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亲和层析法分离纯化纳豆激酶 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:以纳豆激酶的作用底物纤维蛋白为配基制备亲和层析胶,分离纯化纳豆激酶。方法:纳豆杆菌发酵液经硫酸铵分段盐析、透析得粗酶,在4℃条件亲和层析法分离纯化,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对酶纯度进行检验。结果:经亲和层析得纳豆激酶为电泳纯,纯化倍数为8.3,回收率43.9%。纯酶的最适pH值和温度分别为pH7.0~9.0、50℃;温度高于60℃纤溶酶活性迅速下降;在pH6.0~10.0范围内稳定性好;Mg2+对其有微弱激活作用,Cu2+有显著抑制作用。结论:以琼脂糖包埋纤维蛋白制备的层析胶可用于纳豆激酶的快速分离纯化。 相似文献
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从日本传统食品纳豆中筛选获得一株高产纳豆激酶的盐芽孢杆菌菌株,其产酶能力为227IU/g。该菌株经过固体发酵后获得含酶发酵物,采用硫酸铵分步盐析的方法对纳豆激酶进行了分离纯化,其沉淀物即纳豆激酶,经过分步盐析纳豆激酶的纯化倍数为1.34。 相似文献
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纳豆纤溶酶--纳豆激酶的分离提纯及稳定性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
实验采用硫酸铵分步盐析,Sepharose Butyl Fast Flow疏水层析,Sephamse CM Fast Flow离子交换层析和Superdex75凝胶层析,对纳豆浸提液进行分离纯化,得到电泳纯的纳豆激酶。并研究了纳豆激酶的稳定性,实验结果表明,温度对酶活影响显著;pH6—8范围内酶活相对稳定;Zn^2+、亚硫酸钠对酶活有较大的抑制作用;Al^3+、Cu^2+苯甲酸钠对酶也有一定程度的抑制;Mg^2+、Ca^2+、甘油、明胶、蔗糖、香精是较好的酶活稳定剂和促进剂。 相似文献
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纳豆激酶分离纯化及纤溶活性研究 总被引:10,自引:0,他引:10
经过生理盐水浸提、(NH4)2SO4分级沉淀、Sephadex G-100凝胶层析等纯化步骤,从纳豆中获得层析纯的纳豆激酶,纯化倍数15.6,回收率10.2%,SDS-PAGE电泳显示为二个组分,分子量在29000左右。对其纤溶性质研究表明:纳豆激酶活性的最适pH为8.0,pH6~10溶液中40℃以下基本稳定,pH<5失去纤溶活性;模拟胃环境的酸性条件下,粗酶失去纤溶活性,而纳豆生理盐水浸提液纤溶活性保持25%;SDS-PAGE电泳显示,胰蛋白酶对纳豆激酶成分没有降解作用;体外溶栓作用表明,纳豆激酶溶解纤维蛋白的方式是直接溶解,而不是通过激活纤溶酶原。 相似文献
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利用硫酸铵盐析、季氨乙基-琼脂糖凝胶FF(Q-Sepharose FF)离子交换层析、苯基-琼脂糖凝胶6 FF(Phenyl-Sepharose 6 FF)疏水层析和丁基-琼脂糖凝胶HP(Butyl-Sepharose HP)疏水层析对黑曲霉来源β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,采用十二烷基硫酸钠-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其分子质量,并对其酶学性质进行研究。结果表明,经分离纯化后得到分子质量约为116 kDa的β-葡萄糖苷酶,纯化倍数达到50.39倍,回收率为4.65%,比酶活为103.80 U/mg,该β-葡萄糖苷酶的最适反应温度为60 ℃,最适反应pH值为5.0,在温度30~50 ℃,pH 2.0~8.0之间具有较好的稳定性。 相似文献
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采用盐析及Q Sepharose FF分离纯化酪蛋白胃蛋白酶水解物中的酪蛋白糖巨肽 总被引:3,自引:0,他引:3
本文探讨了利用了(NH4)2SO4分级沉淀、透析脱盐及Q—Sepharose FF层析分离纯化酩蛋白的胃蛋白酶水解物中的CGMP的工艺。结果表明:采用60%饱和度的(NH4)2SO4盐析,可从上清液中直接回收高纯度CGMP,得率为0.71%。低饱和度的(NH4)2SO4可有效脱除杂蛋白。脱盐粗提物CGMP Q—Sepharose FF层析条件为:pH8.5、20mmol/L Tris缓冲液平衡上样,用含0.3mol/L NaCl、20mmol、pH7.1的Tris缓冲液洗脱:浓缩物最大上样量为34.2mg蛋白/ml树脂。利用优化的工艺对水解液层析纯化,纯化产物得率约为2.19%(以酪蛋白汁),总结合态唾液酸回收率为87.4%(以酶解液中的唾液酸汁),糖基化度可提高到0.472以上。整个工艺路线简使、快捷、成本较低,适合工业化生产。 相似文献
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以实验室筛选得到的醋酸菌(Acetobacter pomorum)为实验菌株发酵产酶,通过细胞破壁,采用(NH4)2SO4沉淀、透析、DEAE-Sepharose 离子交换层析及 Superdex G-75凝胶过滤层析分离纯化得到乙醛脱氢酶的酶液,并考察其酶学性质。该酶分子质量为221.60 kDa,单个亚基分子质量约为54.41 kDa,为四聚体结构;纯酶液比活力20.25 U/mg,纯化倍数为10.16倍,乙醛脱氢酶(aldehyde dehydrogenase,ALDH)的回收率为6.53%。酶学性质研究表明,ALDH促进乙醛分解的最适温度为50 ℃,40~50 ℃相对酶活力稳定性好;该酶的最适pH为7.0,当pH在5.5~7.5内酶活力表现稳定;金属离子对酶活性的影响实验表明,Na+、K+、Zn2+、Ba2+对该酶酶有不同程度抑制作用,而Mg2+、Ca2+、Al3+、Li+、Cu2+具有促进作用;ALDH的最适底物为乙醛,相对偏好直链醛类。ALDH活性较大,为后期表达和深入研究其生物学功能提供理论和数据支持。 相似文献
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为获得藏灵菇马克斯克鲁维酵母M3菌株胆盐水解酶(BSH)的纯品,探讨了BSH粗品的分离纯化方法.粗酶液采用硫酸铵分级沉淀,再以DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换介质,分别考察缓冲液pH值、流速和洗脱方式等对BSH分离纯化的影响.结果表明,在40%~70%饱和度的硫酸铵条件下BSH提取效率最高.最佳层析条件为采用pH值为6.5、50mmol/L磷酸钠缓冲体系、1.5mL/min的流速,进行分步洗脱(100mmol/L、350mmol/L、500mmol/L~600mmol/L NaCl及50mmol/L磷酸盐缓冲液3步洗脱).在优化纯化条件下BSH的比活力可达479.55AU/mg,是原粗酶液的23.66倍. 相似文献
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本文对鸡肝酯酶粗酶液分别进行了硫酸铵分级盐析、硫酸铵分级盐析+透析和硫酸铵分级盐析+排阻色谱三种分离纯化操作,并采用四种结构不同的有机磷、氨基甲酸酯类农药,考察了不同的分离纯化操作对鸡肝酯酶对农药抑制响应的影响。发现经过这三种分离操作后,酯酶对农药抑制的响应程度显著提高,其被四种农药抑制的程度分别提高了6.49~11.30%、14.30~26.26%和10.95~39.87%,而敏感酯酶回收率分别为86.07~89.96%、66.60~73.57%和33.01~41.62%。由于分级盐析+排阻色谱的回收率过低,分级盐析+透析操作对于大规模的检测用酶制备更为实用。此外,研究还发现对这四种农药较敏感的酯酶均集中地分布在相同的分离部分,因此推测鸡肝酯酶粗酶液中对农药抑制敏感的酯酶可能是一种酶或几种溶解性质及分子量都比较接近的酶的混合。 相似文献
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以新鲜仙人掌为材料,去表面刺和蜡质、清洗、打浆、过滤、超声波处理、离心,得仙人掌粗酶液,再经硫酸铵盐析和Sephadex G-100柱层析,对仙人掌SOD初步纯化.超声波处理能够提高仙人掌SOD的提取率,超声波功率600W、温度40℃与时间20min的组合,所得SOD活力最高,达到215.6U/mL.硫酸铵饱和度40%和85%分别用于除杂质和沉淀SOD目标蛋白,有较好的纯化效果,Sephadex G-100能使SOD得到一定程度的纯化. 相似文献
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为了高效制备贯筋藤凝乳酶,利用逐级盐析结合双水相萃取对贯筋藤凝乳酶进行纯化,研究成相物质、聚乙二醇(PEG)/盐最佳纯化配比及酶用量对酶凝乳纯化的影响,应用SDS-PAGE电泳技术检测贯筋藤凝乳酶的纯度。结果表明:当硫酸铵饱和度区间为20%~40%,贯筋藤粗酶比活力较高,为167.846 MCA/mg;当PEG相对分子质量为6000且质量分数为20.57%、盐相为硫酸铵且质量分数为14.74%,酶用量为1.0 mL时,贯筋藤凝乳酶活力提高1.87倍。电泳图显示贯筋藤凝乳酶纯度较高,分子量约为25 kDa。利用双水相法分离纯化可获得高纯度的贯筋藤凝乳酶,可为贯筋藤凝乳酶后续规模化生产及应用提供参考价值。 相似文献
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Cook CL Pao W Firca JR Anderson BE Fryer JP 《Journal of Bioscience and Bioengineering》2001,91(3):305-310
For many applications avian antibody from egg yolk (IgY) offers advantages over the well-known mammalian antibodies. Different experimental techniques for the purification of IgY from chickens immunized with an alphagalactose-containing antigen (alphaGal-trisaccharide) were compared. These included ammonium sulfate precipitation, filtration with diatomaceous earth, treatment with deoxycholate, and thiophilic and affinity chromatography. Samples were tested for overall purity, protein and lipid content, and specific activity. Evaluated on the basis of these results and the simplicity of the process, the favored purification method is ammonium sulfate precipitation of diluted egg yolk directly followed by affinity chromatography. The high lipid content of IgY preparations is greatly reduced by either thiophilic or affinity chromatography. Affinity purification of ammonium sulfate precipitated material resulted in anti-alphaGal-trisaccharide IgY preparations with approximately 1% of the original protein content but approximately 100-fold higher specific activity for the alphaGal-trisaccharide epitope. 相似文献