牛as1乳酪蛋白基因上游调控序列的克隆及序列分析

应用ＰＣＲ技术从国内小牛胸腺基因组ＤＮＡ中克隆了１．０ｋｂ牛ａｓ１酪蛋白基因的上游调控序列，并进行了序列分析，发现有少量的缺失或突变，其ＴＡＴＡ框和ＣＡＡＴ框均未发生变异，表明已成功克隆了其启动子序列，这为乳腺定位表达的研究奠定了基础。     

慢生型大豆根瘤菌nfeC基因的克隆及序列分析

通过亚克隆,将重组质粒pGXN201中与nfeC基因同源的片段定位在4kbClaI XbaI片段上,序列分析表明该片段全长4038个碱基,该片段上含有一个完整的阅读框架,该阅读框架编码一个含275个氨基酸的多肽,与已报道的nfeC基因编码的蛋白质具有93%的同源性。     

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)脱毛蛋白酶基因的克隆与序列分析

短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)UN-31-C-42菌株是从成都市生活垃圾中分离,并经多次诱变后得到的菌株。其发酵液具有很好的脱毛效果,且对皮革胶原没有损伤。通过对该菌株发酵液中的碱性蛋白酶DHAP的纯化与N′-末端氨基酸序列测定,以及对该序列的同源性分析后,设计出相应引物,用PCR方法扩增了该菌株的碱性蛋白酶基因AP。测序结果表明,该克隆基因全长1588bp,有一个全长1149bp的编码区序列,推测蛋白质序列长383个氨基酸残基,成熟肽分子量为27．8kD。推测的成熟蛋白酶N′-末端具有与DHAPN′-末端完全匹配的序列,说明克隆到的基因为脱毛蛋白酶基因。同源性分析表明,该基因序列与已报道的其他碱性蛋白酶基因有较高的同源性。     

斑马鱼ILF2基因的电子克隆分析

利用电子克隆方法,成功获得了ILF2基因在斑马鱼中的同源基因,为进一步研究斑马鱼ILF2基因功能奠定了基础.斑马鱼ILF2基因cDNA全长为1560bp,含有一个编码387个氨基酸的完整开放阅读框架.比较斑马鱼ILF2基因和人ILF2基因,显示两者编码氨基酸序列相似性为87%,核苷酸序列有72%相同.     

四环素的基因调控分析

文章对四环素的基因调控进行了分析     

牛α(1,3)-半乳糖转移酶基因片段的克隆及一种全新的无启动子打靶载体的构建

利用La—PCR的方法，从牛的基因组中成功地获得分别约为2．4kb、15．0kb的两段扩增产物。两个片段分别克隆于pCR—XL—TOPO载体。测序结果表明所克隆的两片段均为牛α(1，3)GT基因的基因组序列。其中2．4kb片段位于5～7外显子之间，包括了完整的第五及第六内含子；15．0kb片段位于3～4外显子，包括了完整的第三内含子。15．0kb、2．4kb片段分别作为打靶载体的5’、3’同源臂，使用融合基因策略构建了一种全新的无启动子打靶载体7zf-neo17．4。电击转染牛胎儿成纤维细胞以期敲除牛的α(1，3)-GT基因。     

快生型大豆根瘤菌3.7Kb增效片段的亚克隆与序列分析

利用柯氏质粒ｐＬＡＦＲ１为载体构建了快生型大豆根瘤菌Ｂ５２菌株的基因文库，并通过植物结瘤试验筛选到一个３．７Ｋｂ增效片段，将其导入慢性型大豆根瘤菌２２１０，能提高其共后固氮效率。     

中国庚型肝炎病毒NS3区部分基因的克隆与基因特点的分析

利用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从我国一输血后丙型肝炎病人血清中克隆到了庚型肝炎病毒ＮＳ３区的部分基因。经序列分析表明：我国庚型肝炎病毒ＮＳ３区与已知的ＧＢＶ－Ｃ及ＨＧＶ的核苷酸同源性在８１．７—８８．０％之间，而氨基酸同源性均大于９６％，氨基酸序列与ＨＣＶ、ＧＢＶ－Ａ、ＢＧＶ－Ｂ具有一定的结构相似性及数个共有的保守位点。     

大豆NBS类抗病相关基因的克隆与序列分析

根据拟南芥RPS2基因、烟草N基因和亚麻L6基因的保守结构域设计简并引物,采用RT-PCR方法从大豆抗疫霉根腐病品种绥农10号的RNA中扩增获得两个通读的大豆NBS类抗病基因同源片段RNEAU-1和RNEAU-2,长度均为513bp,编码171个氨基酸。以RNEAU-1为靶序列,采用RACE方法获得了全长3574bp的大豆抗病相关基因SR1,该基因包括3411bp的开放读码框,72bp的5′非翻译区(non-translated region,NTR),68bp的3′非翻译区和20bp的多聚腺苷酸尾。编码1137个通读的蛋白质氨基酸序列,基因编码产物具有TIR、NBS、LRR、HD(conserved domain 1)和conserved domain 2等一系列抗病基因的保守结构域。同源性比较和序列分析显示,该基因为大豆中TIR-NBS-LRR类抗病相关基因。Southern杂交结果表明,SR1基因(或其同源基因)在大豆中具有2～4个拷贝。RT-PCR检测表明,SR1基因在大豆中为低丰度组成型表达,其表达不受病原菌接种和水杨酸的诱导,亦无组织特异性。以绥农10号基因组DNA为模板扩增得到长度为3972bp的SR1基因转录区核苷酸序列,其结构包含5个外显子和4个内含子。SR1基因在GenBank上的登录号为AY193892。     

茶尺蠖普通气味结合蛋白基因片段cDNA的克隆与序列分析

根据同源性设计简并性引物,采用RT-PCR方法扩增出了茶尺蠖普通气味结合蛋白GOBP1和GOBP2的基因cDNA片段,大小分别为415 bp和352 bp.测序结果在NCBI中经BLAST搜索,结果表明,两者与已报道的鳞翅目昆虫的气味结合蛋白基因片段或全长的同源性分别为79%~83%和78%~90%.根据两个核苷酸片段推导出的氨基酸残基数分别为138个和117个,均具有6个保守的半胱氨酸位点,符合典型的气味结合蛋白的特点.经BLAST搜索,与其他鳞翅目昆虫GOBP1和GOBP2氨基酸序列的同源性分别为62%~82%和76%~88%.     

人骨形态发生蛋白－1（hBMP－1）成熟肽的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用ＰＣＲ方法从ＢＭＰ－１的ｃＤＮＡ中克隆了ＢＭＰ－１成熟肽的编码基因，删除了ＢＭＰ－１前体分子Ｎ端的信号肽序列和Ｃ端的其他序列。用ＨｉｎｄⅢ消化１．３Ｋｂ的ＰＣＲ产物，将０．８４和０．４６Ｋｂ两片段分别克隆到ｐＵＣ载体中进ＤＮＡ序列分析。分别酶切回收ＥｃｏＲ－ＨｉｎｄⅢ和ＨｉｎｄⅢ－ＢａｍＨⅠ两目的基因片段，与大肠杆菌表达载体ｐＢＶ－２２０进行退火连接，使插入基因受控于Ｐ＿ＲＰ＿Ｌ启动子。将含有ＢＭＰ－１成熟肽编码基因重组表达质粒ｐＢＶＢＭＰ－１转化大肠杆菌宿主细胞进行温度诱导表达。结果表明，经４２℃热诱导后，大肠杆菌能以包涵体形式表达ＢＭＰ－１成熟肽，其分子量约为５２ｋＤａ。     

CpG序列和猪白细胞介素-6基因转染表达对猪囊尾蚴基因疫苗免疫影响的研究

以猪囊尾蚴VTS76抗原基因和质粒VPIL-6、pUC18-CpG免疫接种小鼠，检测了小鼠的体液及细胞免疫反应，结果发现，VPIL-6或pUC-CpG与VTS76共同免疫小鼠的特异性抗体滴度，IgG含量，淋巴细胞白细胞介素-2诱生活性、脾细胞增殖反应和血液免疫细胞数量显著高于VTS76免疫组和对照组，证明VPIL-6和CpG序列能显著增强动物对DNA疫苗的细胞和体液免疫反应，可作为高效的基因免疫增强剂。     

嗜冷杆菌EastSeaG5-1415脂肪酶基因的克隆和序列测定

从东海深海底泥中筛选到一株产低温碱性脂肪酶的海洋细菌EastSeaG5-1415,经鉴定为嗜冷杆菌Psychrobacter glacincola。将其染色体DNA用Sau3AI部分酶切后,低熔点琼脂糖回收2～10kb的。DNA片段,用Klenow大片段酶半补齐,与用Sal I酶切半补齐的质粒pUC19连接后,转化E．coli．JM109构建基因文库。用平板测活法从基因文库初步筛选到两株产碱性脂肪酶的阳性克隆,采用ELISA反应进一步鉴定。序列测定分析表明,两个重组质粒中都包含长度为951bp的碱性脂肪酶基因的完整开放阅读框架(ORF)和上游基因调控序列。此片段编码有317个氨基酸组成的酶,计算分子量为35000 Dal。通过Southem杂交证实了此片段来自于嗜冷杆菌Psychrobacter glacincola EastSeaG5-1415基因细。     

拟南芥膜相关蛋白基因CP5的克隆及其表达研究

CP5是利用人ACA血清筛选拟南芥cDNA文库的过程中克隆的一个新基因，GenBank注册号为AF130253。Blast软件比对表明它位于拟南芥的第一条染色体上，氨基酸序列与动物的磷脂酰胆碱转移蛋白的同源性为25％。软件预测它是一种膜蛋白。Southern杂交结果表明CP5在拟南芥基因组中为单拷贝。原位杂交结果表明CP5 mRNA在根部主要在根的皮层，在叶片和叶柄组织中在维管组织附近的细胞，花序其部成熟小花中、内果皮和成熟的种子中高表达。兔抗CP5的多克隆抗体识别拟南芥愈伤组织中27.5KD抗原；游离朱生质体的间接免疫荧光结果表明CP5主要定位在核膜、内质网和质膜等膜系统上，上述结果表明CP5可能是一种重要的膜蛋白。     

16S rRNA基因与16S-23S rRNA转录单元内间隔区序列分析及其在节旋藻和螺旋藻分类鉴定中的应用

测定了节旋藻属3个品系和螺旋藻属1个品系的全长16SrRNA基因基因和16S rRNA转录单元内间隔区序列（ITS）,分析了已知的节旋藻、螺旋藻和相关品系的相应序列的同源性,构建了系统发生树,并评价了这两段DNA序列在节旋藻、螺旋藻种属分类和种质鉴定中的意义。结果表明：（1）16SrRNA基因序列和ITS序列均可用于节旋藻属和螺旋藻属的属间分类,以两序列为基础的系统学分析结果一致;（2）ITS序列变异程度高于16SrRNA序列,适用于节旋藻和螺旋藻属内品系或种质鉴定;（3）节旋藻属可明确界定,16SrRNA基因序列相似性大于98％,ITS序列相 似性大于88％;（4）螺旋藻属某些品系间16SrRNA序列和ITS序列相似性较低,与不同属间的序列相似性程度为同一水平。     

以杨柳青年画为例的大运河文化基因设计研究

目的 运用设计手段为大运河文化基因活态化传承赋能,促使大运河文化内涵与时俱进,助力大运河文化在当今时代不断延续。方法 以杨柳青年画为例,梳理文化基因类别,构建文化基因设计逻辑。依据不同文化基因的特性,提出三项文化基因符号设计应用原则,对文化基因提取方法和应用流程进行实践。结果 运用所提出的文化基因提取方法提炼出杨柳青年画《连年有余》的基因符号,并依据取舍有度、与时俱进、多维渗透原则将其转译变换,得出一款具有现代特征的包装设计方案。结论 运用文化基因理论能有效实现对大运河文化基因的提取及设计应用,所提出的文化基因提取方法及基因符号设计应用原则为大运河其他文化基因的设计开发提供了借鉴。     

修饰的cpti基因在转基因棉花后代中的表达及其抗虫性分析

对转修饰cpti基因（即sck基因）的抗虫棉T3代进行了分子检测和抗虫性检测，PCR，Southern杂交证明外源基因已稳定遗传给后代植株，抑制剂活性检测表明转sck基因后代比转未修饰cpti基因后代具有更强的县蛋白酶抑制剂活性，抗虫性分析表明，转基因后代对棉铃虫的生长发育具有明显的抑制作用，结果进步说明，将外源蛋白细胞内靶向定位的策略应用于棉花抗虫基因工程，可以提高外源蛋白在细胞内的积累量，进而提高转基因植株及其后代的抗虫性。     

文化场域视角下蒙古包文化基因图谱构建与设计转译

目的 旨在以文化基因理论为基础,从文化场域视角下分析、构建蒙古包文化基因图谱,传承蒙古包文化基因及进行现代设计转译。方法 通过显性与隐性因子结构化分析,从造型、色彩、纹样、材料、工艺、环境、行为与语义8个要素出发,构建基于“人、事、物、场、景”文化场域视角下的蒙古包文化基因谱系图与文化基因评价模型树。结论 文化场域视角下的蒙古包文化基因图谱构建,更能全面、全貌地反映蒙古包文化特征,以其为背景的设计转译也更具高度的场景与文化代入感,从而成为连接文化与造物间的桥梁,也为民族文创产品创新提供可借鉴的设计路径。