一株好氧反硝化菌的反硝化性能研究

选用四因素三水平L9（3^4）正交试验表设计实验,研究碳源、CODcr／N、溶解氧以及pH值对菌株tsuruhatensis戴尔福特菌好氧反硝化性能的影响,并对该菌株利用发酵罐进行扩大培养．实验结果表明。此菌株为一株高效的好氧反硝化菌．     

一株戴尔福特菌的异养硝化与好氧反硝化性能研究

通过在好氧反硝化培养基中添加氨氮和在异养硝化培养基中添加硝基氮,研究了从实验室SBR反应器中新分离的一株戴尔福特菌的异养硝化作用与好氧反硝化作用的相互影响．研究表明：加入氨氮后,24h后的硝基氮去除率最大可提高1．47％,48h后菌体生长较为旺盛,氨氮去除率则均在90％以上;同时发现加入硝基氮后,菌体生长推迟,但氨氮去除率最大可提高4．16％．异养硝化与好氧反硝化作用之间是相互促进的．此株戴尔福特菌可在同一条件下自身实现同步硝化反硝化．具有一定的工程应用价值．     

一株反硝化聚磷菌的筛选鉴定及特性研究

采用SBR反应器,通过间歇曝气方式对底泥体系中反硝化聚磷菌进行了筛选和富集.从底泥中分离出1株反硝化聚磷细菌SYJl,经过生理生化鉴定和16SrDNA测序,建立了系统发育树,鉴定出细菌SYJl属于Acinetobacter sp.菌株SYJl在好氧条件下培养48 h后,TP最终去除率为68.63%,在厌氧条件下培养48h后,NO2-N及NO3-N的去除率分别为94.56%和100%.     

产高温碱性蛋白酶菌株筛选及酶学性质研究

从高温堆肥土样中筛选到一株高产蛋白酶的菌株,经鉴定为Bacillus subtilis,命名为I15.对最适产酶发酵条件进行了优化,并研究了发酵产蛋白酶的酶学性质.结果表明,玉米淀粉和豆饼粉是该菌发酵产蛋白酶的最适经济碳氮源;该蛋白酶属高温碱性蛋白酶,具有很强的热稳定性和酸碱稳定性.另外,突出的性质是该蛋白酶对表面活性剂和温和型去垢剂具有超强的耐受性,将具有广阔的市场前景.     

豆壳过氧化物酶的酶学性质研究

豆壳过氧化物酶(Soybean Hull Peroxidase,SHP)是从大豆豆壳分离得到的一类重要的氧化还原酶,试验通过缓冲溶液抽提法提纯豆壳过氧化物酶,采用愈创木酚法测定酶活力。结果表明,豆壳过氧化物酶是一种耐高温、耐酸碱的酶,其酶作用的最适温度为35℃,最适pH值为5.2,对愈创木酚和过氧化氢的表观Km值分别为1.53 mmol/L和0.36 mmol/L。常见化合物对豆壳过氧化物酶活性的影响也不尽相同,Fe3+对酶的抑制作用明显,而Mg2+对酶反应有一定的激活作用。     

一株大霉菌株的改良和产酶条件及酶学性质研究

将自然界筛选得到的产纤维素酶活力较高的野生菌株进行紫外诱变得到诱变菌株ＴＭａ－９１１８,该菌株的产酶最适条件下为：稻草粉和麸皮的质量比例为８：２,培养含水量质量分数为６５％,发酵时间７２ｈ,发酵温度为３０℃。该酶最适反应ＰＨ为４．４,最适反应温度为５０℃,最佳浸提条件为４０℃蒸馏水。     

黑曲霉As．n.XEC-1液体发酵产β-葡萄糖苷酶条件及酶学性质研究

实验分离得到一株具有较高胞外分泌β-葡萄糖苷酶能力的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株As．n．XEC-1,并对其液体发酵产伊葡萄糖苷酶的条件及酶学性质进行了研究．结果表明,发酵温度32℃,发酵周期7d,摇床震荡频率200r／min,装液量500mL的三角瓶中装量为60mL,接种量8％,伊葡萄糖苷酶的活性最高．经过发酵条件优化后酶活由原来的130u／mL提高到192u／mL．β-葡萄糖苷酶的最适作用温度为50℃,最适作用pH值为4．6,在45℃以下时酶稳定性较好,在pH3．0～6．0之间较稳定．     

生孢噬纤维菌内切葡聚糖酶的异源表达及CBM6对其酶学性质的影响

内切葡聚糖酶是纤维素酶系的重要组分之一,但大部分内切葡聚糖酶酸碱耐受性较差。为挖掘新型内切葡聚糖酶,本研究从生孢噬纤维菌CX11基因组中克隆了一个内切葡聚糖酶基因Sm＿1350。该基因大小为2 196 bp,编码732个氨基酸,编码蛋白包含一个分泌信号肽、GH5催化结构域、6家族碳水化合物结合模块(CBM6)和一个C末端结构域(CTD)。利用实时荧光定量PCR技术对Sm＿1350在不同碳源条件下的相对表达水平进行了分析,结果表明,Sm＿1350在纤维二糖和滤纸培养基中的表达水平均显著高于在葡萄糖培养基中的表达水平,推测其在CX11降解纤维素过程中发挥一定作用。本研究构建了Sm＿1350及其3种截短突变体,分别为Sm＿1350、Sm＿1350-GH5-CBM6、Sm＿1350-GH5和Sm＿1350-CBM6,并在大肠杆菌中进行异源表达。结果表明,去除CTD结构域明显提高了目的蛋白的可溶性表达水平。以CMC为底物时,Sm＿1350-GH5-CBM6与Sm＿1350-GH5酶活力分别为(7 000.00±50.00)U/g和(2 542.73±35.03)U/g,表明去除CBM6降低了Sm...     

Bacillus tropicus来源β-D-呋喃果糖苷酶基因的克隆与表达及其酶学特性研究

为获得新β-D-呋喃果糖苷酶资源并探究其酶学性质及在转化糖中的应用潜力,挖掘出Bacillus tropicus来源的β-D-呋喃果糖苷酶基因BtFFase8,成功合成后表达在大肠杆菌宿主中。通过数据库筛选β-D-呋喃果糖苷酶的基因序列,将基因克隆至载体pET-28a(+)中。将获得的重组质粒转化至大肠杆菌BL21,构建重组菌株大肠杆菌BL21/pET28a-BtFFase8。采用亲和层析纯化克隆酶,用SDS-PAGE法分析蛋白分子量,通过葡萄糖试剂盒检测酶水解产物的能力得到酶活力,用福林酚试剂法测定蛋白质含量。克隆酶BtFFase8的分子质量为57.0 kDa,对蔗糖底物的比酶活力为13.4 U/mg; BtFFase8的最适pH和最适温度分别为pH 6.5和45℃,且在pH 5.0～8.0和40℃及以下温度保持酶活力稳定,残余酶活力大于80%;BtFFase8能耐受碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和胰蛋白酶的水解,残余酶活力大于70%。BtFFase8的发现及克隆酶优良的酶学功能为其未来应用于食品加工,特别是在转化糖的生产中奠定了良好的理论基础。     

一株木霉菌株的改良和产酶条件及酶学性质研究

将自然界筛选得到的产纤维素酶活力较高的野生菌株进行紫外诱变得到诱变菌株 TMa-91 1 8,该菌株的产酶最适条件为 :稻草粉和麸皮的质量比例为 8∶ 2 ,培养基含水量质量分数为 65% ,发酵时间 72 h,发酵温度为 30℃。该酶最适反应 p H为 4 .4 ,最适反应温度为 50℃ ,最佳浸提条件为4 0℃蒸馏水。     

好氧反硝化菌的物理诱变法育种研究

以实验室SBR反应器分离出的好氧反硝化菌（WXZ-9）为原始菌株，分别用微波和紫外线诱变．通过反硝化性能测定筛选得到的正突变体WXZ-9—8号，96h后的TIN去除率达到67．20％，比出发菌株WXZ-9号菌提高了7．07％，NO3ˉ - N去除率在24h达到100％；WXZ-9—8号突变体的最大亚硝基氮还原速率达到52．89mgNO2ˉ-N·L^1·d^-1，比WXZ-9号菌株高6．90mgNO2ˉ—N·L^-1·d^-1．结果表明：WXZ-9—8号突变体具有更好的亚硝基氮还原酶的活性，并且比出发菌株有更好的生长适应性．     

木聚糖酶产生菌的分离筛选及酶学性质

利用透明圈法从云南腾冲温泉出水口土样中粗筛出12株木聚糖酶产生菌,其中Xylan-12菌活力较高,对其进行了16S rDNA部分序列测定,经BLAST同源性分析确定其为Bacillus flavothermus。对Xylan-12产生的木聚糖酶进行了酶学性质的初步研究,结果表明,该酶的最适pH为6,最适温度为65℃。     

聚乙烯醇固定化反硝化菌的脱氮试验研究

探讨了聚乙烯醇（ＰＶＡ）包埋反硝化菌的包埋条件以及固定化反硝化菌废水脱氮的特性。结果表明：ＰＶＡ包埋的适宜条件是ＰＶＡ浓度为１０％（Ｗ／Ｖ），包菌量为１∶１，交联剂是ｐＨ为６．７的饱和硼酸溶液，交联时间为３０ｈ；减小包埋小球粒径并添加０．１％的活性炭粉末有助于提高包埋小球脱氮活性；经包埋后反硝化菌在低温（１１℃）、低浓度氧（０．５～１．０ｍｇ／Ｌ）以及有ＮＨ＋４（２００ｍｇ／Ｌ）时，其脱氮活性明显高于未包埋菌。     

产黄青霉苯乙酰CoA连接酶基因phl的克隆表达及其纯化酶的性质分析

苯乙酸与CoA反应,生成苯乙酰CoA,利用RT-PCR方法成功地从产黄青霉中扩增得到1737 bp不含内含子的phl基因,并将其克隆到pET30a原核表达载体,在大肠杆菌BL21（DE3）中低温诱导表达。经SDS-PAGE检测分析,获得与预期大小（62.1 kDa）一致的蛋白表达特异条带。通过Ni-NTA亲和层析柱纯化了重组酶,经检测苯乙酸的吸收,表明纯化酶对苯乙酸和CoA有明显的催化活性,酶活为1 680 U/mL。研究表明,纯化酶PCL最适宜温度为30℃,有一定的热稳定性,最适宜pH值为8.0,pH值为7.0~8.5时酶比较稳定。     

剩余污泥碱解上清液作为反硝化碳源的回用量实验研究

考察剩余污泥碱解上清液作为反硝化碳源的反应速率,并据此初步确定上清液的回用量。对剩余污泥进行碱解发酵,选取SRT-9d的上清液,采用不同的VFA／N比值进行批式试验,考察其反硝化速率,选择出试验条件下的较优比值,并应用于实际生活污水中,与单纯生活污水脱氮对照,考察回用的可行性以及回用量的确定,提出利用阶段反硝化率粗略估计污泥碱解上清液回用量的思路。结果显示,所有比值的反硝化速率曲线均可分为4段,且随着VFA／N比值的增加,反硝化速率明显增加,pH值的变化趋势也与之对应;以VFA／N=2．47为分界点,比值继续增加,反硝化速率的增长并不大;将上清液以一定比例投入生活污水,反硝化速率明显提高,平行组6h反硝化量分别达到47．0mg／L和33．9mg／L。     

反硝化聚磷菌N14原生质体的制备与再生条件研究

以反硝化聚磷菌N14为对象,应用原生质体技术,从菌龄,氨苄青霉素钠预处理的浓度、时间,溶菌酶的浓度、酶解时间和温度等方面研究了该菌原生质体形成和再生的最佳条件。结果表明,反硝化聚磷菌N14原生质体最大制备率产生的条件:在菌龄16 h时加入120μg/m L氨苄青霉素钠预处理6 h,1μg/m L的溶菌酶38℃酶解45 min,再生培养基培养48 h后,该菌原生质体制备率与再生率分别为96.7%和40.9%。溶菌酶酶解时间对菌体再生率的影响大于制备率。     

具脂肪酶和酯酶活性酵母菌的选育及酶学研究

从青岛市区含油土壤中筛选得到一株酵母S9菌株，它可以同时产生较高酶活的脂肪酶和酯酶．对影响S9产脂肪酶和酯酶的各种因素进行了研究，1％的可溶性淀粉为最佳碳源，最适的初始培养pH和温度分别为pH 6．5和28℃，对S9脂肪酶和酯酶的各种酶学性质进行的研究表明，脂肪酶和酯酶的最适作用温度都为30℃，最适作用pH分别为7．0和8．0，两者都属于常温酶，在30～40℃范围内比较稳定，脂肪酶在中性偏碱的pH环境中比较稳定，酯酶属于碱性酶，在pH 7．5～10．5范围内相当稳定。     

反硝化聚磷菌的培养驯化及其FISH鉴定

在SBR反应器中,采用厌氧-缺氧一段式驯化方式成功地培养驯化出反硝化聚磷菌,并表现出良好的除磷脱氮效果.通过FISH技术对不同培养驯化时期的反硝化聚磷活性污泥进行鉴定,结果表明在以NO-3-N为电子受体驯化反硝化聚磷菌的过程中,Rhodocclus sp.及其相关菌种逐渐成为优势菌种,占据了较大的比例,而几乎检测不到Pseudomonas sp..     

猪心苹果酸脱氢酶酶学性质及稳定性研究

对动物组织来源的苹果酸脱氢酶——猪心肌苹果酸脱氢酶的酶学性质及稳定性进行了研究.结果表明:苹果酸脱氢酶的相对分子质量约为69 000,含有2个亚基,每个亚基的相对分子质量约为34 000;该酶的最适作用pH为8.0,最适作用温度为50℃;Km值为84.6μmol/L(草酰乙酸,pH8.3).通过对酶的稳定性研究,该酶在50℃以下具有较好的稳定性,其pH稳定范围为7.0~9.0(25℃,20 h).