黄曲霉毒素B1降解酶的分离纯化及其酶学特性

施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）F4能产生黄曲霉毒素B1的降解酶（aflatoxin B1-degrading enzyme,ADE）,本实验通过3 步法提取纯化ADE,即包括硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析和SephadexG-100凝胶过滤层析。结果表明,通过以上纯化方法,ADE的回收率为56%,纯化的ADE比活力为6.4×104 U/mg,纯化了123 倍。利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得ADE分子质量约为24 kD;ADE与AFB1反应的最适温度和pH值分别为30 ℃和6.0;Cu2+对ADE酶活性有抑制作用;利用双倒数作图法测得ADE表观Km值为5.61×10-5 mol/L。     

铜绿假单胞菌M19降解黄曲霉毒素B1的产物研究

以实验室筛选保藏的黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)降解菌M19产生的降解酶PADE为对象,对其AFB1降解液进行薄层色谱及荧光光谱分析(LC-MS),分析降解产物可能的结构变化,并利用液相质谱检测AFB1降解产物。薄层色谱检测结果:有机相和水相降解液均未检测到新的荧光吸收物质,表明降解产物没有荧光吸收;荧光光谱检测结果:AFB1降解产物的荧光明显减弱;液相质谱检测结果:发现质荷比为227.18的物质P。结果推断:AFB1降解过程中内酯键断裂,产生一个分子量为226的降解产物P,利用Xcalibur软件分析其分子式为C14H10O3,并根据AFB1降解后的LC-MS图谱分析以及AFB1降解产物的相关文献对降解途径进行假设。     

解淀粉芽孢杆菌黄曲霉毒素B_1裂解酶的分离纯化及鉴定

解淀粉芽孢杆菌CGMCC-9021能够高效降解黄曲霉毒素B_1(Aflatoxin B_1,AFB_1),确定其降解AFB_1的活性蛋白及其机理是今后工业化生产应用的重要基础。通过硫酸铵分级沉淀、DEAE FF阴离子交换层析和Superdux 75凝胶过滤层析对解淀粉芽孢杆菌CGMCC-9021发酵液中降解AFB_1的活性物质进行分离纯化,通过Tricine-SDS-PAGE和质谱鉴定初步分析该活性蛋白为裂解酶(分子质量约27 ku)。同时,采用荧光色谱技术初步分析了裂解酶对AFB_1的降解机理可能是破坏AFB_1的内酯环结构。     

施氏假单胞菌Pseudomonas stutzeri产卡拉胶酶液体发酵条件优化

以从红树林底泥中分离筛选的施氏假单胞（Pseudomonas stutzeri）为对象，采用单因素和正交实验方法，通过摇瓶发酵方式对其产卡拉胶酶发酵条件进行了研究。得到最佳培养基配方和培养条件分别如下：卡拉胶0．3‰，酵母浸粉0．1‰，NaNO30．3‰，乳糖0．04％，吐温-800．2‰；起始pH值6．0，温度32℃，装样量90mL／250mL，接种量13％，摇床转速160r／min。在最佳条件下，发酵液的酶活力为26．5U／mL，比优化前的活力提高了80％。     

黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选及鉴定研究

黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)污染花生、玉米等农产品和食品,具有极强的毒性和致癌性。采用香豆素为唯一碳源从海水中分离降解AFB_1菌株,其中菌株M8能降解71.8%的AFB_1。通过上清液、菌悬液、胞内液降解AFB_1分析,初步判断菌株M8分泌至胞外的活性物质主导AFB_1的生物降解作用。通过菌株形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因系统发育学分析,鉴定菌株M8属于假单胞菌属,命名为Pseudomonas sp. M8。从海水中分离菌株M8丰富了降解AFB_1降解微生物资源,为研究其作用机理和应用于黄曲霉毒素的脱毒奠定了基础。     

降解黄曲霉毒素B1酶的提取及降解作用研究

目的:从能够降解黄曲霉毒素B1的嗜麦芽窄食单胞菌中提取主要降解成分,并对其降解作用进行研究.方法:采用硫酸铵沉淀法对发酵液进行酶的提取,并对酶的提取条件进行优化实验.结果:确定种子培养基培养12h,发酵24h后,采用65%硫酸铵沉淀后的酶活性最大,对黄曲霉毒素B1的降解率达到80.25%.结论:降解黄曲霉毒素B1的菌株于40℃下种子培养12h,发酵24h,经过65%硫酸铵沉淀得到粗酶提取液,其蛋白含量为532.9μg/mL,与黄曲霉毒素B1反应72h后酶活最大,对毒素的降解率可达到81.23%,并且经过全波长扫描得到此酶在240～267nm有最大吸收峰.     

重组漆酶降解黄曲霉毒素B1分子对接分析及产物结构解析

以重组漆酶lac3基因同源性最高的3KW7作为模板进行同源模建,采用分子对接预测漆酶与黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1,AFB1）的结合模式,结果显示漆酶与AFB1可以相互作用,氢键是其关键作用力,漆酶可用于黄曲霉毒素的降解。随后,通过实际的降解实验进行验证,响应面优化获得AFB1降解率最优的条件为底物AFB1 1 μg、孵育时间15 h、孵育温度34 ℃、酶活力2 U,降解率可达91.08%。在此条件下利用超高效液相色谱-飞行时间串联质谱分析AFB1降解产物结构,发现4 个主要降解产物,根据其二级质谱信息和精确分子质量,推测出降解产物的分子式分别为C16H22O4、C14H16N2O2、C7H12N6O和C24H30O6。     

复合菌系降解黄曲霉毒素B_1的效果及组成多样性研究

采用"外淘汰法"筛选了一组对黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)具有高效降解能力的复合菌系FBAD-2,该复合菌系在120 h内能将质量浓度为2 000μg/L的AFB_1完全降解,对质量浓度为5 000μg/L的AFB_1能降解90%。FBAD-2在30~70℃的范围内均能保持对AFB_1的高效降解能力,其最适温度为60℃。毒素降解实验分析表明,FBAD-2对AFB_1的降解主要是胞外酶的作用,其最适产酶时间为24 h,此时的胞外粗酶液在48 h内能将5 000μg/L的AFB_1完全降解。16S rDNA基因组测序分析结果表明,FBAD-2的微生物组成主要包括土芽孢杆菌(Geobacillus)、嗜热小杆菌(Symbiobacterium thermopilum)、梭菌(Clostridium)和热厌氧杆菌(Tepidanaerobacter)等。     

降解黄曲霉毒素B1酶的提取及降解作用研究

目的:从能够降解黄曲霉毒素B1的嗜麦芽窄食单胞菌中提取主要降解成分,并对其降解作用进行研究。方法:采用硫酸铵沉淀法对发酵液进行酶的提取,并对酶的提取条件进行优化实验。结果:确定种子培养基培养12h,发酵24h后,采用65%硫酸铵沉淀后的酶活性最大,对黄曲霉毒素B1的降解率达到80.25%。结论:降解黄曲霉毒素B1的菌株于40℃下种子培养12h,发酵24h,经过65%硫酸铵沉淀得到粗酶提取液,其蛋白含量为532.9μg/mL,与黄曲霉毒素B1反应72h后酶活最大,对毒素的降解率可达到81.23%,并且经过全波长扫描得到此酶在240～267nm有最大吸收峰。      

酶联免疫法测定不同食用植物油中黄曲霉毒素B_1

用酶联免疫法(ELISA)测定食用植物油中黄曲霉毒素B1,并对如何防控食用油中黄曲霉毒素B1进行探讨。在所分析菜籽油、大豆油、花生油、核桃油4种油中,以菜籽油黄曲霉毒素B1含量最低,其次是大豆油和核桃油,花生油含量最高。方法检测灵敏度为0.1μg/kg,平均回收率为91.4%～93.5%,相对标准偏差小于5%;结果表明,酶联免疫法测定准确,稳定性和重现性好,可广泛用于食用植物油黄曲霉毒素B1检测。     

黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选及鉴定

该研究以香豆素为唯一碳源,从豆类发酵食品、土壤、动物肠道及其内容物中筛选黄曲霉毒素B1（AFB1）降解菌株;然后通过复筛,从中筛选出AFB1降解能力较好的菌株,并对其降解作用与吸附作用进行区分;最后,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定。结果表明,共筛选得到9株AFB1降解菌株,其中菌株YC2的AFB1降解能力最强,AFB1降解率达到90.7%,并确定菌株YC2通过降解作用去除AFB1。最后,菌株YC2被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。     

黄曲霉毒素B_1降解菌株的筛选鉴定

黄曲霉毒素B_1(AFB_1)具有极强的毒性和致癌性,严重危害人和动物健康。通过富集培养、初筛和复筛从土壤中筛选到能降解黄曲霉毒素的菌株,鉴定降解效率最高菌株并研究其降解特征。结果表明,筛选出多株能降解AFB_1菌株,其中菌株A12降解效率最高,通过形态学、生理生化特征及16S rRNA基因系统进化分析鉴定菌株A12为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis subsp. InaquosorumA12。研究发现枯草芽孢杆菌A12上清液、菌悬液、胞内液能分别降解87.6%、17.3%和10.8%的AFB_1,表明菌株A12分泌至胞外活性物质主导生物降解作用。菌株A12上清液降解AFB_1的最适反应温度为37℃,最适p H为7.0。将该菌接种到AFB_1污染的花生样品,能显著降低AFB_1的含量。为枯草芽孢杆菌A12应用于AFB_1的生物脱毒奠定了基础。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及降解酶挖掘

目的 筛选、鉴定一株高效降解黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1, AFB1)菌株,并对其降解特性和降解酶基因进行分析。方法 通过形态学观察、生理生化鉴定及同源性分析,对具有高效降解AFB1能力的菌株进行鉴定。通过菌株发酵液、上清液、细胞悬液、胞内提取物对AFB1降解能力的不同确定降解活性部位,使用冷冻干燥方法探索其粗酶制剂对AFB1降解效果。结合全基因组分析进行降解酶基因的挖掘。结果 通过鉴定,菌株HNGD-B3为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),菌株上清液对AFB1降解效果最好,72 h降解率为88.24%±2.02%。上清液蛋白酶K处理后,对AFB1降解效果大幅下降,热处理后上清液降解效果基本无变化,判断其降解活性成分为胞外酶。粗酶制剂可显著提高AFB1降解效率,结合全基因组分析与Blastp比对筛选得到3条具有AFB1降解潜力的候选基因序列。结论 菌株HNGD-B3对AFB1具有良好降解效果,在生物降解真菌毒素具有较大潜力。     

低温射频等离子体降解农产品中黄曲霉毒素B1效果的研究

研究采用低温射频等离子体技术处理农产品中的黄曲霉毒素B_1(AFB_1),并通过HPLC分析其中黄曲霉毒素的降解率。结果表明,等离子体降解农产品中AFB_1效果显著,150 W等离子处理500 s,花生中AFB_1的降解率达到88.3%,玉米中AFB_1的降解率达到92.2%。等离子体功率越大,处理时间越长,AFB_1的降解率越大。在相同降解条件下,不同细度样品中AFB_1降解率有显著差异。花生、玉米粗粉试样中AFB_1的降解率低于花生、玉米细粉试样。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及发酵条件优化

该研究采用香豆素筛选模型,从酒醅、大曲、榨菜、酸豆角等样品中分离筛选降解黄曲霉素B1（AFB1）菌株,通过形态学观察及分子生物学技术对筛选菌株进行鉴定,并以黄曲霉毒素B1降解率为评价指标,采用单因素及正交试验对筛选菌株的发酵条件进行优化。结果表明,共初筛出23株可利用香豆素菌株;采用高效液相色谱（HPLC）法复筛出1株AFB1高效降解菌,其降解率最高,为86.22%,菌株编号为HB022。菌株HB022被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）,其最优发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH 7.2、接种量5%、发酵时间72 h。在此优化条件下,AFB1的降解率为91.13%。     

2011~2015年花生和小麦制品中黄曲霉毒素B1的检测

目的 对2011~2015年花生和小麦制品中黄曲霉毒素B1进行检测分析和安全评价。方法 采用酶联免疫法对2011~2015年的1140个花生类和6475个小麦类制品的黄曲霉毒素B1的含量进行检测。结果 2011~2015年检测的花生类制品合格率分别为95.5%、98%、97.4%、98.3%和98.7%; 检测的各种小麦类制品合格率均为100%。结论 花生类制品合格率逐年上升, 但仍存在一定的质量隐患; 小麦类制品质量均符合国家规定限量。     

高效液相色谱法测定粮谷中黄曲霉毒素B1的研究

建立了用三氯甲烷提取、硅胶小柱净化、三氟乙酸衍生,再以荧光检测器来测定粮谷中黄曲霉毒素B1的高效液相色谱方法.试验证明,该方法安全限量标准最低可达0.4 μg/kg,线性在2～50 μg/kg良好,平均回收率较高,具有准确度高、精密度好、安全限量低的特点.