C30-HPLC-PDA分离与鉴定β,β-胡萝卜素几何异构体

在装备了二极管阵列(PDA)检测器的HPLC上,应用C30固定相,β,β-胡萝卜素的几何异构体获得了良好的分离。分离条件为:固定相=YMCCarotenoidS-5(4.6×250mm)柱;流动相A=乙腈:甲醇:三乙胺(75:25:0.05,V/V);流动相B=甲基叔丁基醚(MTBE)-三乙胺(100:0.05,V/V);线性梯度:B在20min内由0%增至80%;流速=1.0ml/min;PDA波长范围=260～700nm;进样量=20μl。根据各组分的色谱行为、光谱特征和在碘催化下发生几何异构的产物分析,13,13’-、11,11’-、9,9’-顺式和全反式异构体被鉴定。本项研究的结果奠定了应用C30-HPLC-PDA定量检测β,β-胡萝卜素的几何异构体的基础。     

虾青素立体异构体与牛血清白蛋白的相互作用

该论文采用多光谱、表面等离子共振和分子对接,研究虾青素（Astaxanthin,AST）立体异构体与牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin,BSA）的相互作用机制。研究发现,AST异构体均结合于BSA亚结构域Ⅱ A和Ⅲ A的交界处,并且对蛋白质的构象没有明显影响。AST异构体对BSA具有相似的结合亲和力（左旋AST 4.17×10-7 mol/L,右旋AST 3.91×10-7 mol/L）和结合动力学（慢结合、慢解离）,然而在较高浓度下（0.35~1.78 μmol/L）左旋AST的最高结合响应值均高于右旋AST。此外,左旋和右旋AST与BSA相互作用的焓变ΔH分别为-175.09和-149.42 kJ/mol,熵变ΔS分别为-502.72和-417.65 J/(mol•K),负值的ΔH和ΔS表明AST-BSA发生结合的主要相互作用力是氢键和范德华力。分子对接显示左旋AST与Lys504、Thr190残基形成键长为2.0 Å、2.7 Å的氢键,而右旋AST与Arg435残基形成键长为2.9 Å的氢键。这项研究有助于阐明AST立体异构体与BSA的结合机制,并为AST异构体在血液循环中潜在的药代动力学提供重要的理论指导信息。     

高效液相色谱法快速鉴别人工合成虾青素养殖的三文鱼

建立了虾青素手性异构体分离和检测的HPLC 方法。条件：采用手性固定相色谱柱;Pirkle L- 亮胺酸(4.6mm × 25cm,5μm); 流动相：正己烷- 四氢呋喃- 异丙醇- 三乙胺(77:17:3:3,V/V);紫外检测波长：474nm;流速：0.75ml/min。本法可应用于快速鉴别养殖三文鱼是否使用了人工合成虾青素,并可以初步判断是否为野生三文鱼。     

不同几何构型虾青素的体外抗氧化作用及对秀丽隐杆线虫氧化应激的保护作用

本研究以全反式、9-顺式和13-顺式虾青素为研究对象,采用体内外相结合的方法,揭示不同几何构型虾青素的抗氧化作用和对氧化应激损伤的影响。结果表明：在清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基方面,3?种不同几何构型虾青素之间均没有显著差异（P＞0.05）;在清除2,2’-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸自由基方面,9-顺式虾青素显著强于13-顺式和全反式虾青素（P＜0.05）;在氧化自由基吸收能力方面,9-顺式虾青素显著高于13-顺式虾青素（P＜0.05）,13-顺式虾青素和全反式虾青素之间没有显著差异（P＞0.05）;在二氯百草枯诱导的氧化应激条件下,3?种几何构型虾青素均能显著提高秀丽隐杆线虫的存活率（P＜0.05）,但它们之间无显著差异（P＞0.05）;与对照组相比,9-顺式和全反式虾青素显著降低线虫体内活性氧的积累量（P＜0.05）,分别下降56.05%和15.07%,9-顺式虾青素处理组与13-顺式虾青素处理组、全反式虾青素处理组均有显著性差异（P＜0.05）。因此,3?种几何构型虾青素均具有体外抗氧化作用和对氧化应激损伤的保护作用,9-顺式虾青素的活性优于全反式和13-顺式虾青素。     

利用高效液相色谱法测定雨生红球藻中虾青素含量

利用高效液相色谱法对雨生红球藻中的虾青素含量进行了测定。色谱柱为KromasilC18柱(250×4.6mm),流动相为二氯甲烷∶甲醇∶乙腈∶水=5∶85∶5∶5,流速1mL/min,检测波长480nm,柱温25℃。虾青素在1.896～18.96μg/mL范围内线性关系良好,r=0.9999,RSD=1.12%(n=6),回收率为99.69%～102.6%。本方法简便快速,定量准确,重现性好。     

应用高效液相色谱检测红法夫酵母胞内虾青素的含量

采用高效液相色谱法定量地测定了红法夫酵母胞内虾青素的含量。色谱条件为 :色谱柱KromasilC18,5 μm ,(2 5 0× 4 6 )mm ;流动相为V(甲醇 )∶V(乙腈 ) =9∶1;流速 1 4mL/min ;检测波长 4 78nm ;柱温为室温。加标回收率为 98 2 %～ 10 0 8%。     

高效液相色谱法测定动物源性食品中角黄素、虾青素的研究

研究并建立了高效液相色谱测定动物源性食品中角黄素、虾青素的方法。采用加有抗氧剂BHT的乙腈提取、正己烷脱脂制备样液。黄鱼、鳗鱼、鸡肉、鸡蛋、鸭肝、猪肾、牛奶等样品添加0.1～1 mg/kg的角黄素和虾青素时,角黄素和虾青素平均回收率范围分别为84.2%～103.1%和83.1%～98.7%,RSD范围分别为3.0%～10.5%和2.0%～8.9%,测定低限0.1 mg/kg。     

高效液相色谱法分析检测虾青素

采用HPLC反相色谱法 ,通过外标法定量测定了红法夫酵母和虾壳提取物中的虾青素含量 ,计算公式为 :A =2 96 39C+ 70 6 0。该方法的回收率为 98 0 %～ 10 0 8%     

液固吸附色谱法分离番茄红素异构体

本文应用液固色谱法成功对5个样品中番茄红素的异构体实现了分离。5个样品中的番茄红素均以反式结构为主，但差异很大，新鲜番茄中反式的番茄红素占96．38％，1％番茄红素油树脂中反式结构的番茄红素只有37．65％。根据其特征紫外吸收和保留时间等特征对异构体的种类进行了初步复写。为进一步研究番茄红素异构体的物化性质和生理活性打下了基础。     

Mechanism of Different Stereoisomeric Astaxanthin in Resistance to Oxidative Stress in Caenorhabditis elegans

As a potent antioxidant in human diet, astaxanthin (AST) may play important roles in alleviating oxidative stress‐driven adverse physiological effects. This study examined the effects of different stereoisomers of AST in protecting Caenorhabditis elegans from chemically induced oxidative stress. Three stereoisomers of AST investigated herein included 3S,3´S (S) AST, 3R,3´R (R) AST, and a statistical mixture (S: meso: R = 1:2:1) (M) AST. Under paraquat‐induced oxidative conditions, all three types of AST significantly enhanced survival rate of C. elegans. The accumulation levels of ROS in the worms were reduced by 40.12%, 30.05%, and 22.04% by S, R, and M AST, respectively (P < 0.05). Compared with R and M AST, S significantly enhanced the expression levels of SOD‐3. The results of RNA‐Seq analysis demonstrated that AST protected C. elegans from oxidative damage potentially by modulating genes involved in the insulin/insulin‐like growth factor (IGF) signaling (IIS) pathway and the oxidoreductase system. It is noteworthy that different stereoisomers of AST showed different effects on the expression levels of various genes related with oxidative stress. This study revealed important information on the in vivo antioxidative effects of AST stereoisomers, which might provide useful information for better utilization of AST.     

虾青素性质与开发

虾青素是一种很强抗氧化剂,该文阐述虾青素抗氧化、防紫外线、抗肿瘤和其它特性及在人体健康方面许多功能作用。     

高效液相色谱法测定虾壳中的虾青素

建立高效液相色谱法(HPLC)测定虾壳中虾青素的方法。通过正交试验考察虾壳中虾青素的最佳提取条件。结果表明,以乙酸乙酯为提取剂,超声波辅助处理30min,后振荡15min,重复两次,虾青素可被充分提取。该方法虾青素质量浓度在0.2～10μg/mL 内具有良好的线性关系(R2=0.9999),回收率在80.41%～109.21% 之间,相对标准偏差在4.65%～7.45% 之间,虾青素定量限为0.075mg/kg。该法分析快速准确、灵敏度高、重现性好,回收率高。     

虾青素的生理功能及其应用

虾青素是一种非维生素A原的类胡萝卜素 ,呈艳丽红色 ,为脂溶性 ,具有高效抗氧化、抗癌变、增强免疫及着色等功能 ,目前已被广泛应用于食品、医药、化妆品和饲料等的生产。     

固相萃取—C30—RPLC法测定南极磷虾油中的虾青素

建立用固相萃取预分离、测定南极磷虾油样品中虾青素3种同分异构体的高效液相色谱法。样品经固相萃取小柱预分离净化,加NaOH-甲醇溶液皂化反应后,经YMC-Carotenoid C30色谱柱分离得到虾青素3种同分异构体,采用外标法定量。南极磷虾油中虾青素的最佳净化条件为：以LC-NH2为固相萃取小柱,正己烷-丙酮-甲醇(1:2:2,V/V)为洗脱溶剂,洗脱体积为8mL,洗脱流速控制在2～4mL/min。样品经LC-NH2固相萃取小柱净化后平均添加回收率为86.1%～94.3%,相对标准偏差为0.79%～1.91%。结果表明,方法重现性好,回收率高,适用于南极磷虾油中虾青素含量分析。     

食用虾中虾青素类化合物的含量和组成

虾青素的抗氧化能力高于β-胡萝卜素、玉米黄质、角黄质、VC和VE,其防止大鼠线粒体脂质过氧化的功效是VE的100～500倍。本研究针对从北京市场购买的五种食用虾,应用UV-VIS和C30-PDA-HPLC的检测方法,对其中虾青素含量和组成进行分析。结果表明:此五种虾的虾壳中,虾青素单体和酯含量较高,虾肉中的含量相对较少。在价格昂贵的澳洲龙虾肉中未检出虾青素,而南美白对虾肉中的虾青素含量较高。常见虾的壳呈暗蓝色或青灰色,但有些龙虾的壳(部分或全部)呈现橘红色,其着色物质的组成有待进一步研究和比较。     

高效液相色谱手性拆分法分析生物体内虾青素光学异构体

建立一种高效液相色谱手性拆分法分析不同生物中3 种虾青素光学异构体含量的方法。以Chiralpak IC色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）为固定相,以甲基叔丁基醚-乙腈（95∶5,V/V）为流动相,采用等度洗脱,流速1.0 mL/min,二极管阵列检测器检测波长为476 nm,选用雨生红球藻、红法夫酵母、南美白对虾、中国对虾、日本对虾、三文鱼、梭子蟹7 种生物样品为研究对象,分析其虾青素光学异构体,线性范围为0.1～50 mg/L,相关系数为0.999 9,回收率为86.2%～98.3%,方法稳定性良好。结果表明,该方法可行、快速简便、准确可靠。     

适于烟草生物反应器的真核生物源虾青素合成酶筛选

为揭示不同真核生物源虾青素合成酶在烟草中的异源表达生物活性特征,明确开发虾青素烟草生物反应器的关键分子基础,本研究对夏侧金盏花（Adonis aestivalis）、雨生红球藻（Haematococcus pluvialis）及红发夫酵母（Xanthophyllomycesdendrorhous）3种真核生物源虾青素合成酶基因进行了密码子优化合成及表达载体构建,通过农杆菌介导的瞬时表达和稳定表达试验比较了其在烟草中合成虾青素的活性差异。结果表明,3种来源的虾青素合成酶基因均能在烟草中表达,但是仅夏侧金盏花和雨生红球藻来源的合成酶能在烟草中特异合成虾青素,且夏侧金盏花虾青素合成酶的活性最高。此外,稳定表达体系优于瞬时表达体系,能准确展示不同虾青素合成酶的活性差异。本研究为真核生物源虾青素合成酶在烟草生物反应器中的应用提供了重要基础。     

β-胡萝卜素异构体的定性分析

本研究发展并改进了以C30柱分离检测β-胡萝卜素异构体的高效液相色谱（HPLC）方法。在甲醇-MTBE-水（50：45：5,V/V/V）为流动相、检测波长为455nm、流速为1ml/min的色谱条件下,β-胡萝卜素熔融样品中至少有8种物质在10min内得到显著分离。借助液相色谱-大气压化学电离源质谱联用（HPLC-APCI-MS）法检测这8种物质被认为可能是β-胡萝卜素的异构体,通过比较它们的光谱特征和Q值,这些物质被依次鉴定为：15-顺-、13-顺-、9,15-双顺-、9,13-双顺-、全反式-、13,15-双顺-、9-顺-和9,13＇-双顺-β-胡萝卜素。     

二十二碳六烯酸虾青素酯的合成及质谱分析

以二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid,DHA)与虾青素作为反应底物合成DHA虾青素酯,探索出最佳反应条件为:虾青素250 mg、DHA 282 mg、无水丙酮5 m L、4-二甲氨基吡啶(DMAP)100 mg、1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亚胺(EDCI)100 mg,充氮、避光、磁力搅拌,25℃反应3 h。液相色谱-质谱联用鉴定结果表明:产物中存在游离虾青素、DHA虾青素单酯、DHA虾青素双酯。经高效液相色谱法测定,采用峰面积归一法进行积分计算出各组分含量,结果表明,最佳反应条件下,产物中DHA虾青素酯峰面积可达95.67%,其中主要为DHA虾青素双酯(77.46%)、部分DHA虾青素单酯(18.21%)和少量游离虾青素(3.24%)。用硅胶层析柱进行梯度洗脱,增加溶剂极性(石油醚-丙酮体积比100∶0~92∶8)依次洗脱出DHA虾青素双酯、DHA虾青素单酯,纯度分别为(98.2±0.5)%和(94.0±0.6)%。     

营养强化混养条件下提高色绿藻生物量和虾青素产量

本研究在混养条件下,系统地比较了葡萄糖浓度、氮源种类以及不同碳氮比对色绿藻生物量和虾青素产率的作用规律。目的是在短时间内达到最高生物量同时获得较高含量的虾青素,为建立色绿藻高密度快速扩种和诱导积累虾青素应用技术提供科学依据。研究结果表明:在混养条件下,当葡萄糖浓度一定时,硝酸钠是细胞生长所需的最优氮源,6 d可达到最高生物量浓度9.23 g/L,平均比生长速率为0.24/d,虾青素产量为12.38 mg/L,虾青素占总类胡萝卜素的比例高达46.94%。至于不同碳氮比、葡萄糖浓度对色绿藻生物量和虾青素生产的影响,当葡萄糖浓度为30 g/L、C/N比为34为细胞生长的最优条件,生物量浓度最高为11.28 g/L,平均比生长速率高达0.32/d;虾青素含量显著优于其他组(p0.05),虾青素的产量为21.77 mg/L,虾青素占总类胡萝卜素的比例进一步提高到52.71%。本研究结果对于色绿藻高密度快速生长并积累大量虾青素的放大技术开发具有重要的指导意义。