苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的干预作用

目的:观察苦参碱对人胚肺成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法:选择苦参碱为干预药物,以不同浓度梯度作用于体外培养的人胚肺成纤维细胞,采用MTT法检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和凋亡率。结果:MTT结果显示,各干预组对HFL-1细胞生长均有显著抑制增殖作用,其强度呈时间-剂量依赖性。苦参碱作用于HFL-1细胞48 h后,各干预组细胞总凋亡率均明显高于对照组(P<0.05);与对照组比较,苦参碱各浓度组HFL-1细胞G0/G1期百分率显著上升(P<0.05)。结论:苦参碱可在一定程度上抑制人胚肺成纤维细胞增殖,并诱导其凋亡。     

溶血磷脂酸对人肺成纤维细胞I型胶原合成的影响

目的探讨溶血磷脂酸（lysophosphatidic acid,LPA）对人肺成纤维细胞（HFL-1）I型胶原（procollagentype I,PCOL I）合成的影响。方法将HFL-1培养后置于6孔板中,随机分为6组：对照组,LPAI、Ⅱ、Ⅲ组（用1umol．L-1。的LPA刺激6、12、24h后收集细胞）,IL-13组（用100ug·L-1的IL-13作用48h后收集细胞）,LPA＋IL-13组（用1umol·L-1的LPA刺激12h、100ug·L-1的IL-13刺激48h后收集细胞）,每组3孔。用RT—PCR方法检测PCOLImRNA的表达;用免疫组化方法检测PCOLI蛋白的表达。结果免疫组化与RT—PCR方法均显示LPA刺激后,PCOLI的表达降低,IL-13刺激后,PCOLI的表达增高,且LPA＋IL-13组PCOLI表达比LPA组较高,比IL-13组较低。结论LPA可以下调HFL-1PCOLI的合成。     

丹参对人尿道狭窄成纤维细胞增殖的影响

目的:观察丹参对人尿道狭窄成纤维细胞(human urethral stricture fibroblasts,HUSF)增殖的影响,为预防及治疗尿道狭窄探寻新的思路及方法。方法:组织块法原代培养人尿道狭窄成纤维细胞,取第4-6代细胞冻存用于实验;将不同剂量的丹参含药血清加入HUSF分别培养24 h、48 h和72 h后,使用四唑盐比色法检测丹参对体外培养HUSF增殖的影响,利用增殖标志基因增生细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫组织化学染色检测丹参对HUSF生长活性的影响,利用流式细胞术检测丹参对HUSF细胞周期的影响。结果:随丹参剂量增加和时间延长,体外培养HUSF的吸光度(OD值)逐步降低(P<0.05)。HUSF的PCNA免疫组织化学染色的阳性率随丹参剂量增加而降低(P<0.05)。流式细胞仪检测可见,丹参剂量越大,体外培养HUSF被阻断于G1期的细胞数量越多(P<0.05)。结论:丹参可显著抑制HUSF的增殖,且抑制效果随丹参剂量及作用时间的增加而增强。     

SAHA对TGF-β1诱导的人胚肺成纤维细胞胶原蛋白表达的影响

目的探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)对转化生长因子-β1(TGF-β1)所诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)胶原表达的影响。方法体外培养人胚肺成纤维细胞系HELF,并分为空白对照组、SAHA组、TGF-β组以及SAHA+TGF-β组。其中空白对照组加入等体积PBS;SAHA组加入5μmol/L SAHA;TGF-β组加入终浓度为5 ng/mL TGF-β1孵育24 h;SAHA+TGF-β组在TGF-β组基础上分别加入0.5、2.0、和5.0 mol/L SAHA,共同孵育24 h。处理结束后,获取培养上清,比色法测量羟脯氨酸(HYP)的含量,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HELF细胞中Ⅰ、Ⅲ型前胶原的mRNA表达水平。结果对照组脯氨酸表达极低,TGF-β1处理后,羟脯氨酸含量达12.684±1.485μg/mL。当分别用0.5、2.0、和5.0 mol/L SAHA处理后,HYP含量随着SAHA浓度的增加而减少(P<0.05);SAHA孵育24 h后,能够明显抑制TGF-β1刺激后的细胞表达Ⅰ型和Ⅲ型前胶原蛋白mRNA,并且具有明显的剂量依赖性(P<0.05)。结论 SAHA能减少TGF-β1诱导的HELF羟脯氨酸含量及Ⅰ、Ⅲ型前胶原蛋白表达,这可能是其抗纤维化的重要机制。     

羧甲基壳聚糖水凝胶的合成及其对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

制备了一系列羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMCS)-京尼平水凝胶。通过向CMCS中加入不同浓度的氯化钙溶液,然后与京尼平进行交联反应合成水凝胶,用三硝基苯磺酸(TNBS)法测定自由氨基含量,考察添加钙离子的浓度对CMCS水凝胶中自由氨基含量的影响。通过在水凝胶上培养人皮肤成纤维细胞,用CCK-8法测定细胞增殖结果,考察了水凝胶中自由氨基浓度对人皮肤成纤维细胞增殖的影响。结果表明,随着添加的钙离子浓度的提高,水凝胶中自由氨基的浓度降低,人成纤维细胞增殖能力提高。     

烟草对人牙龈成纤维细胞影响的研究进展

吸烟日益成为当前乃至未来威胁人们健康的最大危险因素之一。香烟中有毒物质(尼古丁、可替宁、丙烯醛等)会引起一系列的口腔问题,如牙周炎等[1]。人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)在牙龈结缔组织细胞中占主导地位,对于牙龈的重塑和正常结构的维持起着决定性作用,也与口腔种植体的长期稳定密切相关。研     

乳鼠成纤维细胞在人血清中的存活与增殖的研究

目的:本研究旨在证明人血清直接培养乳鼠成纤维细胞是可行的。方法:将乳鼠成纤维细胞分别在胎牛血清及人血清中培养,通过在显微镜下观察成纤维细胞形态及密度,同时用MTT比色法检测吸光度来对比成纤维细胞在胎牛血清及人血清中的增殖活性。结果:两种实验方法均显示:两组成纤维细胞在第一天的增殖活性无显著性差异,第四天人血清组的成纤维细胞增殖明显比胎牛血清组活跃。结论:乳鼠成纤维细胞在人血清中不仅可以存活,而且有增殖行为。     

与乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-1表达上调及意义

目的探索乳腺癌间质成纤维细胞对乳腺癌作用的分子机制,研究与人乳腺癌细胞共培养的人成纤维细胞特异蛋白-l(fibroblast-specific protein-1,FSP-l)的表达及对乳腺癌生长的影响。方法 Transwell方法共培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231和人成纤维细胞株ESF;实时RT-qPCR检测共培养的MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1mRNA水平;免疫荧光流式细胞仪检测共培养MDA-MB-231和ESF细胞FSP-1蛋白表达水平;Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测MDA-MB-231细胞的增殖;免疫荧光激光共聚焦显微镜观察荷瘤裸鼠乳腺癌组织FSP-1的表达,检测FSP-1对荷瘤裸鼠肿瘤体积的影响。结果 MDA-MB-231细胞和ESF细胞共培养可上调ESF细胞表达FSP-1并促进MDA-MB-231细胞增殖;ESF+MDA-MB-231组MDA-MB-231细胞表达FSP-1,但在MDA-MB-231组未检测到FSP-1蛋白表达;荷瘤裸鼠MDA-MB-231细胞和ESF细胞共生长的癌组织高表达FSP-1并促进肿瘤生长。结论与人乳腺癌细胞共培养可上调人成纤维细胞FSP-1的表达并促进乳腺癌生长。     

红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的血管外皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察红景天苷对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,ANG-Ⅱ)诱导的大鼠血管成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法:采用细胞贴壁法培养SD大鼠胸主动脉AF,分为对照组,终浓度0.1μmol·L-1ANG-Ⅱ组,浓度为10μmol·L-1红景天苷组,浓度为20μmol·L-1红景天苷组,ANG-Ⅱ联用浓度为40μmol·L-1红景天苷组,浓度为80μmol·L-1红景天苷组,均作用24 h。MTT法检测细胞增殖活性,ELISA法测定细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量。结果:1与对照组比较,ANG-Ⅱ组能显著刺激VAF增殖(P<0.01);40μmol·L-1和80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较,能够显著抑制VAF增殖(P<0.05)。2与对照组比较,ANG-Ⅱ组能显著升高VAF培养上清液OD值(P<0.01);浓度为80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较,能显著降低VAF培养上清液中OD值(P<0.05)。结论:红景天苷能够通过抑制VAF增殖和Ⅰ型胶原蛋白表达,发挥抗血管重塑作用。     

冻存复苏及4℃存放对成纤维细胞的影响

目的:探索冻存复苏及4℃存放对细胞活性的影响。方法:培养细胞,冻存复苏后,利用台盼蓝染色和MTT法检测细胞的活性。结果:台盼蓝染色显示,未冻存的活力平均为96. 57±1. 21 (%),而冻存细胞的细胞活力平均为74. 29±2. 14 (%),两组有显著性差异(P <0. 01)。4℃保存的细胞存放超过3h以上(第4h开始),细胞的存活显著降低。两组细胞之间的吸光度也出现同样趋势。结论:细胞在4℃保存,3h内可保持活力不变。     

IL-27与LTB4在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的:探讨IL-27与LTB4在非小细胞肺癌组织中的表达情况及临床意义。方法:采用免疫组化S-P法分别检测60例非小细胞肺癌组织及正常肺组织中的IL-27与LTB4的表达水平。结果:IL-27与LTB4在肺癌组织中的总阳性表达率分别为41.67%、63.33%,各种检测指标的阳性率在肺癌组织与对照组之间均存在着差异性(P<0.05)。IL-27与LTB4的表达均与肿瘤的分化程度有关(P<0.05),IL-27的表达与肺癌的TNM分期相关(P<0.05),与病理类型无关(P>0.05)。LTB4的表达与组织学类型、临床分期无关(P>0.05),IL-27与LTB4之间存在密切相关性。结论:IL-27、LTB4与肺癌发生机制及发展有密切关系,联合进行检测两者表达水平对于肺癌临床诊断、评估恶性程度及判断预后有重要意义。     

重组人促红细胞生成素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其作用机制研究

目的 探讨重组人促红细胞生成素（recombinant human erythropoietin,rh-EPO）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其作用机制.方法 将人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞进行培养.传至5～6代,细胞生长状态稳定后,收集人乳腺癌 MDA-MB-231细胞用于MTT实验.采用MTT法检测 5 组（阴性对照组、rh-EPO A 组、rh-EPO B组、rh-EPO C 组和rh-EPO D 组）MDA-MB-231细胞增殖的情况.用10 μmol·L-1p38MAPK抑制剂SB203580、ERK抑制剂U0126、JNK抑制剂SP600125和NF-κB 抑制剂PDTC预处理人乳腺癌 MDA-MB-231 细胞后,用MTT法检测经100、200、300和400 U·mL-1的rh-EPO（PDTC＋EPO 组、SB203580＋EPO 组、SP600125＋EPO组和U0126＋EPO组）诱导后细胞增殖的情况.结果 阴性对照组、rh-EPO A 组、rh-EPO B组、rh-EPO C 组和rh-EPO D 组 72 h PI值分别为：1.000 0±1.000 0、1.231 8±0.133 0、1.323 9±0.136 0、1.351 7±0.146 0和1.423 1±0.084 0;96 h PI值分别为：1.000 0±1.000 0、1.352 5±0.036 0、1.359 7±0.112 0、1.387 2±0.063 0和1.410 8±0.060 0.rh-EPO A 组、rh-EPO B组、rh-EPO C 组和rh-EPO D 组 72、96 h PI值与阴性对照组比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）.PDTC＋EPO 组、SB203580＋EPO 组72、96 h PI值均较EPO组明显降低（均P＜0.05）,SP600125＋EPO组、U0126＋EPO组72、96 h PI值与EPO组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）.结论 rh-EPO可能是通过NF-κB、MAPK传导通路发挥效应,促进人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖.     

“广西大瑶山瑶族文化记忆研究”系列论文之四 瑶族歌谣的艺术特征与民族记忆表征

广西大瑶山瑶族歌谣不仅种类繁多而且具有独特鲜明的艺术审美特征,这些歌谣蕴含着深厚的文化内涵,它们是大瑶山瑶族历史记忆、生活习俗、民族交往、文化传承的民族记忆表征。研究大瑶山瑶族歌谣的类别与艺术特征,深入阐释其内在丰富的文化内涵,对拓展深化大瑶山瑶族文化的研究具有重要的价值与意义。     

既有建筑环境中甲醛浓度对小鼠肺组织及炎性细胞因子的作用

目的:研究既有建筑环境甲醛吸入对小鼠肺组织及炎性细胞因子表达的影响.方法:采用胶合板、粘合剂自制染毒室,染毒室甲醛平均浓度分别为0.28、0.73和1.21 mg/m3.染毒组小鼠每日染毒1次,每次4h,连续8d.8d后,取肺组织,HE染色,观察肺组织病理学改变,免疫组织化学方法观察肺组织TNF-α、IL-17、IL-6的阳性表达.结果:甲醛吸入组小鼠出现肺泡壁毛细血管扩张、充血,炎细胞浸润的病理改变;甲醛染毒组(0.28、0.73和1.21 mg/m3)小鼠肺组织TNF-α、IL-17表达明显高于正常对照组(P＜0.05);甲醛染毒组(0.73和1.21 mg/m3)小鼠肺组织IL-6表达较正常对照组明显增高(P＜0.01).结论:既有建筑环境甲醛可致小鼠肺组织病理损伤,炎性细胞因子TNF-α、IL-6、IL-17表达明显增强,提示炎性细胞因子参与了甲醛致肺组织损伤的病理发展过程.     

重组人BMP-2对人肝癌SSMC-7721细胞迁移和侵袭能力的影响

目的观察重组人骨形成蛋白2（rhBMP-2）对人肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力的影响。方法以人肝癌SMMC-7721细胞株为研究对象,取对数期生长的SMMC-7721细胞随机分为4组：rhBMP-2200、400、600ug·L。组和对照组。rhBMP-2200、400、600ug·L。组分别加入rhBMP-2200、400、600ug·L-1,对照组加入2mLRPMI1640培养基。分别于12、24、48h后,用细胞划痕法检测细胞体外迁移能力,Transwell小室测定法检测细胞体外侵袭能力。结果rhBMP-2200、400、600ug·L-1组12、24、48hSMMC-7721细胞迁移率与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,且rhBMP-2200、400、600ug·L-1组各组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。rhBMP-2200、400、600ug·L-1组12、24、48hSMMC-7721细胞穿膜数与对照组比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,rhBMP-2200、400、600ug·L-1组各组间差异具有统计学意义（P〈0．05）。rhBMP-2200、400、600ug·L-1组12、24hSMMC-7721细胞迁移率、细胞穿膜数与48h比较差异均有统计学意义（均P〈0．05）,浓度与时间无交互作用。结论BMP-2可增加入肝癌SMMC-7721细胞的侵袭和迁移能力,且呈时间-浓度依赖性;阻滞BMP-2的表达可能成为抑制肝癌转移的一个潜在靶点。     

穿心莲内酯对胃癌AGS细胞增殖侵袭的影响

目的观察穿心莲内酯(AD)对胃癌细胞增殖侵袭以及Na+-K+-ATP酶活性的影响。方法体外培养胃癌细胞系AGS,分别用1.0、3.0、5.0μmol/L穿心莲内酯作用24~72 h,无机磷法检测AGS细胞Na+-K+-ATP酶活性改变情况;MTT和ELISA分析AGS细胞的增殖与断裂DNA含量;同时采用ELISA检测血管内皮生长因子(VEGF)和转化生长因子β1(TGF-β1)的水平;荧光共振能量转移法检测基质金属蛋白酶9(MMP-9)的活性;小室侵袭实验检测细胞侵袭。结果 1.0~5.0μmol/L穿心莲内酯能显著降低Na+-K+-ATP酶活性,并能在此浓度下抑制AGS细胞生长增殖以及增加断裂DNA水平。同时,穿心莲内酯也能减少VEGF和TGF-β1的水平(P<0.05),降低MMP-9酶的活性,并能有效减少癌细胞的侵袭(P<0.05)。结论穿心莲内酯是一种有效的抗胃癌药物,它可能具有阻碍胃癌细胞侵袭的能力。