β-葡萄糖苷酶交联聚合物的制备及酶学性质

对来源于黑布林的β-葡萄糖苷酶进行了交联法制备(CLEAs),并对其酶学性质进行了初步研究。结果发现,当异丙醇为蛋白沉降剂时CLEAs的酶活回收率最高达58.9%;该聚合酶的最适温度为55℃,显示出良好的温度耐受性;CLEAs的Km、Vmax和Ki值分别为5.74 m M、203.4μmol/(min·mg蛋白)和394.03 m M;此外,金属离子Hg2+、Ag+可显著降低CLEAs的酶活。     

异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分离纯化及其酶性质

采用分子筛及离子交换法对微生物Absidia sp.R42g所产异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶进行分离纯化,并研究其酶学性质。结果表明,异槲皮苷-β-葡萄糖苷酶的分子质量为62ku,最适温度为40℃,最适pH为5.0。在50℃以下,pH 4.0~6.0,相对酶活力较稳定,Na~+、K~+、Ca~(2+) 3种金属离子对相对酶活力无影响;而在Fe~(3+)、Cu~(2+)两种金属离子存在的情况下,相对酶活力为零;酶反应结果显示该酶的最大反应速度和米氏常数分别为6.711mmol/(L·h)和18.89mmol/L。     

黑曲霉496-1菌株植酸酶的分离纯化及酶学性质

黑曲霉(A.niger)496-1菌株所产胞外植酸酶，经透析浓缩、DEAE-cellulose离子交换层析及Sephadex G-75，Sephacryl 100凝胶过滤，获得了2个植酸酶，其相对分子质量分别为64200及41100该2个植酸酶的最适pH分别为6．0和3．0，最适温度分别为55℃和40℃．初步确定一个是中性植酸酶，另一个为酸性植酸酶．     

米曲霉HDF-7蛋白酶的分离纯化及酶学性质研究

对米曲霉 HDF-7 所产蛋白酶进行分离纯化,经硫酸铵沉淀和凝胶过滤层析得到电泳纯的蛋白酶,经SDS-PAGE 电泳测定其相对分子质量约为30 KDa.该酶的最适反应温度为50℃,最适作用pH值为7.0,该酶在20℃时具有良好的热稳定性,在pH6.0～8.0的条件下酶是相对稳定的,Mn2+对该蛋白酶有明显的激活作用,Cu2+对该蛋白酶有强烈的抑制作用,Km值为78μg/mL,最大反应速度V max为6.29μg/min.     

海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究.结果表明,最佳提取条件为:pH6.0的磷酸盐浸提液0.05 mol/L,NaCl浓度为0.05 mol/L,缓冲液体积与海参肠质量之比为4∶1,硫酸铵饱和度为80%;该酶最适反应条件为:温度40℃,pH6.0;该酶在10~40℃,pH5.0~6.5酶活力稳定.Mn2+对酶具有一定的激活作用,Cu2+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+、Ba2+、K+、Ag+对酶存在不同程度的抑制,其中Cu2+对酶的抑制作用最强.     

谷氨酰胺转胺酶的分离纯化及酶学性质

茂原链轮丝菌Streptoverticillium mobaraense所产生的谷氨酰胺转胺酶发酵液通过抽滤、超滤、乙醇沉淀、离心和冷冻干燥，制得粗酶粉的酶活约为1033U／g。对粗酶研究发现，该酶的最适反应温度为52℃，最适pH为6.0；粗酶的pH稳定范围在4－8，温度稳定范围在20－40℃，离子强度对该酶的活性稍有影响，粗酶经CM－纤维素层析和Sephadex G-75凝胶过滤层析后得到较纯的酶，通过SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳检验蛋白质纯度，得到较弱的单一区带，其中，CM－纤维素层析的纯化倍数为4.5，收率质量分数约为78.8%；凝胶过滤层析纯化倍数为1.11，收率质量分数为50％；用凝胶过滤法测得谷氨酰胺转胺酶的相对分子质量为40092。     

黑曲霉As．n.XEC-1液体发酵产β-葡萄糖苷酶条件及酶学性质研究

实验分离得到一株具有较高胞外分泌β-葡萄糖苷酶能力的黑曲霉（Aspergillus niger）菌株As．n．XEC-1,并对其液体发酵产伊葡萄糖苷酶的条件及酶学性质进行了研究．结果表明,发酵温度32℃,发酵周期7d,摇床震荡频率200r／min,装液量500mL的三角瓶中装量为60mL,接种量8％,伊葡萄糖苷酶的活性最高．经过发酵条件优化后酶活由原来的130u／mL提高到192u／mL．β-葡萄糖苷酶的最适作用温度为50℃,最适作用pH值为4．6,在45℃以下时酶稳定性较好,在pH3．0～6．0之间较稳定．     

纺织用嗜热内切-1,4-β-葡聚糖酶在大肠杆菌中的重组表达、纯化与酶学性质

首先从Pyrococcus horikoshii中克隆出编码热稳定性的内切纤维素酶基因,以载体pet21a为表达质粒,构建重组质粒pet21a-1171,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)plys中进行表达,目的基因得到明显的可溶性表达,通过加热变性处理和离心后,重组酶纯度达到80%以上,随后对加热处理后的粗酶液进行简单酶活测定,结果表明,最适反应温度为95℃,与国外文献报道相一致,嗜热内切-1,4-β-葡聚糖酶成功得到重组可溶性表达。     

黑曲霉LH2446纤维素酶的纯化及酶学性质的研究

从黑曲霉固态发酵物中提取纤维素酶。粗酶液经硫酸铵盐析除去大量杂蛋白,然后通过2次SephadexG-100柱纯化CMC酶,提纯倍数可达47.22。酶学研究表明,纤维素酶中CMC酶最适作用温度为60℃,最适作用pH为4.5,CMC酶的Km为6.54mg/mL,Vmax为0.12mg/mL.min。     

草菇木聚糖酶的纯化提取和酶学性质

草菇产胞外木聚糖酶通过各级浓缩和纯化，获得接近电泳纯蛋白．通过SDS—PAGE测得相对分子质量为24500．木聚糖酶为糖基化修饰的蛋白，含有质量分数20．24％的糖．O-糖基化能增加木聚糖酶的活性，O-和N-糖基化都能提高木聚糖酶的稳定性．5min反应，草菇木聚糖酶在60℃和pH值5.65时活性最高．在此条件下，该酶的Km值为3．87mg／mL，Vmax为1250IU／mg．纯酶的稳定pH值为6．54，57℃时半衰期为1h。     

海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1，3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究．结果表明，最佳提取条件为：pH6．0的磷酸盐浸提液0．05mol／L，NaCl浓度为0．05mol／L，缓冲液体积与海参肠质量之比为4：1，硫酸铵饱和度为80％；该酶最适反应条件为：温度40℃，pH6．0；该酶在10-40℃，pH5．O～6．5酶活力稳定．Mn^2＋对酶具有一定的激活作用，Cu^2＋、Cd^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋、Zn^2＋、Bd^2＋、K^＋、Ag^＋对酶存在不同程度的抑制，其中Cu^2＋对酶的抑制作用最强．     

米曲霉β-半乳糖苷酶的纯化与性质研究

以40％饱和度的硫酸铵溶液去除杂蛋白，用80％饱和度的硫酸铵和75％的丙酮纯化米曲霉β-半乳糖苷酶，其比活力为147．7U／mg，回收率为38．1％。该酶最适反应温度和pH分别为50～55℃和4．0～6．0，作用于乳糖的米氏常数Km为16．7mmol／L，最大反应速度Vmax为5．56μmol／min。     

黑曲霉植酸酶的纯化及性质研究

对黑曲霉液态发酵植酸酶的纯化及其性质进行了初步探讨.采用葡聚糖凝胶过滤及纤维素离子交换层析对粗酶液进行纯化,电泳显示为单一谱带,该酶的相对分子质量为63000.研究显示其性质为:37℃的条件下以植酸钠为底物的米氏常数为0 31mmol/L,该酶最适pH为5 5,最适作用温度为55℃.研究了金属离子对植酸酶活力的影响.     

放线菌果胶酶的分离纯化及酶学性质的研究

对放线菌产生的果胶酶进行了分离纯化，获得了电泳纯的组份Ｅ１。并对Ｅ１的最适作用ｐＨ、温度，ｐＨ、温度及贮存稳定性，分子量、等电点、ｋｍ、Ｖｍ、氨基酸组成、裂解酶活、水解酶活进行了研究。     

耐热β—半乳糖苷酶基因在大肠杆菌中的表达

将来自嗜热脂肪芽孢杆菌IAM11001的高温乳糖酶基因bgaB亚克隆到具强启动子的大肠杆菌载体pKK-223-3中，经IPTG诱导后，表达出的重组蛋白质仍具有耐高温活性，其相对分子质量与天然蛋白质相似，表达量为1．5U／mg，比出发菌株高10倍。     

Bacillus tropicus来源β-D-呋喃果糖苷酶基因的克隆与表达及其酶学特性研究

为获得新β-D-呋喃果糖苷酶资源并探究其酶学性质及在转化糖中的应用潜力,挖掘出Bacillus tropicus来源的β-D-呋喃果糖苷酶基因BtFFase8,成功合成后表达在大肠杆菌宿主中。通过数据库筛选β-D-呋喃果糖苷酶的基因序列,将基因克隆至载体pET-28a(+)中。将获得的重组质粒转化至大肠杆菌BL21,构建重组菌株大肠杆菌BL21/pET28a-BtFFase8。采用亲和层析纯化克隆酶,用SDS-PAGE法分析蛋白分子量,通过葡萄糖试剂盒检测酶水解产物的能力得到酶活力,用福林酚试剂法测定蛋白质含量。克隆酶BtFFase8的分子质量为57.0 kDa,对蔗糖底物的比酶活力为13.4 U/mg; BtFFase8的最适pH和最适温度分别为pH 6.5和45℃,且在pH 5.0～8.0和40℃及以下温度保持酶活力稳定,残余酶活力大于80%;BtFFase8能耐受碱性蛋白酶、酸性蛋白酶和胰蛋白酶的水解,残余酶活力大于70%。BtFFase8的发现及克隆酶优良的酶学功能为其未来应用于食品加工,特别是在转化糖的生产中奠定了良好的理论基础。     

4-(7’-阿朴-β-胡萝卜素-7’基)酚的合成研究

通过Wittig反应由β-阿朴-8'-胡萝卜醛合成了4-(7'-阿朴-β-胡萝卜)苯甲醚,采用BBr_3作去甲基化试剂,制备了4-(7'-阿朴-β-胡萝卜-7'基)苯酚。采用IR,MS,~1HNMR鉴定了产物的结构。实验发现对硝基苯基亚甲基化三苯基膦与β-阿朴-8'-胡萝卜醛不能进行Wittig反应。     

耐热碱性纤维素酶分离纯化及酶学特性研究

通过离子交换和凝胶过滤两步层析法,从耐碱芽孢杆菌Ⅲ-3的培养液中分离到相对分子质量约为89kD、比活力高达420U/mg的碱性纤维素酶Ⅲ-3-A.质谱分析显示:Ⅲ-3-A酶蛋白与芽孢杆菌KSM-64、KSM-S237等产生的A5家族碱性纤维素酶具有一定的同源性.酶学性质研究结果表明:Ⅲ-3-A的CMC酶反应以pH值为9.0、反应温度45℃左右为宜,在pH值为6~11和50℃以下酶活性稳定,且具有耐金属离子和表面活性剂等特性;Ca2 对酶的最适反应温度和热稳定性有显著影响,添加5mmol/LCaCl2可使最适酶反应温度和稳定性分别提高至50℃和55℃.该酶具有耐热、耐金属离子、耐碱及高比活力等特点,在棉织品的水洗整理及洗涤剂工业中具有良好应用前景.