发酵豆粕在水产动物饲料中的应用

大量研究表明,微生物发酵豆粕是一种多功能的优质蛋白原料,对水产动物的生长性能、饲料利用效果、消化和免疫功能都有很好的改善作用.在此基础上,综述了发酵豆粕在水产动物饲料中的应用研究,以期为后续研究及生产实践提供参考.     

凤眼莲根系生态系统在含银废水净化中的功能

通过采用凤眼莲净化含银废水 ,定性定量分析了其根系生态系统的组成 .证实凤眼莲水下根系上栖息着大量藻类、细菌、微型动物 ,它们协同作用 ,致使废水中的含银物质、悬浮物、营养盐和有机物发生不同形式的迁移和转化 ;证明了“有机质—细菌—微型动物”食物链在根系的形成及其含银物质的富集 ,是凤眼莲根系生态系统对污染水体综合净化和资源化的基础 .     

酶解刺参内脏蛋白制备抗氧化肽的研究

对刺参内脏所含的内源蛋白酶的性质进行了初步研究,在此基础上分析和比较了利用内源蛋白酶和外源蛋白酶酶解内脏蛋白制备抗氧化肽的工艺。刺参内脏主要含有四种内源蛋白酶,最适pH分别为2.0、5.0、8.0和12.0。以羟自由基和超氧阴离子自由基清除率为指标,比较了内源蛋白酶和八种外源蛋白酶酶解内脏蛋白制备抗氧化肽的效果,结果表明菠萝蛋白酶为最佳用酶;用正交实验L9(34)对其水解条件进行优化,确定最佳酶解条件为:pH7.8、温度35℃、加酶量5.0g/100g、酶解时间1h,在此条件下所得酶解液对羟自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别为79.15%和28.57%。      

鼠尾藻多酚提取纯化及其抗果蔬病原菌活性研究

为了获得具有抗菌活性的天然海洋生物活性物质,利用褐藻门马尾藻属的鼠尾藻(Sargassum thunbeergii Kuntze)乙醇提取物,通过对Botrytis cinerea和Penicillium expansum的抑制率来评价其抗菌活性。结果表明,鼠尾藻提取物有很强的抗果蔬病原菌活性,抑制Botrytis cinerea和Penicillium expansum生长的最小抑菌浓度(MIC)分别为16mg/mL和12mg/mL。采用10mg/mL多酚处理的草莓,其发病率和病斑直径分别比对照低28.4%和47.6%。     

仿刺参酶解提取物营养成分分析及其对小鼠免疫功能的影响

对仿刺参酶解提取物营养成分组成进行了测定和分析,并依照《保健食品检验与评价技术规范》(2003版)中"增强免疫力功能检验方法",评价了其对小鼠免疫功能的影响。结果表明仿刺参酶解提取物水分、粗蛋白、粗脂肪、灰分、磷脂、多糖、皂苷含量分别为6.41%、70.51%、5.05%、6.83%、0.96%、8.56%、0.78%。仿刺参酶解提取物氨基酸总量为56.046 g/100 g,必需氨基酸占氨基酸总量的24.2%,鲜味氨基酸占氨基酸总量的55.6%。刺参酶解提取物低、中、高(0.1 g/kg·bw、0.2 g/kg·bw、0.6 g/kg·bw)剂量组可明显提高Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力,与阴性对照组比较差异显著(p0.05);3剂量组可显著提高小鼠血清溶血素水平(p0.05);高剂量组能极显著提高小鼠抗体生成细胞数(p0.01);中、高剂量组能极显著提高小鼠NK细胞活性(p0.01)。仿刺参酶解提取物含有丰富的营养成分,并具有增强免疫力的功能。     

益生素产品在反刍动物饲料中的作用

饲料中添加益生素主要作用在于：益生菌在消化道内通过种群的竞争优势抑制病原菌的定殖；刺激提高宿主免疫系统的活力：吸附消化道内的病原菌和霉菌毒素；提高饲料的吸收利用效率，提高动物的生长率和健康水平；通过减少抗生素的使用以及毒素的污染从而保证动物产品的安全。对反刍动物而言，益生菌能促进瘤胃的发育，促进消化酶的分泌，减少氨、甲烷等有害气体的产生，提高营养物质的利用效率。     

喹烯酮在刺参中的代谢物和代谢途径研究

建立高效液相色谱串联三重四极杆方法(HPLC-MS/MS),对喹烯酮在刺参体壁中的未知代谢物进行定性检测和结构解析。单次投喂刺参含喹烯酮20 mg/kg的饲料,24 h后转入清洁海水中72 h,实验期间定时取样去除内脏进行分析。本研究采用乙腈直接提取浓缩至干后定容检测和盐酸酸解后过SPE柱富集净化检测两种前处理方式对刺参体壁中的喹烯酮和可能代谢物进行提取和净化。采用ACQUITYTM UPLC#174;BEH C18(2.1 mm×50 mm,1.7μm)色谱柱,乙腈(0.1%HCOOH)和水(0.1%HCOOH)为流动相,对未知代谢物样品进行梯度洗脱分离,电喷雾离子源(ESI)正离子,Fullscan-Data Dependant scan(Fullscan-DDA)扫描方法进行检测。通过检测组分与已知喹烯酮和代谢物标准品的一级母离子和二级碎片离子对比,在刺参体壁中确认了已知代谢物MQCA(3-甲基喹恶啉-2羧酸),并首次发现了另4种可能代谢物。     

刺参体壁胰/类胰丝氨酸蛋白酶的性质及其在自溶中的作用

以刺参体壁中丝氨酸蛋白酶为研究对象,对其部分酶学性质及其与刺参自溶的关系进行研究。采用Tris-HCl缓冲溶液提取、硫酸铵盐析、透析及超滤获得刺参体壁粗酶液。结果显示,以Boc-Phe-Ser-Arg-MCA为底物时,粗酶液的丝氨酸蛋白酶活力最高;以其为底物,测得该类蛋白酶在pH值为6.2和8.5时呈现较强酶活力峰值,两者最适温度范围均为50～55?℃;Cu2＋、Fe3＋、Pb2＋、Zn2＋强烈抑制该酶的活性,Ca2＋可提高该酶活力;邻菲咯啉、乙二胺四乙酸以及半胱氨酸修饰剂均能够部分抑制该酶活力。4-(2-氨乙基)苯磺酰氟盐酸盐、苯甲基磺酰氟、Na-对甲苯磺酰-L-苯丙氨酸氯甲基酮、(3S)-7-氨基-1-氯-3-磺酰氨基-2-庚酮盐酸盐、大豆胰蛋白酶抑制剂能够显著抑制蛋白酶的活力以及自溶过程中可溶性蛋白、三氯乙酸可溶性多肽的生成。上述结果表明,刺参体壁中存在至少2?种具有一定的金属离子依赖性的胰/类胰丝氨酸蛋白酶,其活性中心或底物识别位点可能有半胱氨酸的参与,该类蛋白酶很可能参与刺参自溶过程中蛋白质的降解。     

仿刺参酶解液抑制黄嘌呤氧化酶活性的研究

目的:为了充分利用仿刺参这一海洋资源,开发其活性成分,研究了仿刺参的最优酶解条件并探讨仿刺参通过抑制黄嘌呤氧化酶活性对大鼠高尿酸血症的预防效果。方法:以水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、酶解时间、加酶量等酶解工艺参数进行研究,采用响应面法优化酶解工艺。以酵母膏淀粉混合液配合氧嗪酸钾构建大鼠高尿酸血症模型。分别灌胃造模后的SD大鼠,30 d后,测定大鼠的脏器系数及血清中XOD活力,UA和BUN含量。利用基因芯片技术比较不同组别间基因的表达水平。同时利用RT-qPCR技术验证基因芯片结果。结果:选用复合蛋白酶,酶解温度55℃,酶解时间136 min,加酶量1.97%,水解度最高。仿刺参酶解液能显著改善大鼠的脏器系数,降低大鼠血清中的UA和BUN含量,降低XOD活性,抑制黄嘌呤氧化酶的活性,降低尿酸的合成产生。与模型组的差异表达比较,试验组基因表达水平有显著改变,其中表达上调的基因36个,表达下调的143个。结论:仿刺参营养丰富,可以抑制黄嘌呤氧化酶的活性,具有抗高尿酸血症的作用,是一种预防痛风的食品。     

刺参体壁及罗非鱼皮酶促溶性胶原蛋白特性的对比研究

本实验对刺参体壁酶促溶性胶原蛋白(pepsin soluble collagen from Stichopus japonicus,sjPSC)和罗非鱼皮酶促溶性胶原蛋白(pepsin soluble collagen from Oreochromis niloticus,onPSC)的理化特性进行对比研究。结果表明,两种胶原蛋白的紫外与傅里叶变换红外光谱分析结果都较为相似。由十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱可知,两种胶原蛋白均以α-和β-链为主,在非还原和还原条件下,二者的电泳图谱非常相似,这表明蛋白中没有二硫键被还原。甘氨酸是sjPSC和onPSC中主要氨基酸,其中每1 000个氨基酸残基中分别含有(344.57±2.16)、(353.00±4.84)个甘氨酸残基。相比较而言,sjPSC中谷氨酸、天冬氨酸、丝氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、酪氨酸含量较高,onPSC中L-羟脯氨酸、L-脯氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸含量较高。在V8酶和α-糜蛋白酶作用下,sjPSC和onPSC的肽谱分析表明二者的结构有一定区别,尤其是谷氨酸、天冬氨酸及羟脯氨酸残基。     

饲喂仿刺参性腺对小鼠免疫功能的调节作用

以仿刺参雌、雄性腺冻干粉为原料,对其基本营养组分和主要功效成分进行测定,采用小鼠饲喂实验,考察仿刺参性腺在小鼠免疫功能调节方面的作用。结果表明:仿刺参雌、雄性腺富含营养和功效成分,其中雄性性腺蛋白质含量高达74.54 g/100 g,显著高于仿刺参体壁(P<0.05),雌性性腺中海参多糖含量与体壁相当,而海参皂苷含量高达4.77 g/100 g,是体壁的10倍以上;与对照组相比,饲喂仿刺参性腺可显著增加小鼠的胸腺指数和脾脏指数,提高自然杀伤细胞活性,尤其是饲喂雄性性腺的小鼠,自然杀伤细胞活性率升高到(47.19±4.99)%,血清中白细胞介素-6含量为(209.75±24.82) pg/mL,血清和肝脏中乳酸脱氢酶、超氧化物歧化酶活力均有所提升,肝脏中丙二醛含量降低至(1.98±0.25) nmol/mg。由此可知,饲喂仿刺参性腺可提高小鼠的免疫机能,且饲喂雄性性腺的作用更加明显。     

刺参体内铝的富集和消除规律研究

目的研究铝在刺参体内的富集和消除规律。方法选取体重为(50±10) g的刺参暴露于铝浓度分别为50、150、300μg/L的海水中进行富集实验,分别在第0、1、3、5、7、10、15、21、30 d取样检测分析。富集实验结束后,放入自然海水中开始消除实验,分别在第1、3、7、14、21、35、45 d取样检测分析。结果3个实验组刺参体壁中铝的蓄积量范围为10.0～18.2mg/kg、富集系数范围为53.2～160、最终消除率范围为67.0%～78.6%;纵肌中铝的蓄积量范围为32.2～60.0mg/kg、富集系数范围为189～582、最终消除率范围为84.7%～88.2%;呼吸树中铝的蓄积量范围为69.2～120mg/kg、富集系数范围为365～1143、最终消除率范围为77.9%～86.4%;消化道中铝的蓄积量范围为78.7～275mg/kg、富集系数范围为865～1275、最终消除率范围为74.8%～86.1%。结论刺参各组织铝蓄积量、富集系数随暴露时间的延长而增大,各组织对铝蓄积量和富集系数大小顺序均为消化道呼吸树纵肌体壁,消化道和呼吸树是刺参富集铝的主要器官。刺参纵肌、呼吸树和消化道对铝的蓄积量、富集系数均随暴露浓度的增大而增大,体壁对铝的蓄积量也随暴露浓度的增大而增大,但体壁对铝的富集系数随暴露浓度的增大而减小。消除实验期间,刺参体壁、纵肌、呼吸树和消化道中铝残留量随消除时间的延长而降低,呈现前期消除较快,后期逐渐平稳的趋势;消除实验结束,3个浓度组刺参中铝的最终残留量与对照组相差不大。     

仿刺参卵和体壁多肽的制备及免疫活性

以仿刺参卵和体壁为原料制备多肽,测定其基本营养成分和分子质量分布,并研究其对淋巴细胞增殖作用和小鼠免疫功能的影响。采用生物酶解技术和切向流超滤技术分离和制备仿刺参卵和体壁多肽,磺酰罗丹明B比色分析法测定了多肽质量浓度（10、50、100、500 μg/mL）对小鼠淋巴细胞增殖（spleen lymphocyte proliferation,SLP）能力的影响,设定水对照组和多肽低、中、高（日剂量83.3、166.7、500.0 mg/kg）剂量组进行30 d小鼠灌胃实验,检测了小鼠脏器/体质量、迟发型变态反应能力、伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化能力、抗体生成细胞数、小鼠血清溶血素水平、小鼠碳廓清能力、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力及自然杀伤细胞活力等指标。结果表明,仿刺参卵和体壁1～10 kDa多肽（EP1和BWP1）在500 μg/mL时均对SLP具有显著的促进作用,其粗蛋白含量分别为64.74、70.25 g/100 g,氨基酸总量分别为45.69、63.26 g/100 g,分子质量分别分布在130～1 600 Da及130～2 500 Da之间。经口服灌胃给予小鼠不同剂量的多肽30 d,EP1可提高小鼠的细胞免疫功能和单核-巨噬细胞吞噬功能,BWP1可提高小鼠的体液免疫功能和单核-巨噬细胞吞噬功能。结果提示EP1和BWP1均具有增强免疫力的功能,可开发为新的免疫调节产品。     

木瓜蛋白酶提取刺参消化道多糖

采用酶解法提取仿刺参消化道多糖并进行初步性质测定。方法：通过木瓜蛋白酶酶解获得粗多糖,并综合考虑酶解时间、温度、加酶量的影响,获得优化的酶解条件;采用三氯醋酸法除蛋白,Sephacryl S-400 凝胶柱层析进行纯化,并测定其相对分子质量和硫酸基含量。结果：酶解最佳条件为加酶量10400U/g,酶解温度55℃,酶解时间6h,多糖得率8.11‰;纯化多糖为组分单一的酸性多糖,分子质量约25kD,硫酸基含量约为9.29%。     

刺参中过氧化物还原酶peroxiredoxin4的抗氧化活性分析

目的 研究刺参中的抗氧化活性物质Peroxiredoxin4。方法 利用生物信息学方法对刺参Peroxiredoxin4一级结构进行分析,克隆并表达重组刺参Peroxiredoxin4蛋白,构建DTT/Fe3+/O2混合功能氧化酶体系,确定重组刺参Peroxiredoxin4蛋白功能。结果 刺参Peroxiredoxin4氨基酸序列含有活性Cys,且活性Cys位于Prx4保守基序FYPLDFTFVCPTEI和HGEVCPAGW中,克隆得到的重组刺参Peroxiredoxin4蛋白能够保护DNA免遭氧化剂损伤。结论 重组刺参Peroxiredoxin4蛋白具有抗氧化生物学活性。     

响应面试验优化盐渍仿刺参脱盐工艺

为了提高脱盐速率和减少营养损失,以盐渍仿刺参为原料,采用常压静水脱盐方式,研究了温度、料液比、脱盐时间、换水次数对脱盐效果的影响,通过单因素和响应面法对影响盐渍仿刺参脱盐工艺的主要因素进行分析优化。结果表明:在相同的脱盐温度下,影响盐渍仿刺参脱盐工艺的因素按主次顺序排列为:料液比>脱盐时间>换水次数;确定了盐渍仿刺参脱盐的最佳工艺条件为:脱盐温度25℃,料液比1∶4.3 g/m L,换水次数2,每隔240 min进行换水,在此条件下测得脱盐率可达到85.98%±0.22%,与预测值吻合度好。      

仿刺参卵多糖的分离纯化及体外抗肿瘤活性

目的：探究仿刺参卵多糖的结构及体外抗肿瘤活性。方法：通过酶解醇沉获得仿刺参卵粗多糖（polysaccharides from Apostichopus japonicus spawn,SPS）;通过色谱柱纯化后进行理化性质分析;采用噻唑蓝法研究卵多糖对HeLa、HGC-27细胞的体外增殖抑制作用。结果：获得3 种不同多糖组分SPS-1、SPS-2、SPS-3,对干预的肿瘤细胞均有显著抑制作用。SPS-1抑制作用最强,对HeLa及HGC-27细胞的最高抑制率分别为98.04%、99.4%。结论：从仿刺参卵中分离出3 种多糖组分,均表现出一定的抑制肿瘤细胞增殖活性。     

不同方式预煮过程中仿刺参的品质变化

为了确定仿刺参最佳的预煮条件和参数,对其在蒸馏水煮制(Ⅰ)、不同浓度盐水(1%、3%和6%)煮制(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)、不加水蒸制(Ⅴ)和加水蒸制(Ⅵ)过程中的品质变化进行了研究。结果表明:微生物残留量和酶活性都呈下降趋势。在杀菌和灭活的作用上,煮制(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ)>Ⅴ>Ⅵ,但Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ间无显著差异(p>0.05)。菌落总数下降一个数量级分别需要12、15、18 min,酶活性变化开始趋缓的时间分别是9、12、15 min。粗蛋白最终损失量上,(Ⅲ、Ⅳ)>(Ⅰ、Ⅱ)>Ⅴ>Ⅵ,其中Ⅲ和Ⅳ显著大于Ⅰ和Ⅱ(p<0.05);粗多糖的最终损失量上,(Ⅰ、Ⅱ)>(Ⅲ、Ⅳ)>Ⅴ>Ⅵ。在组织结构的变化上,蒸制比煮制方式变化慢,特别是Ⅳ的变化延迟较明显。Ⅰ和Ⅴ都是较好的预煮方式,热处理时间分别为12和15 min左右为宜。