戊糖乳杆菌素C50-6的纯化及特性研究

对分离自四川传统肉制品的戊糖乳杆菌C50-6产生的戊糖乳杆菌素进行了纯化,研究其理化性质和生物学活性,结果表明:发酵液经(NH4)2SO4盐析和Toyopearl SP-650M阳离子交换层析纯化后,细菌素的回收率为21.76%,纯化倍数为39.15倍;经Tricine-SDS-PAGE和电泳条带抑菌试验测得该乳杆菌素分子质量约2 500u;该细菌素对酸和热稳定,对木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K敏感;对供试的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和少数真菌具有较强抑制作用,对多数乳酸菌无抑制作用。     

戊糖乳杆菌LS1细菌素的分离纯化及性质鉴定

由酸菜水分离出的菌株LS1经16S rRNA鉴定为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)。其细菌素首先通过硫酸铵沉淀取上清液经Sephadex G-10柱色谱脱盐并纯化,然后SP Sepharose Fast Flow中度纯化,最后Superdex 30Increase精细纯化。纯化后比活力为1 238.1 AU/mg,是原始细菌素活性的110.5倍。根据液相色谱-串联质谱仪测定细菌素分子质量为1 123.8 Da,氨基酸序列为ACDFCFCGMK。戊糖乳杆菌素Pentocin LS1显示出对部分革兰氏阴性和阳性食品腐败菌的抑菌活性。此外,100℃加热15 min仍保留80.2%的抑菌活性,在pH 2.0～8.0范围内具有较强活性,对蛋白水解酶敏感,对淀粉酶、脂肪酶及过氧化氢酶不敏感,部分化学试剂也对其活性无明显影响。结果表明,戊糖乳杆菌素LS1在食品防腐方面具有潜在应用价值。     

唾液乳杆菌LH1F所产细菌素的纯化及其生物学特性研究

本文对唾液乳杆菌(Lactobacillus Salivarius)LH1F发酵液中的抑菌物质的特性进行了研究,在排除菌体细胞、有机酸、过氧化氢干扰及经胰蛋白酶、胃蛋白酶处理后,确定抑菌成分为肽类细菌素,然后经过60%硫酸按盐析及超滤初步纯化后,对其生物学特性进行了研究。结果表明,唾液乳杆菌LH1F所产的细菌素具有良好的热稳定性,121℃处理30 min仍保留75.5%的抑菌活性;在p H2.0~p H5.0条件下稳定;对胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K敏感;该细菌素具有较广的抑菌谱,对供试的多种革兰氏阳性菌(G+)及革兰氏阴性菌(G-)具有明显的抑制作用,为作为天然食品防腐剂的进一步研究奠定基础。     

戊糖乳杆菌细菌素的抑菌特性研究

乳酸菌产生的细菌素具有防腐抑菌的作用,越来越受到人们的重视。但乳酸菌产生的细菌素多只对近缘乳酸菌菌株有抑制作用,研究旨在研究一株戊糖乳杆菌产生的细菌素对食品中常见的腐败菌的抑制作用。利用滤纸片法以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、青霉作为指示菌进行抑菌研究,探讨了p H、Na Cl浓度、发酵时间和热处理对细菌素抑菌效果的影响。得出发酵培养基初始p H为3,不添加Na Cl,发酵36 h时戊糖乳杆菌产生的细菌素抑菌效果最好,为戊糖乳杆菌细菌素的应用提供科学依据。     

面包乳杆菌(Lactobacillus panis)C-M_2细菌素的分离纯化及特性分析

本实验对面包乳杆菌C-M2所产的新型细菌素进行分离纯化和特性研究。通过乙酸乙酯萃取、阳离子交换层析和半制备液相三步分离纯化该细菌素。最终细菌素的比活力达到5 044.96 AU/mg,纯化倍数为79.8倍,但回收率仅为0.35%。通过液相色谱-串联质谱法分析,该细菌素的分子质量为863.52 D,氨基酸序列为MVKKTSAV,它是一种新型的Ⅱ类细菌素。该细菌素具有广泛的抑菌谱,可以抑制革兰氏阳性和阴性的食品腐败菌。该细菌素对热和p H值稳定,即使在121℃灭菌15 min,仍保留82.1%的抑菌活性,在p H 6条件下保留85.6%的抑菌活性。它能被多种蛋白酶失活,不能被脂肪酶和淀粉酶失活,这些结果表明该细菌素具有作为食品生物防腐剂的潜在应用价值。     

一株产广谱细菌素乳酸菌的筛选与鉴定

为获得产广谱细菌素的乳酸菌,采用经典的乳酸菌筛选法及16S rRNA基因序列测定法,从传统酸白菜中分离乳酸菌并进行菌种鉴定,从蛋白酶稳定性、热稳定性、pH值稳定性和抑菌谱4个方面分析抑菌物质的生物学特性。结果表明,从传统酸白菜中分离出1株产抑菌活性物质的乳酸菌SY5,经鉴定为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)。将发酵上清用蛋白酶K和胃蛋白酶处理后抑菌活性丧失,表明抑菌活性物质具有蛋白质性质,确定为细菌素。生物学特性分析表明,该细菌素在120℃热处理30 min后仍保留82.7%的抑菌活性,pH值范围为2～7。抑菌谱测定结果表明,该细菌素对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均有较好的抑制效果,具有广谱抑菌活性。     

酸菜中具有抑菌活性乳酸菌的分离鉴定及其产细菌素特性

目前已有研究陆续从不同的乳酸菌中分离到细菌素,但是这些细菌素存在着抑菌谱窄的问题,寻找广谱抗菌性能的新一代细菌素具有重要的理论价值和应用前景。以市售保质期较长的8种不同品牌的酸菜为材料,将青霉菌作为指示菌,通过抑菌实验筛选出一株能产生抑菌物质的菌株L3,经过生理生化鉴定、16S rDNA测序分析确定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),故命名为植物乳杆菌L₃,NCBI序列号为MT781360。该菌株在MRS培养基中于37℃培养18～24 h时产细菌素L3的抑菌活性最强。将该培养上清液采用乙酸乙酯萃取,葡聚糖凝胶柱Sephadex G-50过滤分离纯化,再经Trinice-SDS-PAGE电泳结果显示,细菌素L3的分子质量约为4～5 kDa。细菌素L3对蛋白酶敏感,但其活性不受过氧化氢酶的影响,初步结果显示细菌素L3为蛋白质类物质。细菌素L3在60～100℃处理20 min或121℃处理15 min仍具有较高的抑菌活性,pH值2～10范围内有良好的稳定性;对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌以及部分真菌具有抑菌活性。植物乳杆菌L_3<...     

一株乳酸乳球菌所产细菌素的生物学特性

对乳酸乳球菌KLDS4.0326所产类细菌素进行分离纯化,并对细菌素的部分生物学特性进行研究。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后,菌株的无细胞发酵上清液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌等革兰氏阳性细菌以及大肠杆菌、沙门氏菌等革兰氏阴性细菌具有显著的抑制作用;经胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和蛋白酶K处理后,抑菌活性降低,表明抑菌成分为蛋白类物质;该细菌素具有良好的热稳定性,在酸性条件下抑菌活性稳定,并且具有较广的抑菌谱,能够抑制多种革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌。     

西藏干酪源植物乳杆菌产细菌素的分离纯化及特性研究

从西藏干酪中分离筛选出1株能够产生抑菌活性物质的乳酸菌,该菌的发酵上清液在排除有机酸、过氧化氢的影响后仍有显著抑菌活性,然而,用胃蛋白酶、蛋白酶K和胰蛋白酶处理后抑菌活性丧失,说明该菌的代谢产物中起抑菌作用的物质具有蛋白质性质,初步确定是一种细菌素。结合形态学观察、生理生化分析及16S rDNA鉴定结果,确定该菌为植物乳杆菌,命名为ZFM804。细菌素经大孔树脂(XAD-16)层析、强阳离子交换层析、RP-HPLC三步法初步纯化。经SDS-PAGE分析该细菌素分子质量约为15 ku。理化性质分析表明该细菌素具有良好的酸碱稳定性:在pH 3~11范围内都具有抑菌活性;良好的热稳定性:100 ℃处理30 min仍有明显抑菌活性,同时可被人体内蛋白酶降解。抑菌谱测定结果表明,ZFM804植物乳杆菌素对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有抑制作用,是一种广谱细菌素。     

长寿老人源双歧杆菌BL-8产细菌素的提纯及其分子特性

目的:建立长寿老人源青春双歧杆菌BL-8产细菌素的提取纯化程序并分析其分子特性,为评价其在食品工业中的应用前景提供科学依据。方法:通过3步纯化程序:硫酸铵盐沉淀、凝胶过滤层析和阳离子交换柱层析提纯细菌素,基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)确定细菌素的纯度和分子质量,并测定其抑菌谱、抑菌作用方式、最小杀菌浓度及最低抑菌浓度。结果:经3步纯化程序后,每100 m L发酵液最终获得2 m L比活力高达1 847.31 AU/mg的细菌素纯品,纯度提高了35.43倍,回收率达15.1%;质谱结果确定纯化所得细菌素分子质量为829.23 u;抑菌活性结果显示该细菌素的抑菌范围较宽,对李斯特菌、葡萄球菌、芽孢杆菌等革兰氏阳性菌和大肠杆菌等革兰氏阴性菌都表现出较强的抑制作用,而对受试真菌未表现抑菌活性。细菌素对单核细胞增生李斯特菌35152(4b)的作用方式是杀菌,其最低抑菌质量浓度为0.05 mg/m L,最小杀菌质量浓度为0.20 mg/m L。结论:从青春双歧杆菌BL-8所产细菌素的分子质量及抑菌谱测定结果推测其是一种新型广谱细菌素,具有天然食品防腐剂的应用潜力。     

pH吸附法纯化戊糖乳杆菌素31-1的研究

戊糖乳杆菌素31-1,由分离自宣威火腿的戊糖乳杆菌31-1产生,随pH的改变可以选择性的吸附于产生菌细胞表面,pH5.0时吸附率达75%,而在pH3.0以下,7.0以上吸附率为0。基于以上规律,通过调整pH值,戊糖乳杆菌素31-1在pH5.0吸附、pH7.0释放于产生菌细胞,达到了较好的分离纯化效果,戊糖乳杆菌素31-1回收率为45%,纯化倍数为33。经Tricine-SDS-PAGE进行分子量的估测及纯度鉴定,证实戊糖乳杆菌素31-1的分子量在6400～14000D之间。该纯化方法简便、高效,具有工业生产的潜力。     

具有广谱抑菌活性乳酸菌的筛选及抑菌物质分析

采用双层平板法从食用小米中分离出一株对实验所测的革兰氏阳性菌、阴性菌和霉菌有明显抑制作用的菌株,通过生理生化特性和16S rRNA基因序列同源性分析,确定该菌株为戊糖乳杆菌(Lactobacillus pentosus)。经气相色谱-质谱联用仪和高效液相色谱初步分析该菌株发酵上清液中含有乳酸、乙酸、琥珀酸、柠檬酸、棕榈酸、油酸、硬脂酸和亚油酸等多种抑菌成分。     

Optimum production, stability, partial purification and inhibitory spectrum of antimicrobial compounds produced by Pediococcus pentosaceus DI

The optimum conditions for production of antimicrobial compounds by Pediococcus pentosaceus DI were studied. The antimicrobial compounds in cell free fermented medium were extracted (methanol-acetone), then tested for inhibitory activity against fourteen bacterial strains and its stability to heating, various pH and proteolytic enzymes. In addition, methanol-acetone extract was partial purified through Sephadex G-100 column and thin-layer chromatography. Production of antimicrobial compounds were maximized when P. pentosaceus DI was grown in lactobacilli MRS containing 0.05% L-cysteine-HCl medium at 30 degrees C for 48 h. The methanol-acetone extract showed relatively broad antimicrobial spectrum including lactic acid bacteria and some spoilage and pathogenic bacteria. Antimicrobial activity of methanol-acetone extract was retained after heating (100 degrees C for 30 min) at pH 2.5 to 6.0 but was lost after treating with several proteolytic enzymes at pH 6.5 and 7.0. Sephadex G-100 column revealed three peaks in methanol-acetone extract. The major peak was eluted at 40 ml and including three fractions, which exhibited inhibitory activity, while the other peaks were principally free from any antimicrobial compounds. Thin-layer chromatography of crude methanol-acetone extract and the three fractions, which exhibited inhibitory activity, showed that there was one main spot with Rf at 0.8.     

梅奇酵母氨基甲酸乙酯酶分离纯化与酶学性质分析及其对葡萄酒香气的影响

为了研究梅奇酵母所产生氨基甲酸乙酯（Ethyl Carbamate,EC）酶的性质,通过硫酸铵盐析、离子交换层析的方法对EC酶进行分离纯化,并对纯化后EC酶的酶学性质进行了分析。结果表明,纯化后EC酶对比纯化前的酶活提高了约1.2倍。纯化后EC酶最适反应温度为35 ℃,在25~45 ℃之间热稳定性较强;最适pH为5.5,在pH5~6时该酶稳定性强,即酸稳定性强,碱稳定性较差。当乙醇体积分数为12%~14%时,EC酶具有一定酶活。底物特异性结果表明,该EC酶对EC及其前体物质（尿素）具有较高的降解能力,且对于成品葡萄酒挥发性香气成分影响不显著。     

白酒发酵副产物黄水抑菌特性及稳定性研究

以食品中几种常见的腐败菌和致病菌,包括金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、根霉、青霉、毛霉、曲霉为供试菌,研究白酒发酵副产物黄水的抑菌效果及其稳定性。采用牛津杯法测定抑菌活性;采用二倍稀释法测定黄水对菌种的最低抑菌浓度;以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为指示菌,研究pH值、温度、紫外线、盐、蔗糖含量和金属离子种类对黄水抑菌稳定性的影响。结果表明:黄水对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌4种细菌以及青霉、曲霉2种真菌具有很好的抑菌活性,而对毛霉和根霉抑菌效果不明显。以体积分数计,黄水对4种细菌的最低抑菌浓度均为6.25%,对青霉和曲霉两种真菌的最低抑菌浓度分别为1.56%和3.13%。黄水呈酸性时抑菌活性增强,呈碱性时抑菌活性稍有下降,但活性仍较高;经高温处理后,抑菌活性稍有下降;紫外线对其抑菌活性几乎无影响;随着糖含量和盐含量的增加,抑菌活性稍有增强;金属离子对其抑菌稳定性几乎无影响,而且Fe~(2+)还有增强其抑菌活性的作用。     

雪地茶甲醇提取物体外抑菌活性及其稳定性研究

为初步探究雪地茶体外抑菌活性及其稳定性,采用平板打孔法测定雪地茶甲醇提取物对常见致病菌的体外抑菌活性,以金黄色葡萄球菌作为指示菌,测定不同温度、pH、紫外照射时间等因素对抑菌稳定性的影响,使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分级萃取甲醇提取物,确定其抑菌活性物质的极性,并测定其松萝酸含量。结果表明雪地茶甲醇提取物对革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、斯氏李斯特菌、表面葡萄球菌、伊氏李斯特氏菌,革兰氏阴性菌如甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌以及致病真菌白色念珠菌等具有良好的抑菌效果。其中,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为0.625、10 mg/mL;抑菌稳定性实验结果表明,温度对雪地茶甲醇提取物的抑菌活性无显著影响（P>0.05）,100 ℃处理30 min后仍具有较高的抑菌活性;紫外光照射40 min及50 min的处理组抑菌活性显著下降（P<0.05）,但抑菌率仍保持在90%以上;pH对雪地茶甲醇提取物的抑菌稳定性影响最大,当pH接近生理中性时（pH=6.0）,其抑菌活性与对照组（pH=4.83）无显著差异（P>0.05）,表现出较高抑菌活性,当pH较高（8.0、10.0）或较低（2.0、4.0）时,处理组的抑菌活性极显著下降（P<0.05）,且随着pH的升高或降低而降低;雪地茶甲醇提取物中松萝酸含量为0.8613%,乙酸乙酯萃取物中松萝酸含量为0.9379%。本实验结果证实雪地茶甲醇提取物具有一定的广谱抑菌效果且作用浓度较低,稳定性较好,可用于天然食品防腐剂和植源性抑菌药物的开发利用。     

响应面法优化大蓟根总黄酮纯化工艺及其纯化前、后的抑菌活性比较

在单因素实验的基础上,利用响应面试验优化大孔树脂纯化大蓟根黄酮提取物工艺,并比较纯化前、后的抑菌活性。通过静态吸附-洗脱实验,考察不同类型大孔树脂对大蓟根黄酮化合物的吸附与解吸性能,选择最佳吸附树脂型号后,采用动态吸附-洗脱实验确定最佳纯化工艺条件,另通过“滤纸片法”考察纯化前、后的黄酮化合物对大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌活性。结果表明,大蓟根黄酮提取物的最佳纯化工艺条件为:质量浓度为2.96 mg/mL、pH4.97的黄酮提取液70 mL,以1.0 mL/min流速上样至D101型树脂后,经180 mL体积分数70.2%乙醇溶液,以1.0 mL/min流速洗脱,在该条件下总黄酮的回收率为69.8%,纯度为67.4%。体外抑菌试验结果表明,与提取物相比,纯化后的黄酮化合物对三种受试菌的抑制圈直径均有显著性增大（P<0.05）,抑菌活性更好。     

纳他霉素水溶液生物稳定性研究

为更好地在食品中应用纳他霉素,研究温度、光照、pH 值和无机盐对纳他霉素水溶液生物稳定性的影响。结果表明：在不超过100℃时,纳他霉素水溶液具有较强的生物稳定性,但经121℃处理,生物稳定性显著降低,在121℃条件下热处理15min 后,抑菌活性残留率为62.15%,处理30min 后完全失活。纳他霉素水溶液对紫外照射非常敏感,90min 后完全失活;对日光灯照射比较敏感,10d 后完全失活。在pH4～8 之间,纳他霉素水溶液比较稳定。NaCl、MgSO4 和CuSO4 对纳他霉素水溶液的生物稳定性影响不显著(P ＞ 0.05),而FeCl3 和MnSO4对其生物稳定性影响显著(P ＜ 0.05)。     

Purification,characterization, antibacterial activity and N-terminal sequencing of buffalo-milk lysozyme

Lysozyme from buffalo milk was purified to homogeneity and its N-terminal amino acid sequence, biochemical properties and antibacterial spectrum were determined. The purification procedure, comprising ion-exchange chromatography using CM-cellulose and size-exclusion chromatography using Sephadex G-50, conferred 8622-fold purification and 39.3% recovery of lysozyme. The purified enzyme migrated as a single band on sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and native PAGE. Immunological purity of lysozyme preparation was confirmed by immuno-electrophoresis. Molecular weight of buffalo-milk lysozyme as determined by SDS-PAGE was 16 kDa and its amino acid composition was determined by reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC). The sequence of 23 amino acid residues at the N-terminal end showed 56.5% homology with bovine milk lysozyme and 30.4% with equine milk lysozyme. The specific activity of buffalo milk lysozyme was ten-times that of bovine milk lysozyme. Buffalo-milk lysozyme was active over a wide range of pH and its activity was strongly influenced by molarity of the medium. Antibacterial activity of buffalo-milk lysozyme was determined against 11 species of bacteria; out of seven Gram-positive bacteria tested, four were inhibited, while Gram-negative bacteria were resistant.     

BIOCHEMICAL AND ANTIBACTERIAL PROPERTIES OF LYSOZYME PURIFIED FROM THE VISCERA OF SCALLOPS (PATINOPECTEN YESSOENSIS)

A lysozyme was purified from the viscera of scallops by ion exchange, gel permeation and affinity chromatographies. The yield of the purified lysozyme was 1.52%, and its purification ratio was 411.9 folds. The molecular weight of the scallop lysozyme was about 14.5 kDa by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. The optimal temperature for lysozyme activity was 20C, but the optimal stability temperature was between 20 and 30C.
The optimal pH for lysozyme activity was 5.0, but the optimal stability pH was between 5.0 and 6.0. Scallop lysozyme had antibacterial activities against both gram-positive and gram-negative bacteria in which gram-negative bacteria, Escherichia coli and Vibrio vulnificus, were inhibited more effectively than gram-positive bacteria. Egg white lysozyme inhibited gram-positive bacteria better than the scallop lysozyme, whereas the reverse was true for gram-negative bacteria. The N-terminal sequence of the scallop lysozyme consisted of 10 amino acids: proline, cysteine, valine, tyrosine, alanine, phenylalanine, methionine, asparagine, glutamic acid and aspartic acid.

PRACTICAL APPLICATIONS

Egg white lysozyme (EWL) has been used as a preservative or antibacterial agent in the pharmaceutical and food industry, but is limited to broaden its application because of poor antibacterial activity against gram-negative bacteria. Scallop viscera lysozyme has two times higher antibacterial activity against gram-negative bacteria ( Escherichia coli and Vibrio vulnificus ) than EWL. Therefore, scallop viscera lysozyme shows a promise as a bacteriostatic or prophylactic agent in food preservation and specialty product.