啤酒腐败菌预增菌及其PCR快速检测的研究

本试验以啤酒腐败菌的快速检测为目标,以培养基碳源,培养温度,培养基pH为单因素,研究其对啤酒腐败菌快速增殖的影响,并在此培养条件下,用PCR技术检测腐败菌。结果表明：以菊粉作为碳源有利于菌体的快速生长,培养温度在27℃时菌株生长最快,培养基pH值为4．7时菌株的生长最快;当细胞初始浓度为10CFU／mL时,仅需增殖30h即可用PCR法检测出腐败菌,比传统平板培养法缩短3～5d,大大提高了检测效率。     

啤酒有害乳酸菌PCR引物的设计与验证

根据乳酸菌16SrDNA序列的特征，设计合成了针对啤酒有害乳酸菌的通用引物，在16SrDNA基因水平上采用聚合酶链式反应（PCR）技术鉴定了啤酒中59株有害乳酸菌的种类。同时根据鉴定结果设计了8种乳酸菌的特异引物，PCR技术验证结果表明该8种特异引物能够准确鉴定乳酸菌。     

基于16s rDNA的PCR快速鉴定啤酒腐败菌的研究

从Genebank中下载啤酒腐败菌所在属的63种细菌的16s rDNA序列，用DNAstar软件进行序列对比分析，找出这63种细菌16s rDNA序列所共有的5条同源序列，以这5条同源序列为基础设计出一对适合所有腐败菌的通用引物：上游：5’-GAACAGGATTAGATACCC-3’，下游：5’-GACTFAACCCAACATCTCAC-3’。利用该对引物，可以检测出啤酒厂出现的8种腐败菌，而对啤酒厂出现的13种非腐败菌则不能检出，保证了该引物对啤酒腐败菌的特异性。     

PCR技术检测啤酒中腐败菌的研究进展

对传统方法和PCR技术检测啤酒中腐败菌的原理进行了分析和比较,对传统检测方法更有优势的PCR检测技术进行了综述。综合分析了目前国内外PCR技术检测的最新研究,重点讨论了标志性基因（抗酒花基因）和引物设计在PCR检测技术中应用,并对PCR技术检测啤酒中腐败菌的应用前景进行了分析。     

啤酒腐败菌的分离鉴定及对啤酒的危害

从啤酒厂分离到31株啤酒腐败菌。对其进行了AP150CHL试剂条生理生化反应试验。并测定了这3l株菌的16SrDNA部分序列，与Genebank中已知序列进行了比较，并以此为依据进行了系统进化关系分析。结果表明，31株啤酒腐败菌分属于5个种，部分腐败菌对啤酒风味有不良影响。     

啤酒腐败菌分子检测技术的研究进展

对啤酒腐败菌检测中分子检测技术应用的研究进展作一综述。内容包括聚合酶链式反应，限制性片段长度多态性，免疫学技术，核酸杂交，伏安型生物传感器。     

几种啤酒腐败菌的探讨

1　啤酒腐败菌需要控制的原因啤酒的生产工艺流程大致如下:　　　　　　淀粉酶　　　　　　酒花　　　　　　　↓　　　　　　　　↓原料→粉碎→糊化→糖化→过滤→煮沸→冷却→发酵→　　　　　　　　　　　　　　　　　　　↑　　↑　　　　　　　　　　　　　　　　　无菌空气　种酵母→过滤→灌装→杀菌→贴标→成品在啤酒酿造过程中,对有害微生物的主要控制在:11　麦汁经过强烈煮沸杀菌。12　在煮沸麦汁中添加酒花,酒花中的α-酸,对啤酒酿造中污染革兰氏阳性菌和部分野生酵母有较好的抑制能力。13　大量接种种酵母,取得酵母生长优势。…     

普通聚合酶链式反应鉴定牛肉及其制品中的牛源性成分

依据牛种属的线粒体细胞色素b(cytochrome b,Cytb)基因上的保守序列设计牛源特异性引物对,建立一种特异性强、灵敏性高、耗时短的鉴定食品中牛源性成分的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。选取牦牛、水牛、黄牛品种及羊、猪、鸡、鸭、鹅、兔、马、驴、鱼、大豆、玉米等动植物源成分进行特异性试验。结果显示:所建立的方法高度特异于牛源性检测,其他非牛动植物源成分均无扩增条带。采用常见的牛品种进行灵敏性试验,结果显示所建立的方法可检测到的最低牛DNA量为0. 2 pg;将牛肉分别与猪肉、驴肉、羊肉、大豆组织混合进行PCR测定,结果表明最低检测限为鲜样品含0. 01%质量分数的牛源成分,高压121℃、0. 1MPa,20 min处理样品含0. 01%质量分数的牛源成分。对市售食品中牛源性成分检测结果与现行PCR牛源性成分检测标准方法的检测结果 100%一致。     

PCR技术在啤酒有害菌检测中的关键技术研究

本研究以16s rDNA 为基础设计引物,利用 PCR 技术和传统的培养方法检测污染菌株作了比较,研究结果表明使用 PCR 技术检测啤酒有害菌的优势,完成检测与鉴定,可以将传统的检测时间由5～7天缩短到3天。试验中还对使用 PCR 技术检测发酵液（高泡期和贮酒期）、成品酒的方法进行了设计和优化,并对使用电泳条带的 OD 值半定量判定合格标准进行了初步研究。     

啤酒腐败菌分子检测技术的研究进展

对啤酒腐败菌检测中分子检测技术应用的研究进展作一综述.内容包括聚合酶链式反应,限制性片段长度多态性,免疫学技术,核酸杂交,伏安型生物传感器.     

EMA-PCR法快速检测啤酒中腐败短乳杆菌

将叠氮溴乙锭(ethidium bromide monoazide,EMA)与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术相结合,以酒花耐受基因hor C为靶基因,用啤酒腐败短乳杆菌基因组DNA作为模板进行扩增。结果发现,在前处理过程中加入EMA,当终质量浓度小于20μg/m L时,对活的短乳杆菌中靶基因的扩增没有明显抑制作用;而当EMA终质量浓度为1.0μg/m L时可有效抑制10~5 CFU/m L短乳杆菌死细胞的扩增。本实验建立的EMA-PCR检测方法的灵敏度为10~4活细胞/m L酒液样品。验证实验结果表明,在13株乳酸菌中,建立的hor C特异性EMA-PCR能有效检测到其中的全部5株啤酒污染菌,同时可区分这5株菌的活/死细胞混合体系,降低检测过程中的假阳性。     

啤酒污染乳酸菌PCR引物的设计与验证

根据细菌16SrDNA序列的特点,对啤酒中常见污染乳酸菌16SrDNA序列进行分析,设计合成了针对啤酒污染乳酸菌的特征引物。并用该引物对从啤酒厂分离到的7种乳酸菌进行了检测,PCR结果表明该引物能够准确检测到啤酒中常见的乳酸菌。     

啤酒有害菌的PCR检测和SYBR Green实时PCR定量

啤酒有害菌是一些能在啤酒中存活并使啤酒的外观和风味发生改变的细菌,对其进行快速检测和定量是啤酒生产急待解决的问题。我们从华润雪花啤酒（中国）有限公司各工厂提供的样品中分离到28株啤酒有害菌,16S rDNA序列的系统进化分析表明,其中26个菌株属于乳杆菌属（Lactobacillus spp．）、1个菌株为明串珠菌属（Leuconostoc spp．）,1个菌株为片球菌属（Pediococcu sp．）。根据酒花（hop）抗性基因horA、horB和horC的保守序列设计了扩增这3个基因的PCR引物,用这些引物对28株啤酒有害菌进行了常规PCR检测,检出率分别为89％、79％和75％,用hor A—horC双引物进行检测,检出率为100％。用SYBR Green实时定量PCR技术,以horA基因为靶序列,建立了对啤酒有害菌的细胞数进行快速定量的新方法,用该方法测定的污染啤酒样品中有害菌的浓度与平板培养法相近。     

啤酒有害菌检测培养基的比较

比较了乳酸短杆菌、四联球菌、醋化醋酸杆菌在NBB、MRS、Raka -Ray、VLB -S7、番茄汁培养基、自配培养基A和自配培养基UBA上的菌落生量。结果表明 ,NBB对乳酸杆菌的检测效果最好 ,乳酸菌在自制配养基UBA上不生长。 7种培养基对四联球菌的检测效果相当。醋酸是绝对好氧菌 ,在厌氧条件下不生长。     

啤酒污染微生物检验培养基的比较研究

研究了5种啤酒生产中常用的微生物检验培养基的检出效果.结果显示,LMDA李氏多级选择性培养基的检出效果是最好的.比较了啤酒生产中分离的污染菌的模拟污染检出效果,弄验证了LMDA培养基的检出效果.     

一种啤酒有害菌中的乳酸菌的PCR检测

本文对工厂送来的有害菌样品进行划线纯化后,分别命名为TJl、TJ2、TJ3、TJ4、TJ5、TJ6和TJ7,并制成冻存管保存于-70℃冰箱。从中挑选TJ2、TJ3采用PCR（PolymeraseChainKeac—tion）m进行了分子生物学的菌种鉴定—16srRNA菌种鉴定实验,经鉴定为乳酸菌属。使用乳酸菌特异性引物对上述有害菌进行鉴定。证明其引物LbHC一1／LbHC一2可以用于乳酸菌的检测。     

PCR扩增法鉴定年糕中腐败细菌的初步研究

采用平板划线分离方法,从腐败年糕中分离得到疑似腐败菌.对分离、纯化培养获得的7株疑似菌进行16S rDNA基因序列测定及系统发育树分析等方面的分子鉴定,结果表明7株菌分为芽孢杆菌和短芽孢杆菌(RC1)2属.其中芽孢杆菌属中的6株菌又分为解淀粉芽孢杆菌(RC7)、芽孢杆菌(RC2)和枯草芽孢杆菌(RC3、RC4、RC5、RC6)3个种.     

肉制品中亚硝酸盐测定能力验证

为加强肉制品安全监督管理,进一步提升检验检测机构对肉制品中亚硝酸盐含量的检测能力,确保提供的检测数据准确、可靠,组织实施肉制品中亚硝酸盐含量检测能力验证计划。制备含亚硝酸钠的鸡肉火腿肠,向42家实验室随机发放样品,在规定时间内回收检测数据。对检测结果进行稳健统计分析,以Z值评价各个实验室的检测能力,并对非满意结果的实验室通过查阅原始记录进行技术分析。结果表明：制备的能力验证样品均匀、稳定,满足能力验证计划要求;42家实验室总体结果满意率为81.0%,表明实验室对肉制品中亚硝酸盐含量的检测能力较好;部分实验室发现检测过程中所存在的问题,并加以改正,使自身检测能力进一步提高。     

肉中4种致病菌的PCR快速检测方法的建立

目的:建立一种能同时检测肉中金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门氏菌和单核增生李斯特菌的多重PCR检测方法。方法:根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)、沙门氏菌的侵袭蛋白基因(invA)、志贺氏菌的侵袭性质粒抗原基因(ipaH)和单核细胞增生性李斯特菌的内化素基因(inlA)设计引物,通过优化好的反应体系进行多重聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因。结果:特异性实验结果表明4种菌均能在相应位置扩增出特异性条带。对污染4种菌的猪肉进行检测,确定出金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的检出限是102CFU/mL,志贺氏菌和单核增生李斯特菌的检出限是101CFU/mL。结论:本实验建立的多重PCR方法比传统细菌检测方法更特异、快速、灵敏,适用于肉中金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、沙门菌和单核增生李斯特菌的快速检测。