中药逆转肿瘤多药耐药的相关研究

多药耐药是化疗失败的关键因素。西药作为逆转剂,其不良反应往往难以耐受,并且作用靶点相对比较单一,价格昂贵,临床应用受到很大限制。中药逆转剂已经逐渐成为研究的热点,主要从单味中药和中成药提取物抗耐药两方面进行研究。单味中药主要研究川芎、榄香烯、全蝎、防己、冬凌草、苦参、砒霜、薏苡仁、鸦胆子,中成药主要研究生脉注射液、复方三根制剂、浙贝母散剂、拮新康。作者认为,中药逆转剂靶点相对广泛,价格低廉,不良作用较少,同时可以将中医的辨证思维融入整个治疗之中,根据患者证候来选择相应的中药逆转剂,但是由于耐药机制十分复杂,单一针对某一个机制的临床疗效并不是很好,一种化疗药物的耐药产生涉及到多个耐药机制的参与,如多种耐药基因、蛋白表达的改变,而这些研究仍处于基础研究阶段,并没有应用于临床,在体内的作用机制也均是凭一些临床经验进行判断。同时,某些中药的逆转机制还不是很明确。     

中医药逆转肿瘤细胞多药耐药的研究进展

查阅近年来关于中医药逆转肿瘤细胞多药耐药的相关文献,从中药复方、单味中药、中药注射剂、中药单体及穴位用药5个方面进行综述,力求为中医药逆转肿瘤细胞多药耐药的研究提供思路。     

PND对乳腺癌多药耐药的逆转作用分析

目的:探讨PND对乳腺癌多药耐药的逆转作用。方法:选取2014年1月-2015年1月本院收治的64例乳腺癌患者,按随机数字表法分为观察组和对照组,对照组给予化疗,观察组给予PND配合化疗进行治疗,观察两组临床疗效,比较免疫指标变化情况及患者生活质量。结果:观察组临床治疗总控制率为93.75%(30例),对照组为81.25%(26例);观察组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+及NK值均显著高于对照组;观察组躯体功能、角色功能、情绪功能、认知功能及社会功能等评分均高于对照组,比较差异均具统计学意义(P<0.05)。结论:PND对乳腺癌多药耐药具有显著逆转作用,改善患者免疫功能,对提高患者生活质量有重要意义。     

咯萘啶逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性及机制探讨

目的在明确咯萘啶(PND)逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药性的药效基础上,初步探索作用机制。方法采用MTT法检测单用阿霉素(ADM)和联用咯萘啶(PND)对人乳腺癌敏感细胞MCF-7和耐药细胞MCF-7/ADM的抑制作用,得出半数抑制浓度(IC50),并计算耐药倍数和逆转倍数。Western blot检测细胞中Fas和Caspases-3蛋白表达。结果 ADM对MCF-7和MCF-7/ADM的IC50分别为1.399μg/m L和43.885μg/m L,耐药倍数为31.4倍。PND(0.5μg/m L)联合ADM作用MCF-7/ADM的IC50为3.246μg/m L,逆转倍数为13.5倍,并能提高耐药MCF-7/ADM中Fas和Caspases-3蛋白表达。结论 PND能够逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药性,通过上调膜蛋白Fas表达,增加MCF-7/ADM对ADM的敏感性,从而促进细胞凋亡。     

阿霉素-姜黄素聚氰基丙烯酸正丁酯复方纳米粒的研制及逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药的研究

采用乳化聚合法制备阿霉素-姜黄素聚氰基丙烯酸正丁酯复方纳米粒(DOX-CUR-PBCA-NPs),该纳米粒平均粒径为133±5.34nm,Zeta电位为+32.23±4.56 mV,阿霉素(DOX)和姜黄素(CUR)的包封率分别为49.98±3.32%,94.52±3.14%。MTT实验结果和Western blott实验结果均表明,DOX-CUR-PBCA-NPs与CUR-PBCA-NPs+DOX-PBCA-NPs体外对MCF-7/ADR细胞的生长抑制活性相当,下调MCF-7/ADR细胞中P-糖蛋白(P-gp)的表达也相当,较没有用PBCA纳米粒包载的游离药物、单一药物的纳米制剂及其他形式的制剂联用的抗肿瘤活性及逆转多药耐药的性能都显著增强。说明利用PBCA纳米粒同时包裹抗癌药物阿霉素与中药逆转剂姜黄素协同用药可以增强克服多药耐药(MDR)的疗效。     

参慈胶囊联合顺铂对A549/DDP肺腺癌组织MDR1、MRP1、LRP表达的影响

目的:探讨参慈胶囊对人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内多药耐药相关基因的影响。方法:将50只C57BL/6小鼠接种人肺腺癌细胞A549/DDP细胞悬液建立实体瘤模型,随机分为对照组、参慈胶囊组、参慈胶囊+顺铂组、顺铂组,各10只。对照组予等量生理盐水,其余各组荷瘤小鼠均用药21 d,断颈处死取肿瘤组织,采用FQ-PCR技术检测人肺腺癌A549/DDP肺癌组织MDR1、MRP1、LRP m RNA的表达情况。结果:MDR1 m RNA、MRP1 m RNA、LRP1 m RNA在各组均有表达,各治疗组的MDR1m RNA、MRP1 m RNA、LRP1 m RNA均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);参慈胶囊+顺铂组的MDR1 m RNA、MRP1 m RNA、LRP1 m RNA的表达均明显低于参慈胶囊组和顺铂组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:通过降低MDR1、MRP1、LRP多药耐药相关基因的表达,可能是参慈胶囊逆转人肺腺癌A549/DDP裸鼠体内多药耐药的作用机制之一。     

MT1X siRNA对肺癌A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响

目的探讨金属硫蛋白1X(MT1X)在肺癌耐药细胞株(A549/DDP)顺铂耐药中的作用。方法通过化学合成针对MT1X的siRNA段抑制其在A549/DDP中的表达,实时定量聚合酶链反应(PCR)及WB检测干扰效果,MTT及平板克隆形成实验检测干扰前后细胞对顺铂的药物敏感性变化;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果针对MT1X的siRNA片段能在RNA及蛋白水平有效抑制其在A549/DDP中的表达;与对照组相比,MT1X表达被抑制后,肿瘤细胞对顺铂的敏感性明显升高;增殖被抑制,平板克隆形成率明显降低(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。结论针对MT1X的siRNA片段可部分逆转肺癌细胞(A549/DDP)对顺铂的耐受,为提高肺癌的化疗效率提供了一种新方法。     

PTEN/NF-κB/Caspase信号通路对K562/ADM细胞阿霉素耐药逆转机制的研究

目的:探讨PTEN/Akt/NF-κB信号通路对阿霉素耐药慢性粒细胞白血病细胞系K562/ADM细胞耐药逆转的分子作用机制。方法:将携带有野生型PTEN基因及绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)或空载体(Ad-GFP)腺病毒转染K562/ADM细胞,在转染3d内联合应用不同浓度阿霉素(ADM),观察PTEN基因对阿霉素的协同抑制作用,根据IC50计算药物逆转倍数。通过MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测转染效率、细胞凋亡率,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、NF-κB、I-κB、P53基因水平变化,Western blot检测PTEN、Akt、p-Akt、P65蛋白质水平变化。结果:Ad-PTEN-GFP转染与阿霉素联合作用后,K562/ADM细胞对阿霉素的敏感性增加,细胞增殖明显受抑,凋亡率明显高于Ad-GFP与阿霉素联合作用组,耐药逆转倍数为3.8倍。与Ad-GFP组相比,Ad-PTEN-GFP转染K562/ADM细胞3d后PTEN蛋白表达明显增加,p-Akt与P65蛋白表达明显下调,NF-κB mRNA表达水平下调,I-κB mRNA无明显改变,P53 mRNA表达轻度升高、Caspase-3/7活性增强。PTEN mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平负相关(r=-0.968,P<0.05),NF-κB蛋白活性与Caspase-3/7活性负相关(r=-0.986,P<0.05)。结论:野生型PTEN可能通过抑制PI3K/NF-κB/Caspase信号传导通路,逆转K562/ADM细胞的多药耐药。     

丹参饮加味方对胃癌细胞SGC-7901体外生长抑制及细胞周期的实验研究

目的:探讨丹参饮加味方对胃癌细胞SGC-7901体外生长情况及细胞周期的影响。方法:采用MTT法和流式细胞仪检测丹参饮加味方不同浓度和不同作用时间对胃癌细胞抑制率和DNA含量的变化。结果:与空白对照组相比较,丹参饮加味方各浓度组细胞抑制率明显升高(P<0.05),G0/G1期细胞DNA含量明显升高(P<0.05)。结论:丹参饮加味方能抑制体外胃癌细胞SGC-7901的生长,且能将胃癌细胞周期阻滞在G0/G1期。     

槲皮素联合伊马替尼体外抑制人胃癌SNU-1细胞生长和诱导细胞凋亡的研究

目的观察槲皮素联合伊马替尼对人胃癌SNU-1细胞生长和细胞凋亡的影响。方法以12.5~200.0μmol/L槲皮素和0.125~2.000μmol/L伊马替尼单药以及二者联合用药处理细胞24 h,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Hoechst 33342染色观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;用蛋白印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果槲皮素和伊马替尼单药均能使细胞活力降低,0.250μmol/L伊马替尼和2 5.0μmol/L槲皮素联合用药对细胞活力具有显著抑制作用,差异有高度统计意义(P<0.01),且可诱导人胃癌SNU-1细胞凋亡;二者联合处理还可以显著诱导半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)和半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的上调,差异有高度统计意义(P<0.01)。结论槲皮素联合伊马替尼能抑制胃癌SNU-1细胞的生长并诱导细胞凋亡,其作用机制主要是通过上调Caspase-9和Caspase-3的表达从而启动细胞凋亡来实现的。     

PUMA 对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：研究外源性 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响。方法制备 PUMA 基因并插入 pcDNA 3．1（－）质粒,观察其转染胃癌SGC-7901细胞后 PUMA 蛋白的表达并用 MTT 法检测细胞的增殖力[实验设3组,分别为无转染空白胃癌细胞对照（SGC-7901）组,空载质粒转染胃癌细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组及重组 PUMA 质粒实验（SGC-7901-pcD-NA3．1-PUMA）组]。结果PUMA 经限制性核酸内切酶切及测序分析,与预期结果吻合。转染质粒后,SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 PUMA 表达比较差异无统计学意义（P ＞0．05,相对表达量分别为0．24±0．01和0．23±0．01）,SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组与另2组比较 PUMA 表达明显增高（P ＜0．05,相对表达量为0．39±0．01）。SGC-7901、SGC-7901-pcDNA3．1和 SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组的 A 值分别为0．43±0．04、0．46±0．04和0．32±0．03,SGC-7901-pcDNA3．1-PUMA 组与另2组比较明显下降（均 P ＜0．01）,SGC-7901组与SGC-7901-pcDNA3．1组比较差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论外源性人类 PUMA 基因对胃癌细胞增殖有抑制作用。     

半夏泻心汤对胃癌SGC-7901细胞株细胞凋亡及细胞周期的影响

目的:研究半夏泻心汤对胃癌SGC-7901细胞株细胞凋亡及细胞周期的影响。方法:将半夏泻心汤分为半夏泻心汤低浓度组(0.125 g·L-1)、半夏泻心汤中浓度组(0.5 g·L-1)、半夏泻心汤高浓度组(2 g·L-1),按细胞凋亡检测试剂盒说明书及细胞DNA含量检测试剂盒说明进行,流式细胞仪检测样品,CELLQuest软件获取并分析数据。结果:半夏泻心汤能够增加SGC-7901细胞在G1期的比例,促进细胞凋亡,其中半夏泻心汤高浓度组优于半夏泻心汤中浓度(P<0.05),但半夏泻心汤低浓度对此没有作用。结论:一定程度半夏泻心汤可抑制细胞增殖,并有浓度依赖性,其机理可能与药物阻滞细胞至G1期和诱导细胞凋亡有关。     

PUMA／ASPP1双抑癌基因对胃癌 SGC-7901细胞增殖的影响

目的：探讨 p53正向细胞凋亡调控因子（p53 up-regulated modulator of apoptosis protein,PUMA）／p53促凋亡蛋白（apoptosis stimulating protein of p53,ASPP）1融合基因及单个基因对胃癌 SGC-7901细胞的杀伤作用。方法通过脂质体（lipofectamine）2000TM 将 PUMA／ASPP1融合基因及 PUMA、ASPP1单个基因分别转染胃癌SGC-7901细胞系[实验设5组,分别为胃癌细胞无转染空白对照（SGC-7901）组,空载质粒转染细胞对照（SGC-7901-pcDNA3．1）组以及重组 ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-ASPP1）组、重组 PUMA 质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA）组、重组 PUMA／ASPP1质粒转染细胞实验（SGC-7901-PUMA／ASPP1）组],再次经 G418筛选,获得稳定表达融合基因 SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞株。通过 MTT 法及使用流式细胞仪测定各组胃癌SGC-7901系细胞的存活数（光吸收度即 A 值）及细胞周期。结果SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组 A 值比较差异无统计学意义（P ＞0．05）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 A值明显低于 SGC-7901组与 SGC-7901-pcDNA3．1组（均 P ＜0．01）;SGC-7901-ASPP1组、SGC-7901-PUMA 组和SGC-7901-PUMA／ASPP13组中,SGC-7901-PUMA／ASPP1细胞组 A 值最低（P ＜0．01）。与 SGC-7901组、SGC-7901-pcDNA3．1组比较,SGC-7901-ASPP1、SGC-7901-PUMA、SGC-7901-PUMA／ASPP1组的 G1期明显增多,S 期明显减少,尤以 SGC-7901-PUMA／ASPP1组 S 期减少为甚（均 P ＜0．01）;SGC-7901-pcDNA3．1组与 SGC-7901组比较 G1期、S 期差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论双抑癌基因可有效抑制胃癌 SGC-7901系细胞增殖,双抑癌基因较单个抑癌基因具有更强的抗肿瘤作用。     

中期因子和尿激酶型纤溶酶原激活物在胃癌中的表达及临床意义

目的检测胃癌组织中中期因子（MK）、尿激酶型纤溶酶原激活物（UPA）的表达,探讨MK、UPA与胃癌的侵袭、转移的关系,并与MK、UPA的相关性进行分析。方法应用免疫组织化学两步法检测60例胃癌组织（胃癌组）中MK、UPA的表达,并以20例胃癌旁（距离肿瘤边缘5 cm）的正常组织标本作为对照组。结果胃癌组织中的MK、UPA的表达率分别为63.33%、51.67%,对照组的MK、UPA的表达率分别为25.00%、10.00%,2组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。浸润全层的MK、UPA的表达高于浸润黏膜层、肌层的胃癌（P〈0.05）;低分化的MK、UPA的表达高于中分化胃癌（P〈0.05）;有淋巴结转移的MK、UPA的表达高于无淋巴结转移胃癌（P〈0.05）。MK与UPA的表达呈正相关（r=0.579,P〈0.001）。结论 MK、UPA的表达与胃癌的侵袭、转移密切相关,二者联合检测可作为判断胃癌发展及预后的分子指标。     

黄芪多糖抑制人胃癌MKN45、MGC-803细胞生长的作用机制

目的:探讨黄芪多糖抑制人胃癌细胞MKN45、MGC-803生长的作用机制。方法:将人胃癌细胞MKN45、MGC-803置于RPMI1640培养基中做传代培养,分为对照组、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)组和黄芪多糖(astragalus polysaccharides,APS)组。对照组采用1640培养基培养,5-FU组给予不同质量浓度的5-FU培养,黄芪多糖组给予不同质量浓度的黄芪多糖培养,采用四甲基偶氮噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)实验检测细胞生长抑制情况,使用流式细胞仪检测细胞周期,使用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。结果:(1)培养24 h,APS质量浓度≥10.0 g·L~(-1)、5-FU质量浓度≥0.05 g·L~(-1)时,MKN45、MGC-803细胞受抑制作用均比较明显;培养48 h,APS质量浓度≥5.0 g·L~(-1)、5-FU质量浓度≥0.025 g·L~(-1)时,MKN45、MGC-803细胞受抑制作用均比较明显;(2)细胞培养48 h后,5-FU组和APS组MKN45、MGC-803细胞周期均改变,停留在G0/G1期的细胞比例显著高于对照组,处于S期和G2/M期细胞明显少于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);(3)培养48 h后,5-FU组和APS组MKN45、MGC-803细胞凋亡率均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:黄芪多糖可以抑制胃癌细胞MKN45、MGC-803的生长,其作用机制可能是使细胞停留在GO/G1期并诱导细胞发生凋亡。     

山慈菇水煎剂对人乳腺癌T-47D细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨山慈菇水煎剂对人乳腺癌T-47D细胞增殖、迁移的影响。方法:利用细胞培养技术对人乳腺癌T-47D细胞进行培养;利用MTT法比较不同浓度山慈菇水煎剂组和对照组对T-47D细胞生长增殖情况的影响;利用细胞划痕实验,检测不同浓度的山慈菇水煎剂对T-47D细胞迁移的影响。结果:不同浓度的山慈菇水煎剂(50 g·L~(-1)、100 g·L~(-1)、200 g·L~(-1),400 g·L~(-1)、600 g·L~(-1)、800 g·L~(-1))对T-47D细胞的生长抑制率分别为-0.60%、-17.10%、-0.60%、65.08%、81.15%、82.80%,400~800 g·L~(-1)质量浓度山慈菇水煎剂对乳腺癌T-47D细胞的增殖有明显抑制作用;划痕实验结果显示200 g·L~(-1)、300g·L~(-1)山慈菇水煎剂作用24h和48h后,与对照组比较,乳腺癌T-47D细胞的划痕距离较大,划痕未见明显愈合,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:一定浓度的山慈菇水煎剂对T-47D细胞生长增殖具有抑制作用,低浓度(<200 g·L~(-1))的山慈菇水煎剂对T-47D细胞的生长增殖无影响,即无细胞毒性;高浓度(>200 g·L~(-1))的山慈菇水煎剂对乳腺癌T-47D的增殖有明显的抑制作用;一定浓度的山慈菇水煎剂可以抑制T-47D细胞的迁移运动。     

腹腔镜辅助与开腹远端胃癌根治术治疗进展期胃癌的疗效比较

目的比较腹腔镜辅助远端胃癌根治术与开腹远端胃癌根治术治疗进展期胃癌的疗效比较。方法收集76例由同一组医师连续实施远端胃癌根治术的进展期胃癌患者的临床资料。其中行腹腔镜辅助远端胃癌根治术46例(腹腔镜组),行开腹远端胃癌根治术30例(开腹组)。对2组患者的手术时间、术中出血量、术后通气时间、术后住院时间、住院费用、清扫淋巴结数目、术后并发症(伤口感染、粘连性肠梗阻、胃瘫、吻合口漏等)的发生情况及近期疗效(1、3年的生存率和无瘤生存率)进行比较。结果腹腔镜组的手术时间、住院费用、清扫淋巴结数目、术中出血量及术后并发症例数与开腹组比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。腹腔镜组术后通气时间及术后住院时间均明显短于开腹组(均P<0.05)。2组患者术中均未发生损伤大血管或周围脏器等严重并发症,腹腔镜组无转开腹病例。2组患者均随访10~52(26.8±9.8)个月,1、3年生存率和无瘤生存率比较差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论对于进展期胃癌患者,腹腔镜辅助远端胃癌根治术是一种可行而短期疗效好的手术方式,远期疗效仍需长期随访。     

miR-140与膝关节骨性关节炎严重程度的相关性

目的:探析miR-140与膝关节骨性关节炎严重程度的相关性。方法:选择本科收治的膝关节骨性关节炎患者60例为骨性关节炎组(OA组),按Lawrence X线诊断标准,Ⅰ~Ⅳ级患者各15例。同时选取同期非骨性关节炎患者30例为对照组(主要为外伤患者)。应用实时荧光定量(PCR)检测上述两组患者膝关节液中miR-140的含量。比较两组及不同等级患者的miR-140表达水平。结果:OA组miR-140表达水平显著低于对照组,比较差异有统计学意义(P<0.01);miR-140表达水平随OA严重程度增加而降低,比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:miR-140表达水平与膝关节骨性关节炎的严重程度呈负相关。