免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生-高效液相色谱法检测粮油中黄曲霉毒素

介绍了同时采用免疫亲和柱净化-柱后光化学衍生-高效液相色谱方法检测粮油中黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2。样品经过甲醇-水(体积比为70∶30)提取,通过免疫亲和柱富集和净化,采用Cloversil C18色谱柱(4.6 mm i.d.×150 mm,粒度5μm),以甲醇∶水(50∶50)溶液为流动相,柱后光化学衍生、利用荧光检测器检测,黄曲霉毒素B1、B2、G1和G2检出限分别为0.5,0.2,0.7和0.2μg/kg,标准曲线的线性范围分别为:0.51～10.19 ng/mL,0.15～2.92 ng/mL,0.54～10.71 ng/mL,0.16～3.3 ng/mL,在稻谷、食用油样品中,平均加标回收率为70.3%～109.8%,相对标准偏差为1.4%～9.1%,说明回收率、精密度均可以满足实际工作的要求。     

啤酒酿造原料中黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A同时检测分析方法研究

研究建立同时检测啤酒及酿造原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的免疫亲和柱净化-柱后化学衍生-高效液相色谱方法。样品经过甲醇-水(80∶20,v/v)提取,通过免疫亲和柱进行富集和净化,采用Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱,以乙腈-2%乙酸(40∶60,v/v)为流动相,等度洗脱,柱后以0.5%碘溶液衍生、改变波长荧光检测。结果表明,黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A检出限分别为0.05μg/kg(AFB1)、3.19μg/kg(ZEA)和0.22μg/kg(OTA),标准曲线的线性范围分别为0.2~10.0μg/L、10.0~1000.0μg/L和5.0~50.0μg/L;在大麦样品中加标回收率为90.0%~109.5%,相对标准偏差为2.18%~4.94%。被检37个样品的真菌毒素含量检测结果表明,正常贮存下的啤酒原料均未检测出真菌毒素,但在霉变大麦样品中可以检测出少量的真菌毒素。     

超高效液相色谱检测奶及奶制品中的M族黄曲霉毒素

目的建立一种免疫亲和柱净化-超高效液相色谱法同时测定奶及奶制品中M族黄曲霉毒素的方法。方法以乙腈为提取剂和蛋白沉淀剂,采用涡旋混合及超声提取,免疫亲和柱净化。结果经Welch Ultimate XB-C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)分离,应用大体积流通池荧光检测,流动相为水和乙腈/甲醇(1:1)。线性范围在0.01~5.00 ng/mL之间,线性系数均大于0.999,黄曲霉毒素M1、M2的检出限为0.003μg/kg。免疫亲和柱对黄曲霉毒素M1、M2的回收率均在80%以上,液态奶中添加0.05、0.2、1.0μg/kg的回收率在85.6%~106.4%之间,奶粉中添加0.5、2.0、10.0μg/kg的回收率在81.5%~93.4%之间。结论该方法可以适用于奶粉、液态奶中M族黄曲霉毒素检测。     

免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定玉米油中F-2毒素含量的研究

建立免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定玉米油中F-2毒素的方法。样品经前处理后通过免疫亲和柱净化,采用高效液相色谱仪-荧光检测器进行检测。该方法最佳测定条件为:选用IAC-AZ型免疫亲和柱,柱吸附容量4μg;流动相乙腈-甲醇-水(体积比46∶46∶8),流速1.0m L/min;提取溶剂乙腈-水(体积比90∶10)。F-2毒素的质量浓度在0~250 ng/m L的范围内与峰面积呈良好的线性关系,方法检出限为0.06μg/kg,平均回收率为92.46%,RSD为0.942%~1.758%。该方法操作简便快捷、准确度高、重现性好,适用于玉米油中F-2毒素的测定。     

免疫亲和柱净化-光化学柱后衍生高效液相色谱 荧光法测定粮食中黄曲霉毒素

建立了粮食中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的免疫亲和柱净化-光化学柱后衍生高效液相色谱荧光检测法。样品经甲醇-水提取,免疫亲和柱净化,高效液相色谱分离,光化学柱后衍生,荧光检测器测定。结果表明,黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的检出限分别为0.50、0.25、0.50、0.25μg/kg,回收率为67.2%～91.7%,RSD小于10%。该方法快速、准确、灵敏度高、重现性好,能满足我国对粮食中黄曲霉毒素限量的检测要求。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定全麦粉中的赭曲霉毒素A

目的：建立超高效液相色谱-串联质谱法测定全麦粉中赭曲霉毒素A的含量。方法：全麦粉样品经甲醇-水(60∶40,V∶V)提取,磷酸盐缓冲溶液稀释,赭曲霉毒素A免疫亲和柱净化,超高效液相色谱-串联质谱测定分析,内标法定量。结果：赭曲霉毒素A在0.475～9.500 ng·mL^-1具有良好的线性关系(R²=0.999 9),3个加标水平下的平均回收率为85.62%～99.42%,相对标准偏差为1.92%～4.66%,检出限为0.68μg·kg^-1、定量限为2.27μg·kg^-1。结论：该方法便捷、稳定、灵敏度高、准确度好,可用于快速分析全麦粉中赭曲霉毒素A的含量。     

免疫亲和柱净化-HPLC柱后光化学衍生荧光法测定花生饮料中的黄曲霉毒素B_1

建立了免疫亲和柱净化-光化学衍生高效液相色谱荧光法测定花生饮料中黄曲霉毒素B1含量的方法。试样经乙腈-水溶液(体积比80∶20)提取,免疫亲和柱富集和净化后,采用Thermo Syncronis C_(18)色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),以甲醇-水(体积比55∶45)为流动相,等度洗脱,荧光检测器检测(Ex:360nm,Em:440nm)。结果表明:黄曲霉毒素B1检出限为7.54×10~(-3)μg/kg;标准曲线的线性范围为0.1～20.0ng/mL(r=0.9999);3个不同水平的加标平均回收率为96.88%～98.82%,RSD值为0.85%～1.07%。10批试样中黄曲霉毒素B_1测定值为0～2.09μg/kg,均无过量残留。该方法具有操作简便、灵敏度高、重现性佳等特点,适用于花生饮料中黄曲霉毒素B_1的检测。     

IAC-HPLC法检测牛奶中黄曲霉毒素和玉米赤霉醇及类似物质量分数

建立了IAC-HPLC(免疫亲和柱净化-高效液相色谱)法检测牛奶中6种黄曲霉毒素和玉米赤霉醇及类似物的方法。样品经免疫亲和柱净化后,黄曲霉毒素用高效液相色谱——荧光检测器柱后衍生检测,玉米赤霉醇及其类似物用高效液相色谱——紫外检测器检测。结果表明,牛奶中黄曲霉毒素(M2,M1,G2,G1,B2,B1)的检测限分别为0.004,0.004,0.004,0.003,0.002,0.002μg/L,6种黄曲霉毒素的平均回收率在91.20%~113.8%之间,变异系数小于8.79%;玉米赤霉醇及其类似物的检测限均为0.05μg/L,平均回收率在54.22%~90.76%之间,变异系数小于9.44%。     

玉米制品中黄曲霉毒素的柱前和柱后衍生方法对比

玉米制品中黄曲霉毒素测定的2种衍生化方法(柱前衍生和柱后衍生)进行比较。样品经过Mycrosep ~(TM)226多功能净化柱净化,采用Waters Symmetry C18(4.6 mm×250 mm,5.0μm)色谱柱进行分离,荧光检测器检测。柱前衍生法:样品提取液经净化后,采用三氟乙酸进行衍生后测定。柱后碘衍生法:样品提取液经净化后,经高效液相色谱分离、柱后碘衍生,荧光检测器检测。结果表明:柱前衍生法,黄曲霉毒素G_1、B_1检出限为0.05μg/kg,黄曲霉毒素G_2、B_2检出限为0.015μg/kg,r0.999 1,回收率在75.4%~84.2%之间;柱后碘衍生法,黄曲霉毒素G_1、B_1检出限为0.08μg/kg,黄曲霉毒素G_2、B_2检出限为0.015μg/kg,r0.999 2,回收率在75.2%~85.7%之间。2种衍生方法在线性范围、精密度、回收率等方面较相似,表明柱前衍生法和柱后碘衍生法均适用于玉米制品中的黄曲霉毒素检测。     

超高效液相色谱检测奶及奶制品中的 M族黄曲霉毒素

摘 要：目的 建立一种免疫亲和柱净化-超高效液相色谱法同时测定奶及奶制品中M族黄曲霉毒素的方法。方法 以乙腈为提取剂和蛋白沉淀剂,采用涡旋混合及超声提取,免疫亲和柱净化。结果 经Welch Ultimate XB-C18（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）色谱柱分离,应用大体积流通池荧光检测,流动相为水和乙腈/甲醇(1:1)。线性范围在0.01~5.00 ng/mL之间,线性系数均大于0.999,黄曲霉毒素M1、M2的检出限为0.003 μg/kg。免疫亲和柱对黄曲霉毒素M1、M2的回收率均在80%以上,液态奶中添加0.05、0.2、1.0 μg/kg的回收率在85.6%~106.4%之间,奶粉中添加0.5、2.0、10.0 μg/kg的回收率在81.5%~93.4%之间。结论 该方法可以适用于奶粉、液态奶中M族黄曲霉毒素检测。     

T-2毒素的高灵敏时间分辨荧光免疫分析

以时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法建立快速灵敏的T-2毒素的全自动检测方法. 采用T-2-BSA包被96孔板作为固相抗原,与游离的T-2竞争有限的抗T-2单克隆抗体,以Eu3+标记的羊抗鼠抗体示踪,采用间接竞争免疫分析方法在解离增强荧光免疫分析体系中建立T-2-TRFIA.同时对这一方法的稳定性、灵敏度、回收率和特异性进行考核.此方法灵敏度为0.2 μg/L,测量范围0.2～500 μg/L,批内变异为7.5%,批间变异为12.7%,平均回收率为89.6%.与赭曲霉毒素A、黄曲霉毒素B1、牛血清白蛋白无交叉反应.10条不同时间进行的间接竞争T-2-TRFIA的效应点均值ED80、ED50和ED20分别为2.66,6.97,29.11 μg/L.同时,用TRFIA和ELISA试剂盒同时检测T-2毒素,在ELISA和TRFIA产品的共同可测范围之内,两者的相关系数为0.926.     

T-2毒素检测方法研究进展

T-2毒素主要是由镰刀菌属霉菌（Fusarium）产生的一类单端孢霉烯族类（Trichothecenes，Ts）真菌毒素，具有毒性强、污染范围广的特点，常见于受污染的小麦、玉米、大麦、燕麦等粮谷及其制品和相关动物饲料中，对粮食安全及人体健康构成了极大的威胁，已逐渐成为粮食行业和畜牧行业监测和检测关注的重点。欧盟已针对谷物原料及其加工产品分别制定了相应的限量标准，我国虽然还没有制定相应的限量标准，但于2016年发布了T-2毒素食品安全国家标准《食品中T-2毒素的测定》。本文简要介绍了T-2毒素危害及其限量标准，重点就近年来色谱法、免疫化学检测技术、适配体生物传感器检测技术等方法在T-2毒素检测方面的应用进行了综述，并对未来发展方向进行了展望，以期为粮谷产品T-2毒素污染防控和质量监测提供借鉴。     

Effect of time, temperature and solvent on the stability of T-2 toxin, HT-2 toxin, deoxynivalenol and nivalenol calibrants

The influence of solvent, storage time and temperature on the stability of the trichothecene mycotoxins T-2 toxin (T-2), HT-2 toxin (HT-2), deoxynivalenol (DON) and nivalenol (NIV) was investigated. Toxins in acetonitrile, ethyl acetate or as thin film were stored in sealed glass ampoules at -18, 4, 25 and 40°C for up to 24 months. Samples were analysed by HPLC with UV detection. The results show that acetonitrile was the preferred solvent and no significant ( t 0.95 -test) decomposition occurred for any of the four trichothecenes when stored for 24 months at 25°C or 3 months at 40°C. T-2 and HT-2 in ethyl acetate or as thin film were also stable under the same conditions. DON and NIV in ethyl acetate or as thin film were stable for up to 24 months at -18°C, but a significant decomposition of DON and NIV in ethyl acetate was observed for both toxins after 24 months of storage at 4°C and after 12 months at 25°C. When stored as thin film, a significant trend of decomposition of DON occurred after 24 months of storage at 4°C and after 6 months of storage at 25°C. A significant decrease of NIV stored as thin film was observed after 9 months at 25°C. In conclusion, acetonitrile was the most suitable solvent for long-term storage of T-2, HT-2, DON and NIV.     

胶体金免疫层析法快速检测T-2毒素的研究

应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测谷物和饲料中T-2毒素的方法.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗T-2毒素单克隆抗体并喷涂于玻璃纤维上,T-2毒素偶联抗原和羊抗鼠二抗分别喷涂于硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组装成试纸条并装入检测卡中.测试结果表明,T-2毒素快速检测试纸条的检测限为0.Smg/L,检测时间为10min,假阳性率和假阴性率均为0.该法使用简单方便,非常适合现场快速检测谷物和饲料中的T-2毒素.     

养殖对虾T-2毒素蓄积危害研究现状

我国饲料中T-2毒素污染严重,养殖水产动物长期摄入饲料中普遍污染的低剂量T-2毒素,可导致其肌肉残留和生长缓慢,肌肉品质下降,并存在食品安全风险。本文概述了国内外对虾饲料中T-2毒素污染现状,阐明对虾的潜在危害及其评价指标的研究现状,这对进一步开展水产品真菌毒素暴露风险评估和制定膳食接触标准具有重要意义。     

食品添加剂对脱氧雪腐镰刀菌烯醇和T-2毒素 体外去除作用研究

目的为了探索食品中单端孢霉烯族毒素残留的控制方法,研究了多种食品添加剂对脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)和T-2毒素的体外去除作用。方法通过食品添加剂处理DON和T-2毒素,研究它们对DON和T-2毒素的体外去除作用。结果去除效果最显著是磷酸三钠、焦磷酸钠、碳酸钠,对DON的去除率分别为76.60%±3.70%、33.30%±3.10%、45.90%±3.30%,对T-2毒素的去除率分别为99.98%±0.01%、95.20%±2.10%、99.98%±0.01%,处理后毒素溶液中不含有已知产物,可能将DON、T-2毒素转化为新的未知产物。结论多种受试食品添加剂对DON、T-2毒素具有不同程度的去除作用。     

Dietary selenium protects against acute toxicity of T-2 toxin in rats

The efficacy of dietary selenium (Se) supplementation on acute toxicity of T-2 toxin was investigated. Wistar male rats were divided into six groups with 15 rats in each and fed for 6 weeks ad libitum a semi-synthetic diet containing either 0.03 (groups 1 and 2), 0.5 (groups 3 and 4) or 2.5 mg Se/kg (groups 5 and 6). By the end of the experiment the rats in groups 2, 4 and 6 were administered once per os 3.8 mg/kg body weight T-2 toxin, while the animals in groups 1, 3 and 5 received equal doses of the solvent. Twenty-four hours after administration of the toxin the surviving rats were sacrificed and the liver microsomes isolated and determined for activities of enzymes relating to xenobiotics metabolism and Se. The results showed that feeding the rats 2.5 mg Se/kg diet increased the deethylation rate of 7-ethoxycoumarin by 42% and slightly decreased (20%) glutathione-S-transferase activity. Twenty-four hours after the administration of T-2 toxin the lethality percentages in groups 2, 4 and 6 were 47%, 27% and 20%, respectively. Furthermore, administration of T-2 toxin to group 6 rats resulted in a significant decrease in the level of cytochrome P-450 and 7-ethoxycoumarin deethylase activity (to 78% and 51%, respectively) compared to the control group. At the same time a 72% increase in the UDP-glucuronosyltransferase activity and of 61% in epoxide hydrolase activity compared to the control group was found. Similarly, although somewhat smaller, changes were seen in the group 4 rats receiving 0.5 mg Se/kg diet.(ABSTRACT TRUNCATED AT 250 WORDS)