胶体金层析免疫法对盐酸克伦特罗的检测试验

盐酸克伦特罗俗称"瘦肉精",若大量添加到猪饲料中,将在猪肉及内脏中残留,给食品安全带来了隐患。传统的检测技术繁琐,成本高,不利于推广普及。本实验利用胶体金层析法检测盐酸克伦特罗,结果表明:最低检测限度为5 ppb,具有简便、便捷、快速、灵敏度强的特点。     

胶体金免疫层析试纸条在食品安全检测中的研究进展

为了提高免疫检测的速度,简化操作步骤,建立了胶体金免疫层析技术。它是利用纤维膜的毛细作用,使待测物和金标物(抗原/抗体)沿膜表面向前运动,与检测区的捕获物特异结合而聚集显色。它既有免疫学方法的特异性,又有简便快速,无需仪器的优点。本文主要介绍了胶体金免疫层析技术的在食品安全检测中的应用,并对胶体金免疫层析试纸条技术的发展进行了展望。     

氰戊菊酯残留胶体金免疫层析试纸条研制

应用胶体金免疫层析技术研制出一种准确、快速、简便检测氰戊菊酯农药残留的试纸条.采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记氰戊菊酯单克隆抗体,以硝酸纤维素膜为载体,包被氰戊菊酯抗原作为检测线(T线),包被兔抗鼠IgG抗体作为质控线(C线),经过竞争反应后目测结果.实验结果表明,该快速检测试纸条100%抑制浓度为800 ng/m...     

胶体金免疫层析法检测小分子物质

在过去的6年里,胶体金及免疫层析试剂越来越多的被用于快速检测上。这一简单免疫层析试剂给很多不同分析物提供了简便而又快速的方法,它的出现给很多工业带来了冲击。最近,胶体金免疫层析法检测小分子物质的报道日益增多,特别是对兽药和农药的检测。文章主要讲述了用于检测小分子物质的胶体金检测试纸的制备原理、检测原理、应用和进展。     

白斑综合征病毒胶体金免疫层析试剂板的研制

目的研制检测对虾中白斑综合征病毒(white spot syndrome virum,WSSV)的胶体金免疫层析试剂板。方法分别制备抗WSSV单克隆抗体和多克隆抗体,并用胶体金标记单克隆抗体,将胶体金标记的抗WSSV单克隆抗体包被在金标垫上,抗WSSV多克隆抗体和羊抗鼠Ig G分别包被在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上,组装成试剂板,通过双抗体夹心法检测样品中WSSV含量。确定试剂板检测WSSV的最低检出限,验证其特异性,并检测其与ELISA结果的符合率及稳定性。结果该试剂板对WSSV的最低检出限为1.0 mg/kg,特异性强,与ELISA实验结果相符,在室温条件下(20~25℃)可保存12个月。整个检测所需时间为8~10 min。结论该试剂板能快速有效地筛查WSSV,适合现场快速检测。     

呋喃唑酮代谢物单克隆抗体及其新型免疫层析检测试纸条的制备

目的制备呋喃唑酮代谢物AOZ单克隆抗体及其胶体金与荧光淬灭免疫层析试纸条。方法将AOZ衍生成CPAOZ后,与载体蛋白BSA偶联,制备完全抗原CPAOZ-BSA,经皮下多点注射免疫BALB/c小鼠,共5次,取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,获得稳定分泌特异性抗体的杂交瘤细胞株。利用获得的抗CPAOZ单克隆抗体制备胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条,并对试纸条的灵敏度及特异性进行验证。结果制备的完全抗原经紫外扫描鉴定偶联成功。共获得3株能稳定分泌抗CPAOZ单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中效价和特异性最好的1株2H11针对CPAOZ的50%抑制质量浓度(IC50)为0.88 ppb。以该抗体制备的胶体金及荧光淬灭免疫层析试纸条的最低检测限分别为7.5和0.062 5 ppb;两种试纸条与其他3种硝基呋喃类代谢物CPAMOZ、CPAHD、CPSEM均不存在交叉反应。结论成功制备了抗CPAOZ单抗及其胶体金免疫层析和荧光淬灭免疫层析试纸条,两种试纸条均具有较高的灵敏度和较强的特异性,其中荧光淬灭免疫层析试纸条的灵敏度较胶体金免疫层析试纸条高约100倍,具有良好的应用前景。     

D-二聚体胶体金免疫层析定量检测方法中包被浓度和标记浓度对其线性的影响

目的探索不同包被浓度和不同标记浓度对D-二聚体胶体金免疫层析定量检测方法线性的影响。方法采用尿激酶裂解纤维蛋白的方法制备D-二聚体标准品,用所制备D-二聚体试纸条对其在金标定量仪上进行检测以建立标准曲线;用此标准曲线对已用罗氏公司的D-二聚体检测试剂盒(免疫比浊法)定值过的血清进行检测,并对这两种结果进行相关性比较。结果①成功建立了D-二聚体胶体金免疫层析定量检测方法的标准曲线,线性范围为0.15625～10 ug/mL,R~2为0.98297;与罗氏公司免疫比浊法检测方法的相关性良好,相关系数R~2为0.98486;②确定出D-二聚体胶体金免疫层析定量检测方法的最佳标记浓度和最佳包被浓度分别为1 mg/mL和1.5 mg/mL。结论本研究成功建立了D-二聚体胶体金免疫层析定量检测方法的标准曲线,且确定出D-二聚体胶体金免疫层析定量检测方法的最佳的包被浓度和最佳的标记浓度。     

胶体金免疫层析法快速检测水果中三氯杀螨醇残留

[目的]建立了快速检测水果中三氯杀螨醇残留的胶体金免疫层析方法.[方法]在对固相载体进行优化的基础上,基于竞争抑制模式建立胶体金免疫层析方法.[结果]该方法对水果中三氯杀螨醇的检出限为1.0 mg/kg,满足国家标准对水果中三氯杀螨醇最大残留限量的要求,且特异性良好.[结论]该方法具有快速、简便、经济实用等特点,适用于...     

胶体金免疫层析法快速检测水样品中的镉离子

目的研制检测水样品中镉离子残留的胶体金免疫层析快速检测试纸条。方法采用免疫竞争法,将抗Cd2+-EDTA单克隆抗体-胶体金复合物包被于胶体金结合垫上,并将人工合成的Cd-iEDTA-BSA检测抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面,作为检测线(T线),3～5min后,根据颜色直观显示检测结果。对试纸条进行灵敏度、特异性和稳定性验证,并检测添标水样。结果制备的试纸条对镉离子的最低检测限为100ng/ml;除了与Hg2+-EDTA有交叉反应外,与Fe3+、Pb2+、Cu2+等类似物无交叉反应;试纸条在常温下放置8周稳定性良好;检测添标水样的结果与ICP-AES的检测结果一致。结论胶体金免疫层析法操作便捷,稳定可靠,可作为水样中重金属镉离子残留现场检测和监控的有效手段。     

艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的原核表达及其胶体金免疫层析检测方法的建立

目的原核表达艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH),并建立GDH胶体金免疫层析检测方法。方法以艰难梭菌(ATCC BAA-1382)全基因组为模板,PCR法扩增GDH基因,并克隆至载体pET-30a(+),将重组质粒转染至E. coli BL21(DE3),诱导表达重组GDH,并优化IPTG终浓度(0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0 mmol/L)、诱导时间(0、2、4、6 h)及诱导温度(31、34、37℃),表达产物采用Ni-NTA purificationSystem进行纯化。用纯化蛋白免疫家兔,以获得的多克隆抗体作为金标抗体,制备胶体金试纸条,并验证其灵敏性、特异性、精密性及稳定性。结果经双酶切及测序鉴定,重组质粒p ET-30a-GDH构建正确。最适诱导表达条件为:于37℃,IPTG终浓度为0. 8 mmol/L诱导4 h。获得的免疫血清效价达1∶51 200,制备的胶体金试纸条灵敏性为60 ng/mL,与其他肠道菌无交叉反应,批内、批间结果无差异,且具有良好的稳定性。结论原核表达了重组GDH,成功建立了GDH胶体金试纸条检测方法,且灵敏性、特异性、精密性及稳定性均良好,具有临床应用价值。     

破伤风抗体胶体金检测试剂盒的研制

目的 研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒。方法 应用胶体金免疫斑点法研制破伤风抗体胶体金检测试剂盒,并对破伤风类毒素免疫的豚鼠及人血清的破伤风抗体水平进行测定。结果 该试剂盒所测定的结果与小鼠体内法的相关性好(r>0.95,P=0.25),远优于目前使用的间接血凝法(r<0.10);且该试剂盒的灵敏度较小鼠法高1倍,特异性强,无交叉反应,精密准确。结论 可用于临床检测患者创伤后的血清破伤风抗体水平。     

胶体金法检测结核抗体对结核病诊断的价值探讨

目的建立快速、简便、准确的结核病诊断与鉴别诊断方法。方法使用澳大利亚进口上海奥普医药公司分装TB-DOT试剂检测我院250例结核与非结核患者血清中的结核抗体,并进行比较分析。结果通过该法检测结果分析表明肺结核与肺外结核患者结核抗体阳性率均显著高于非结核患者。结论该检测方法操作简便、快速、准确率较高,可作为结核病诊断及鉴别诊断的方法之一。     

A群脑膜炎球菌荚膜多糖排溢法ELISA的建立及初步应用

目的建立A群脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A meningococcal polysaccharide,GAMP)排溢法ELISA,并进行验证及初步应用。方法采用改良过碘酸盐氧化法制备抗GAMP-HRP。以抗GAMP单克隆抗体包被酶标板,抗GAMP-HRP作为酶标抗体,建立检测GAMP的排溢法ELISA。采用棋盘滴定法确定包被抗体及酶标抗体的最佳工作浓度,并对其特异性、敏感性及重复性进行验证。采用建立的排溢法ELISA检测GAMP-TT系列层析样品中的GAMP抗原活性,并与传统一步法ELISA及二步法ELISA进行比较。结果建立的排溢法ELISA的包被抗体最佳浓度为20μg/ml,酶标抗体最佳工作浓度为1∶128。该方法的特异性良好,敏感性与一步法和二步法相当,批内和批间变异系数与一步法相当;该方法检测GAMP-TT层析样品中的GAMP抗原活性的结果与二步法ELISA基本一致。结论排溢法ELISA的操作步骤与一步法ELISA大致相似,但较二步法ELISA显著简化,其对一步法ELISA中Hooks效应的纠正效果与二步法ELISA相同。     

肠病毒71型空斑检测方法的建立

目的建立肠病毒71型(EV71)空斑检测方法,为EV71生物学特性及疫苗的研究提供手段。方法将不同稀释度的5株EV71分别接种至单层RD细胞和Vero细胞,加入甲基纤维素覆盖,计数空斑,并计算病毒滴度。通过3次连续检测,验证空斑法的精密性,并对空斑法与微量细胞病变法检测病毒滴度的结果进行比较。结果采用RD细胞和Vero细胞,通过空斑法对EV71病毒滴度进行检测,96h后均能规律地出现边缘整齐、清晰的空斑,RD细胞和Vero细胞检测的空斑直径分别为1～2mm和0.5～1mm。连续3次重复试验结果显示,试验间变异系数的平均值Vero细胞为2.52%,RD细胞为4.49%。空斑法与微量细胞病变法比较,其检测结果具有良好的线性相关性,相关系数为r=0.972,P=0.006。结论已建立了精密性好、出斑规律的EV71病毒空斑检测方法。     

Development of multimodal membrane adsorbers for antibody purification using atom transfer radical polymerization

This contribution describes a graft polymerization strategy to prepare multimodal membranes, a new class of high-productivity adsorptive materials for the purification of therapeutic proteins. Surface-initiated atom transfer radical polymerization was used to graft poly(glycidyl methacrylate) ‘tentacles’ from the pore surfaces of macroporous regenerated cellulose membranes. Subsequently, 4-mercaptobenzoic acid was coupled to the membranes by an epoxide ring-opening reaction. ATR-FTIR measurements support successful ligand incorporation. Graft polymerization studies from cellulose-coated silicon substrates were done in parallel to measure the thickness evolution of the polymer coating, which plays an important role on protein binding capacities. Protein binding experiments with bovine immunoglobulin G show that the multimodal membranes have high equilibrium capacities, up to 150 mg IgG/mL. The binding capacities are pH-dependent, with maximum binding at pH near the protein isoelectric point. Characteristic of multimodal adsorbers, the membranes retain about 70% of their equilibrium binding capacity at moderate ionic strength (300 mM) and about 40% at high ionic strength (1.6 M).     

抗狂犬病病毒抗体的制备及酶联免疫法的建立

目的制备具有中和活性的抗狂犬病病毒(Rabiesvirus,RV)抗体,并建立检测RV抗原的ELISA法。方法以RV全病毒免疫2只新西兰家兔,制备抗RV多克隆抗体。以RV全病毒免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,建立稳定分泌抗RV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。以小鼠中和试验(MNT)检测抗体的中和活性。以ELISA双抗体夹心法和ELISA竞争法检测RV抗原。结果2只家兔的多克隆抗体ELISA效价分别为1∶6.0×103和1∶1.2×104,纯化的兔抗RVIgG中和活性分别为46.3和29.2IU/ml。获得了9株稳定分泌抗RV的单克隆抗体杂交瘤细胞株,属于IgG1或IgG2b亚型,腹水的抗体ELISA效价为1∶1.0×105~1∶1.0×107。单克隆抗体3E5、4C2和4F8具有中和活性,Westernblot分析提示,单克隆抗体4C2是针对RV糖蛋白线性表位的抗体。以单克隆抗体4C2作为捕捉抗体,兔多克隆抗体作为检测抗体,建立了ELISA双抗体夹心法,检测RV抗原。同时建立了另一种ELISA竞争法,加入固定工作浓度的单克隆抗体4C2,与RV病毒液孵育,以ELISA间接法检测RV病毒抗原。结论所获得的狂犬病毒多克隆和单克隆抗体具有中和活性,可在ELISA中用于检测RV抗原。     

纳米条码检测技术研究进展

在宏观世界里,条码识别方法由于其快速、简单和精确的特性,在日常生活中随处可见。同时,由于人们对更微小项目需要进行识别,以及直接检测生物化学反应的需要,原理相似的纳米条码检测技术也应用于微观世界。文章综述了近年来纳米条码的产生、种类、检测以及应用等方面的发展。     

牛血清白蛋白单克隆抗体的筛选与双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的筛选高效抗牛血清白蛋白(BSA)单克隆抗体细胞株,并建立BSA抗原检测的双抗体夹心ELISA法。方法分别采用辛酸-硫酸铵法和葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化单抗,并进行抗体类型、腹水效价、特异性和相对亲和力测定;应用纯化的单抗建立BSA双抗体夹心ELISA检测法,并进行初步应用。结果筛选出4株可稳定分泌抗BSA单抗的杂交瘤细胞株,抗体类型为IgG,抗体滴度均可达10-6,特异性良好,相对亲和力较高。建立的双抗体夹心ELISA法线性范围为1.25～20ng/ml,R2>0.98,灵敏度为1.25ng/ml。结论已筛选出高效抗BSA的单抗,并建立了BSA双抗体夹心ELISA检测方法。     

呼吸道合胞病毒空斑检测方法的建立及应用

目的建立呼吸道合胞病毒(RSV)空斑检测方法,并用于病毒滴度的定量。方法将不同稀释度的RSVA2株病毒液分别接种于Hep-2细胞单层,加0.6%营养琼脂糖覆盖,培养6d后用10%甲醛固定。去除覆盖层,0.05%中性红染色,按文献报道的方法进行空斑计数。建立空斑法测定RSV滴度的标准曲线,并验证空斑法的准确性及精密性,应用建立的空斑法检测RSV感染BALB/c小鼠肺组织中的RSV滴度。结果RSVA2株感染的Hep-2细胞出现典型的空斑,直径约1～3mm,形态呈圆形或类圆形。空斑法的最低检测限为3.4×101PFU/ml,线性关系良好,相关系数r=0.999996,准确性及精密性均良好。RSV感染的BALB/c小鼠肺组织标本均出现数量不等的空斑。结论所建立的RSV空斑测定方法敏感、准确,能稳定地对病毒滴度进行定量测定,为进一步研究RSV的感染性和免疫原性奠定了基础。     

胶体铜催化丙烯腈水合制丙烯酰胺的反应动力学

研究了以胶体铜为催化剂，丙烯腈水合制丙烯酰胺反应动力学。实验表明，吸附、表面反应、解析，在反应过程中占有重要地位，属于多相催化反应动力学。若以吸附在铜颗粒表面的丙烯腈与液相中的水之间的反应为控制步骤，导出的化学反应动力学方程与实验结果较好的一致，在实验温度４０～９０℃范围内，求得活化能Ｅａ＝１３．１４ｋＪｍｏｌ－１。