ 为出发株⒙通过多次诱变⒙筛选抗真菌抗生素的抗性株和抗底物、底物结构类似物或分解产物的抗性株⒙获得一株己酸抗性突变株ＰＧ３７⒙其产酶水平比出发株ＰＢ２２７ 菌株提高了１．５ 倍⒙达到５５７ μｍ ｏｌ／⒉ｍ ｉｎ·ｍ Ｌ⒕．ＰＧ３７ 所产脂肪酶的最适作用ｐＨ 为１０．０⒙最适作用温度为２５ ℃⒙在ｐＨ ７．０～１０．５ 范围内稳定．     

低能N+离子注入选育少根根霉脂肪酶高产菌株

以提高霉菌脂肪酶产量为目的,采用低能N+离子注入技术,对少根根霉BUCT-11进行了诱变选育研究。结果表明:经N+离子注入诱变,筛选到高产脂肪酶突变株N103,在摇瓶发酵条件下,测得脂肪酶水解酶活为175U/mL,为出发菌株产量的165%,且具有较好的遗传稳定性。      

酒曲根霉的诱变育种

本试验对根霉RA-1菌株进行NaNO2诱变和紫外线诱变,得到一株低聚糖酶活力较高的菌株,酶活力达到4360(U/g干曲),比出发菌株提高403.7%,液化酶比出发菌株提高到486.2%,达到1953(U/g干曲),糖化酶提高到出发菌株的567.8%,达到2.55×105(U/g干曲),将该菌株进行斜面传代,产酶稳定。     

核糖霉素高产菌株的选育

目的选育核糖霉素高产菌株,提高其生产发酵水平。方法以核糖苷链霉菌03-8为出发菌株,经紫外线和氯化锂复合处理后,再采用微波诱变,筛选自身产物抗性解除反馈调节突变株,同时结合单菌落自然分离纯化法进行选育。结果获得了稳定高产菌株563-44,比出发菌株产量提高201.1%,其生产能力在5吨发酵罐试验中得到验证。结论变异株563-44确实是1株高产的工业生产菌种。     

一株产高温β-半乳糖苷酶低温菌株及其酶学性质研究

从101株低温菌中发现了1株产高温β-半乳糖苷酶菌株G2005,依据形态特征与生理生化反应特性,参照《常见细菌鉴定手册》将其鉴定为乳球菌Lactococcus sp.。该菌株高温β-半乳糖苷酶的最适pH值为6.5,最适作用温度为50℃,65℃相对酶活为总酶活的19%,在30~60℃范围内,具有较好的稳定性。不同金属离子对β-半乳糖苷酶活性的影响为:Mg2+>Na+>K+>Fe2+>Ca2+>Zn2+>Mn2+>Hg2+>Cu2+。Mg2+增强酶活,而Hg2+、Cu2+、Mn2+抑制酶活。经测定该酶Km值为96.8 mmol/L,具高温酶特性。该菌株的最适产酶条件分别为30℃培养48h~60h,培养基初始pH 6.5,培养基乳糖浓度为2%。     

α-葡萄糖苷酶高产菌株诱变选育的研究

α-葡萄糖苷酶是生产异麦芽低聚糖的关键酶.本文以α-葡萄糖苷酶产生菌黑曲霉M-1为出发菌株,经UV、UV-LiCl复合诱变和60Co 诱变选育,成功筛选出了一株遗传稳定性较好的高产菌株C-1,其产酶活力是出发菌株的2.7倍.有望将来应用于异麦芽低聚糖的生产中.     

Lipase production by Rhizopus oryzae growing on different carbon and nitrogen sources

Nitrogen and carbon sources influencing the growth and production of lipase by Rhizopus oryzae were studied. High yields of enzyme activity were obtained when proteose peptone was the nitrogen source in media with olive oil (MWO) and without olive oil (MWHO). Carbon sources increased lipase activity in MWHO but decreased it slightly in the presence of oil. Lipase activity was significantly (P < 0.5) higher in MWO than in MWHO. Biomass concentration was also higher in the presence of oil. Industrial by-products bran and whey have been used as efficient media for the production of lipase by R oryzae. © 1999 Society of Chemical Industry     

根霉ZM-10脂肪酶的分离纯化和活性部位的化学修饰

根霉ZM-10脂肪酶经过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose FF阴离子交换层析、SephardexG100凝胶过滤层析得到电泳纯脂肪酶,分子量约为42 ku,纯化倍数15.3倍,酶活回收率22.2%。采用NBS、EDC、DEPC、CH-T、PMSF、DTNB等6种化学修饰剂对根霉ZM-10脂肪酶进行化学修饰和底物保护实验,研究了其分子中氨基酸侧链基团与酶活性中心的关系。实验结果表明,酸性氨基酸(天冬氨酸?谷氨酸)残基、组氨酸残基、丝氨酸残基、色氨酸残基为根霉ZM-10脂肪酶活性的必需基团。酶分子中酸性氨基酸(天冬氨酸?谷氨酸)残基、组氨酸残基和丝氨酸残基位于根霉ZM-10脂肪酶的活性中心部位,而色氨酸残基在保持脂肪酶活性中起到重要作用,但其不位于根霉ZM-10脂肪酶的活性中心部位。     

根霉ZM-10脂肪酶部分纯化及酶学性质研究

本实验室以合成己酸乙酯的转化率为指标,从酒厂筛选到一株合成己酸乙酯活性较高的根霉ZM-10,本实验以该菌株为出发菌种,将其脂肪酶进行部分纯化后,研究了酶学性质.结果表明,根霉脂肪酶的最适反应温度为25℃;在20℃时具有较好的稳定性,该酶在30℃80min后,残活还有31.9%;脂肪酶在pH7.0和8.0有较好的稳定性:2mmol/L金属盐离子浓度时,Na 、Cu2 、Fe3 、EDTA对脂肪酶的活力有一定的促进作用,在5mmol/L时,除Cu2 外,其他金属离子均表现出不同程度的抑制作用;表面活性剂CTAB和Tween-80对脂肪酶活性有一定的抑制作用,SDS改善作用比较大;在最适反应条件下的动力学常数Km和Vmax分别为18.2mmol/L和625U/L.     

高产、大分子透明质酸突变菌株NUF-036的选育

对兽疫链球菌NUF-035进行紫外诱变,得到突变菌株NUF-036,使透明质酸的产量从1.8 g/L提高到3.0 g/L,相对分子质量从2.1×10~6提高到3.2×10~6,突变株经多次传代,透明质酸产量及相对分子质量保持稳定.     

毕赤酵母分泌表达华根霉脂肪酶（r27RCLC）的糖基化鉴定

研究了毕赤酵母GS115中能够高效分泌表达的华根霉脂肪酶(r27RCLC)的糖基化情况。运用糖基化抑制剂衣霉素处理表达目的蛋白的毕赤酵母细胞,通过SDS-PAGE比较分析经衣霉素处理后的脂肪酶r27RCLC分泌表达量的变化,结果显示酶的分泌表达受到很大的抑制,说明脂肪酶r27RCLC在表达时候很可能发生了糖基化,且糖基化对其有重要影响。通过生物化学方法,利用内切糖苷酶PNGase F和Endo Hf酶切处理脂肪酶r27RCLC,SDS-PAGE和Western Blot,结果显示r27RCLC未发生糖基化。将样品r27RCLC通过胰蛋白酶酶解等步骤处理,进行MADLI-TOF-MS质谱分析,结果发现MADLI-TOF-MS鉴定结果与内切糖苷酶酶切处理结果一致,进一步证明毕赤酵母分泌表达的华根霉脂肪酶r27RCLC未发生糖基化。