酪蛋白沉淀测定方法在市售纯牛乳中的应用与验证

为了改进乳品中蛋白质含量的测定方法,在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,增加了NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物,结合凯氏定氮法对2种市售纯牛乳中的乳蛋白组分进行了测定。实验结果表明,酪蛋白质量分数约为61%,酪蛋白和乳清蛋白相加得到的理论蛋白质含量与实际测定的总蛋白质质量分数误差不超过1.38%,改进后的等电点沉淀分离结合凯氏定氮法高效准确,重现性好,可以用于纯牛乳中酪蛋白的掺假鉴定。     

饮料中提取酪蛋白的方法选择

目的探索4种沉淀蛋白质的方法在提取饮料酪蛋白过程中对其复溶率的影响,为建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法鉴别饮料中酪蛋白亚型及相应含量的测定寻找最佳前处理方法。方法选取乳粉、以乳粉或牛乳为原料的饮料、添加酪蛋白或酪蛋白酸钠的饮料作为测试样品,用pH 8.5的Tris-HCl溶液溶解,采用等电点沉淀法、乙腈沉淀法、丙酮沉淀法和乙醇沉淀法提取样品中的蛋白质,低温离心后对沉淀的蛋白质进行复溶,用考马斯亮蓝法分别测定沉淀前和复溶后样品溶液中可溶性蛋白质的含量,计算类酪蛋白的复溶率。结果乳粉和3类饮料中的酪蛋白经等电点沉淀法提取后,乳粉的类酪蛋白复溶率在64.95%~66.20%之间,3种饮料中的类酪蛋白复溶率在69.73%~84.95%之间,等电点沉淀法优于其他3种沉淀方法。αs-酪蛋白标准物质和β-酪蛋白标准物质的复溶率分别为70.16%和87.17%,且经高分辨质谱确证其复溶后的主成分为酪蛋白。另外对45种含酪蛋白饮料中的类酪蛋白含量进行了测定,其含量在0.10~42.36 mg/g(mg/mL)之间。结论等电点沉淀法提取类酪蛋白的复溶率较其他3种沉淀方法相对稳定,为饮料中酪蛋白的亚型鉴别及相应含量测定提供了回收率较高的前处理方法,为今后测定酪蛋白含量的液相质谱法的研究奠定了较好基础。     

国内外乳品真蛋白检测方法的进展

介绍了乳品真蛋白的定义,比较了国内外牛乳蛋白质检测的标准方法,简述了乳品真蛋白的快速检测方法,提出了我国国家标准需要改进的方向,即在样品处理前先用150g/L的三氯乙酸溶液使乳中的蛋白质沉淀,用滤纸分离,再用凯氏定氮法分别测定沉淀和滤液中的蛋白态氮含量和非蛋白态氮含量,计算蛋白质含量。如果改用pH4.6来沉淀酪蛋白,同样的方法还可以用于测定乳品中酪蛋白。     

酪蛋白沉淀检测方法及其在牛乳经济掺假鉴定中的应用

试验表明酪蛋白等电点沉淀检验方法的最适检测条件为:10%乙酸溶液,磁力搅拌,pH4.4～4.8,3000 r/min离心15 min,102℃直接干燥法。通过检测,生牛乳、银桥纯牛奶、市售便宜奶粉、乳清粉、食用明胶、三聚氰胺、大豆分离蛋白粉的酪蛋白质量分数(g/g蛋白质)分别为79.8%、78.7%、0、0、0、0和90.3%。结果表明,本检测方法能够很好的检测正常牛乳的酪蛋白含量,并能对市售便宜奶粉、乳清粉、食用明胶和三聚氰胺进行经济掺假鉴定,结合对产品豆腥味的感官评价和对假酪蛋白色泽偏暗的颜色测定的方法,可以对大豆分离蛋白粉进行掺假鉴定,验证了纯牛乳制品掺假检验的定量指标:酪蛋白质量分数(g/g蛋白质)≥73%。     

快速滴定奶中蛋白质

现行奶中蛋白质含量的测定,多用凯氏定氮法。该法手续繁琐,花费时间多。本文提出用十二烷基硫酸钠(SDS)溶液直接滴定经酸化稀释后的奶,该法简便、迅速,适于在基层推广。众所周知,当洗涤剂溶液慢慢加到蛋白质溶液中时.可溶性的蛋白在合适的pH条件下会突然全部沉淀出来,而洗涤剂加入量与蛋白质含量成正比。阴离子洗涤剂,如十二烷基硫酸钠(SDS)适于酸性条件;阳离子洗涤剂,如十六烷基吡啶盐酸盐和氯化十二烷基三甲胺适用于碱性条件。Putnan曾提供了许多说明这一性质的例子并报     

凯氏定氮法测定牛乳中酪蛋白含量

酪蛋白是牛乳中的特征性成分,其含量可作为牛乳掺假检验的定量指标。实验结果表明等电点法结合凯氏定氮法能够有效地检测牛乳中酪蛋白含量,测定结果准确,重复性好。实验验证了纯牛乳中酪蛋白含量为2.5%。     

应用改进的甲醛法测定食品中蛋白质

在用NaOH溶液中和的试样消化液中,加入中性HCHO溶液,以pH计指示滴定终点,进行酸碱滴定,测定食品中的蛋白质。所获结果与凯氏定氮法基本一致,且简化了测定手续。     

等电点法纯化太平洋鳕鱼皮胶原蛋白及其结构特性研究

为研究等电点法纯化鳕鱼皮胶原的可行性,通过测定溶解度和Zeta电位来确定鳕鱼皮胶原的等电点。将粗提胶原溶液的pH调至等电点,后经离心、复溶、透析、冻干等步骤得到了等电点纯化后的胶原干品。采用SDS-PAGE法检验产品的胶原纯度;采用红外光谱、X-射线衍射、紫外光谱法对胶原的结构性质进行了研究。最后对等电点沉淀的工艺进行了单因素实验。结果显示鳕鱼皮胶原的等电点为6.83,且在该等电点下纯化得到的产品纯度较高。光谱学结果显示胶原的三螺旋结构仍保持完整。单因素实验结果显示最优条件为:pH6.8、沉淀6 h、6 mg/mL的胶原浓度,此时回收率可达85%,纯度可达90%以上。至此,确定了等电点沉淀是一种纯化胶原蛋白的有效方法。     

油茶籽多糖中蛋白质的脱除工艺研究

本文研究了盐酸-乙醇等电点法脱除油茶籽多糖中蛋白质的方法,此法在盐酸-等电点法的基础上,添加一定量的乙醇溶液,使之更有利于蛋白质的沉淀脱除。通过单因素试验及正交试验,确定蛋白质脱除的最佳条件为:pH 3.4,乙醇添加量为13%,静止时间为3 d,可以使蛋白质脱除率达到92.68%,多糖保留率为61.78%。与传统的三氯乙酸法和Sevage法进行比较,此法更有效且更安全。     

牦牛奶中不同酪蛋白的提取及其功能特性研究

本研究以新鲜牦牛乳为原料,添加钙盐后利用其等电点分离提取牦牛奶中的不同酪蛋白,利用单因素实验筛选牦牛奶中α-、β-、κ-酪蛋白的提取分离参数;并利用电泳(SDS-PAGE)分析牦牛乳不同酪蛋白纯度。同时对牦牛乳中α-、β-、κ-酪蛋白的溶解性、乳化性、发泡性进行分析比较。结果表明:牦牛奶不同酪蛋白分离的最佳Ca~(2+)浓度为0.08 mol/L,最佳温度2℃,此时牦牛乳中α-、β-酪蛋白分离效果较好。牦牛乳不同酪蛋白在等电点(p I)附近时,α-、β-、κ-酪蛋白溶解性、乳化性、发泡能力最低,泡沫稳定性最好。等电点附近酪蛋白的溶解度最低,α-、β-酪蛋白pH值在2.1时溶解度最高(分别为60%、80%),而k-酪蛋白在pH值6.22时最高(43%);在40～80℃范围内,κ-酪蛋白溶解度受温度影响显著;当pH值为2.1时,α-、β-、κ-酪蛋白的乳化能力和发泡能力都最大,其乳化稳定性则是远离等电点后逐渐上升;本研究旨在为牦牛乳酪蛋白的利用和深加工提供思路,为云南特色乳制品的开发利用提供科学依据。     

采用蛋白质定量方法检测掺假牛乳比较研究

研究非蛋白质掺假牛乳样品中的乳蛋白质检测方法。样品用15%三氯乙酸溶液处理牛乳样品,沉淀分离乳蛋白质,通过凯氏定氮法和四种分光光度法对液态乳中添加尿素和三聚氰胺常见掺假物进行检测比较研究。结果表明,凯氏定氮法、双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测牛乳中掺入不同比例尿素溶液蛋白质含量,结果不受尿素溶液的影响,准确度高。对于牛乳中掺入三聚氰胺溶液,三氯乙酸结合凯氏定氮法检测相对误差较大,而三氯乙酸结合双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测结果不受三聚氰胺溶液影响,准确度高。考马斯亮蓝法测定牛乳中掺入尿素溶液和三聚氰胺溶液相对误差均很大。     

山羊β-酪蛋白的分离及其含量的测定

从呼和浩特市周边地区采集的新鲜山羊奶，通过离心脱脂，调节等电点沉淀蛋白，对所得沉淀物进行DEAE离子交换层析，分离出α-酪蛋白和β-酪蛋白，并且β-酪蛋白被完全纯化出来。建立ELIsA双夹心方法对β-酪蛋白的含量进行测定，该法可直接用于培养液中β-酪蛋白的定量分析。     

羊乳酪蛋白的乳化性质和热稳定性研究

试验采用等电点沉淀法和高速离心法提取崂山奶山羊原料乳的酪蛋白,并对其等电点、SDS-PAGE图谱、乳化活力、乳化稳定性、浊度和热稳定性进行分析。结果表明:崂山奶山羊乳酪蛋白的等电点pH为4.10,分子量为20~40 kDa,包括α-酪蛋白、β-酪蛋白和κ-酪蛋,且β-酪蛋白含量最多。两种提取方法所得酪蛋白溶液的乳化性质和浊度具有极显著性差异(p0.01);酪蛋白的热稳定性随温度的升高而降低。相比于高速离心法,等电点沉淀法制备的酪蛋白电泳图谱条带清晰、纯度较高、热稳定性较好,且酪蛋白溶液的乳化性均一性好。     

壳聚糖法分离纯化酪蛋白糖巨肽

探索壳聚糖法分离乳清粉中酪蛋白糖巨肽的工艺条件,通过单因素试验考察混合液pH值、壳聚糖添加量、吸附时间、氯化钠浓度和pH值对酪蛋白糖巨肽分离效果的影响。结果表明最佳分离工艺条件为:在混合液pH4.6时,采用质量浓度2g/L的壳聚糖吸附60min,再用2mol/L、pH9的氯化钠溶液进行洗脱。洗脱液经过超滤除盐、浓缩和冷冻干燥后可获得酪蛋白糖巨肽干粉。采用上述工艺进行放大实验,酪蛋白糖巨肽和唾液酸的回收率分别为83.3%和70.64%,每克酪蛋白糖巨肽含有10mg唾液酸。电泳检测结果显示制备的酪蛋白糖巨肽主要是分子质量约22ku和30ku的酪蛋白糖巨肽多聚体。     

果胶稳定剂在酸乳饮料中的作用机理及稳定性酸乳饮料制造法

以牛乳为基础所制成的酸性乳饮料,在牛乳酸化后,酪蛋的胶体离子聚合成为酸性酪蛋白颗粒。酸性乳饮料的 pH 值,大致为3.6～4.2,接近酪蛋白的等电点(4.6)。因此,由于酸性酪蛋白粒子的电荷非常弱,对电的反应力弱,一般都凝集后沉淀分离。为了使酸性酪蛋白粒子稳定地保持分散状态,通常要添加稳定剂。在果胶、海藻酸、丙二醇酯、纤维素乙二醇酸钠等具有羧基的水溶性胶体中,果胶是现在被广泛使用的稳定剂。     

底物亲和法分离纯化蕲蛇胃蛋白酶

利用酶(胃蛋白酶)与其底物(酪蛋白)的亲和性,从蕲蛇胃中提取得到一种胃蛋白酶.让底物和酶在pH 2.5的乳酸缓冲液中充分结合,然后调pH至4.0(底物的等电点)沉淀底物和酶的结合物,随后让沉淀物再溶解于乳酸缓冲液中,添加低浓度的SDS将底物和酶分离,最后用DEAE离子交换色谱柱进行纯化,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定,分离得到的胃蛋白酶为电泳纯,其分子量为33KD.酶的最适pH值小于3.0,最适温度为50℃.该结果证明胃蛋白酶能利用其与酪蛋白的亲合性及SDS沉淀作用有效地分离,这种胃蛋白酶能在食品生产的加热、强酸处理过程中应用.     

杀菌条件对果奶饮料保存期的影响

1．前言果汁酸奶饮料是一种调配型酸味蛋白质饮料，它不经过产酸微生物发酵，而是直接利用食用酸化剂和稳定剂配制而成，生产工艺简便，风味突出、酸甜可口、营养全面，颇受广大消费者的青睐，是近年来国内外新开发的一种营养饮料。调配后的果汁酸奶饮料其pH值一般为3.5～5．0，而饮料中主要蛋白质酪蛋白的等电点为4．6，当果汁酸奶饮料在pH值下降为4．5～4．6，接近酪蛋白等电点时，便发生凝聚沉淀现象。另外，对于酸性较高的蛋白饮料，在加热过程中，亦易发生凝聚沉淀现象。通常采用添加稳定剂的方法使其在调酸和杀菌过程中保持稳定而不…     

响应面法优化酪蛋白酸钙生产工艺

以食品级干酪素为原料,以制备的酪蛋白酸钙中钙含量为指标,采用单因素实验、中心组合(Box-Benhnken)试验设计与响应曲面分析法,研究了酪蛋白酸钙的生产工艺。在单因素实验的基础上采用3因素3水平的响应曲面分析法,以酪蛋白酸钙中钙含量为指标,考察溶液pH、溶液浓度与Ca(OH)2添加量对酪蛋白酸钙制备的影响,建立了酪蛋白酸钙制备中钙含量与各影响因子的回归方程,确定了最佳工艺条件。结果表明:最佳制备工艺为溶液pH值为7.16、料液浓度为5.97%、Ca(OH)2添加量为1.716%,在此条件下制备的酪蛋白酸钙中钙含量为1.639%,与预测值1.642%相差不显著。该工艺酪蛋白酸钙得率高,所得产品含钙量较高,产品具有较好的品质。     

氢氧化铝沉淀法提锂的研究

研究了氢氧化铝沉淀法提锂的沉淀条件.实验结果表明:不同的投料方式对锂的沉淀率影响显著,最佳的投料方式为铝盐溶液和氢氧化钠溶液同时加料;滴加过程的pH值维持在4.5时沉锂率最高;最佳的NaOH溶液滴加时间为12 min;最佳的Al/Li=2.67.     

比色法测定饲料粗蛋白含量的研究

试验采用比色法测定饲料中的粗蛋白质含量与传统的半微量凯氏定氮法进行了比较,并分析了比色法的最佳试验条件。结果发现,用比色法测定的样品的粗蛋白质含量和半微量凯氏定氮法所得的数据比较差异不显著(P>0.05),最佳的纳氏试剂添加量为1.5ml,最佳的显色时间为10min。试验证明用比色法代替传统的半微量凯氏定氮法测定饲料中的粗蛋白质含量是可行的。