枯草芽孢杆菌整合载体的构建及基因组的改造

构建了两种整合载体,分别为单交换整合载体pACC-BdbDC和双交换整合载体pDsbE,pDGC,转化野生型枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis168,目的基因整合到基因组上,同时引入氯霉素抗性基因。利用FLP/frt重组系统将氯霉素抗性基因敲除,便于宿主菌的进一步改造。PCR结果表明共重新构建了6种宿主菌。复杂双交换整合载体pDGC成功将3个目的基因整合到基因组上,为多个基因同时整合提供了一种方便可行的方法。     

响应面法优化重组枯草芽孢杆菌发酵生产青霉素G酰化酶

利用响应面法优化重组枯草芽孢杆菌pAUB-BmPGA／BS168发酵生产青霉素G酰化酶的条件。通过Plackett-Burman设计法对碳源、氮源、无机盐、温度等19个因素对发酵产青霉素G酰化酶的影响进行评价。筛选出发酵温度和酵母膏为影响产酶的显著因素。采用了中心组合设计实验对两种显著影响因素进行了优化,应用响应面分析确定了显著因素的最佳水平。结果表明,当温度为34℃,酵母膏为8．8g／L时,最终的酶活达到28．2U／mL,比初始发酵条件提高了1．19倍。在最佳条件利用15L的发酵罐对重组枯草芽孢杆菌进行扩大培养,最终酶活可达51．0U／mL,相对于摇瓶发酵又有大幅度的提高。     

耐热β-半乳糖苷酶基因bgαB在枯草芽孢杆菌中的整合表达

来源于嗜热脂肪芽胞杆菌Bacillus stearothermophilus的耐热β-半乳糖苷酶基因bgαB被克隆到大肠杆菌—枯草芽胞杆菌穿梭质粒pMA5中，然后将外源基因及其表达调控序列亚克隆到枯草芽胞杆菌整合栽体pSAS144中，转化Bacillus subtilis受体菌BD170，在5μg／mL的氯霉素抗性平板上筛选抗性转化子，经摇瓶发酵后，得到耐热乳糖酶的比酶活为0．32U／mg，是出发菌株比酶活的2倍。     

脱硫枯草芽孢杆菌的筛选

为了有效脱除石油及其产品中的有机硫,从天津大港油田被原油污染的土壤中驯化、分离出对二苯并噻吩具有一定脱除能力的枯草芽孢杆菌。该菌种可生长的pH范围是3－11,NaCl浓度27 g/L时可生长;在30℃,pH为7,NaCl浓度为10 g/L的条件下,生长状况较好。由油品的循环脱硫实验可知,该脱硫菌种可脱除催化裂化柴油中71.56%的硫,原油中67.22%的硫,可以直接应用于油品脱硫,有一定的实际应用价值。     

枯草芽孢杆菌产果胶裂解酶培养基优化研究

通过Plackett-Burman试验设计,从葡萄糖、果糖、豆粕粉、氯化铵、乙酸铵、硫酸铵、蛋白胨、酵母提取物、K2PHO4、KH2PO4、CaCl2等11个相关因子中筛选出对枯草芽孢杆菌产果胶裂解具有显著影响的因子——果糖、豆粕和酵母提取物,选取因子豆粕和酵母提取物进行响应面设计分析,研究结果表明当豆粕和酵母提取物含量分别为100 g/L,25 g/L时,果胶裂解酶活性最大为22.69 U/mL。     

纤维素酶EGA基因在枯草芽孢杆菌中的表达及其产物性质研究

枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis是一种高效的外源蛋白表达菌株,能将目的蛋白分泌到细胞外的培养基中.从福寿螺胃液共生菌株Bacillus sp.Strain AC-1基因组中克隆纤维素酶EGA的基因序列,利用基因工程技术构建纤维素酶EGA的重组枯草芽孢杆菌表达载体pAUsp-ega.该载体含有一个强启动子和一段信号肽,经淀粉诱导能表达外源蛋白.以枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失型菌株WB700为宿主菌,表达得到的重组纤维素酶EGA以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为底物得到的培养基上清酶活力达到1 120 U/L.该纤维素酶在pH 6.0表现最大水解活力,最适反应温度为60℃,在酸性条件下稳定性良好,具有较好的应用前景.     

胞外脂肪酶在枯草芽孢杆菌中的表达及其性质

枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis是一种高产的外源基因表达菌株,外源蛋白能大量分泌到细胞外培养基中.从地衣芽孢杆菌ATCC 14580基因组中克隆胞外脂肪酶全基因序列,并构建枯草芽孢杆菌表达载体pACC-pUB110,得到脂肪酶基因重组载体.该表达载体有一个强启动子,经淀粉诱导能高效表达外源蛋白,以枯草芽孢杆菌胞外蛋白酶缺失型菌株WB700和野生型菌株B.subtilis168为宿主菌,得到的脂肪酶以对硝基苯棕榈酸酯为底物,测得培养基上清总活力达到76.8 μ/mL.该脂肪酶在pH10~10.5表现最大水解活力,最适反应温度为37℃,在强碱条件下稳定性很好.     

枯草芽孢杆菌FM208849产果胶酶发酵条件的优化

枯草芽孢杆菌FM208849是从罗布麻表皮中筛选到的一株高效产果胶酶的菌株,对罗布麻的生物脱胶效果明显。本文从菌种生长与诱导物两个方面对枯草芽孢杆菌FM208849产酶发酵条件进行优化,并对所产果胶酶催化反应条件进行了初步分析。结果表明:最佳产酶培养基为果胶与葡萄糖共4 g/L(质量比为1∶3),牛肉膏15 g/L,NaCl 2 g/L;最佳发酵时间为24 h。初步测定果胶酶的最适反应温度为40℃,最适pH为9.5,其分子质量在39.3 ku左右。     

产胶原蛋白酶枯草芽孢杆菌的筛选

为了得到产胶原蛋白酶的微生物,以海产品市场附近采集的污泥为样品,经过富集培养后通过明胶培养基进行筛选,获得1株产胶原蛋白酶的菌株。通过形态观察和生理生化特征分析,以透明圈和菌落直径之比(HC)为检测指标,初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属。对它产生的胶原蛋白酶进行分离和活力测定,得到的酶活力为44.982 U/mL。经SDS-PAGE凝胶电泳检测,该酶将分子质量为100 ku左右的胶原蛋白水解成为8 ku左右的短肽,说明该酶能有效水解胶原蛋白。     

高表达PGA的枯草芽孢杆菌蛋白质组学研究

为了解外源蛋白高表达时枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)表达系统胞内蛋白质组的变化,实验建立了青霉素G酰化酶(Penicillin G Acylase,PGA)高表达B.subtilis系统,可达到1.6 g/L的表达量以及10 U/mL的酶活;通过双向电泳技术(2-DE)分离PGA高表达以及低表达重组菌中胞内蛋白,软件分析结果显示,两者胞内蛋白表达差异极大;通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定出其中6个差异蛋白,其中4个与PGA高表达抑制菌体生长相关,而PhoR和YxiE则与PGA高表达分泌胁迫机制有关.     

Modified Approach to PGA Phase Averaging for ISAR Autofocus

A new approach to phase averaging in phase gradient algorithm(PGA)is proposed, which is based onthe fundamental fact that the information of translational phase error is widely contained in every defocusedscatterer in ISAR image. The new approach aims to choose strong scatterers for error phase averaging with athreshold rather than just simply to pick out the strongest point in each range cell, which is not necessarily real     

复合诱变选育高产3-羟基丁酮枯草芽孢杆菌

选育高产3-羟基丁酮枯草芽孢杆菌,将一株枯草芽孢杆菌YD-1作为出发菌株,通过紫外线、硫酸二乙酯反复诱变处理,选取每一轮发酵3-羟基丁酮产量最高的菌株进入下一轮诱变。结果表明,菌株的复合诱变条件是在照射距离为25 cm时紫外诱变30 s后再经10%的硫酸二乙酯诱变处理30 min,然后进行有利突变株的筛选,通过初筛、复筛和遗传稳定性试验,获得1株遗传性状稳定的3-羟基丁酮高产菌,其产量高达19.02 g/L,比诱变前提高了50.95%,其遗传物质经RAPD分析,与出发菌株YD-1相比有较大差异。得到的枯草芽孢杆菌新菌株3-羟基丁酮产量高而残糖量低。     

枯草芽孢杆菌与黑曲霉混合发酵制备豆粕饲料

本文对枯草芽饱杆菌与黑曲霉混合发酵制备豆粕饲料的条件进行了研究.研究结果表明在发酵时间为86小时的前提下,枯草芽孢杆菌1389与黑曲霉3.350混合发酵豆粕制备豆粕饲料的最佳发酵条件是:豆粕含量30%、菌种混合比例(枯草芽孢杆菌/黑曲霉)为1:2、发酵温度30℃,在此条件下测得发酵豆粕的蛋白酶酶活值为396.8 U/g,肽转化率值为40.8%.     

枯草杆菌超氧化物歧化酶制备的最佳工艺条件研究

以枯草杆菌为菌种摇瓶培养制备超氧化物歧化酶(SOD).对产酶条件进行研究,并采用有机溶剂二次沉淀法对SOD提取液进行纯化.实验结果表明:产酶的最佳温度为37℃,培养基最佳起始pH为7.8,发酵培养用250 mL锥形瓶以60 mL装液量时酶活力最高,最佳接种量为1.5%(体积分数),最佳培养时间10 h.在此条件下,SOD酶活力为2 186 U/(g.h).纯化方法可行,纯化倍数是提取液的9.2倍.研究结果为SOD提供了新的酶源.