马抗中东呼吸综合征冠状病毒特异性F(ab’)_2的制备

目的采用免疫亲和层析技术纯化制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)特异性IgG与F(ab’)_2。方法以经MERS-Co V病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,原核表达的MERS-CoV刺突蛋白S受体结合域(S-receptor binding domain,S-RBD)为抗原蛋白制备免疫亲和柱,提取制备抗原特异性IgG或F(ab’)_2。间接ELISA法检测各样品的活性,MERS假病毒中和试验检测样品的中和活性,BCA法测定样品的浓度,并计算收率。结果所制备的特异性IgG与特异性F(ab’)2的纯度分别为90. 1%和92. 8%,收率分别为8. 7%和3. 07%;在相同的浓度下,所制备的特异性IgG或F(ab’)_2的活性和中和活性均高于对照组中的血清总Ig G或总F(ab’)_2。结论成功制备了马抗MERS-CoV特异性IgG或F(ab’)_2,为建立更加安全与高效的抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2制备工艺奠定了基础。     

单克隆抗体F(ab’)_2片段的制备与质量控制

本文在F(ab’) 2 片段抗体的制备工艺上 ,采用HPLC疏水色谱法 ,用高性能的疏水色谱柱 ,经 2次纯化后的F(ab’) 2 纯度可大于 98% ,回收率大于 5 0 % ,整个过程控制无菌无热原 ,纯化后产品经检定完全符合有关人用鼠源性单抗质量控制标准 ,适宜做大规模生产。     

胃酶消化马血浆工艺参数的优化

目的应用DOE试验优化破伤风抗毒素(tetanus antitoxin,TAT)生产中胃酶消化马血浆过程的工艺参数。方法以破伤风类毒素免疫后的马血浆为原料,通过AKTA avant25中UNICORN 6.0软件设计4因子2水平全因子DOE试验模型,并以抗体F(ab′)2含量为评价指标,对影响胃酶消化的主要因子即胃酶加量、消化反应pH值、反应温度和反应时间进行优化。结果胃酶消化马血浆的最适工艺参数为:胃酶加量为13~15 U/ml,消化反应pH值为3.0~3.1,反应温度为35~37℃,反应时间为90~120 min,在该条件下进行6次稳定性试验,制备的TAT抗体F(ab′)2含量平均值达83.1%,标准偏差为2.47%。结论 DOE试验优化了TAT生产中胃酶消化马血浆过程的工艺参数,建立了有效的消化工艺,为降低过敏反应,提高TAT制品的质量提供了实验依据。     

应用木瓜酶消化抗甲胎蛋白单克隆抗体制备F(ab′)_2片断

用胃酶消化抗甲胎蛋白单克隆抗体（简称AFPMcAb）制备F（ab′）2片断，反应时间长，且F（ab′）2产量低。改用半胱氨酸活化的木瓜酶，在没有半胱氨酸存在的条件下消化AFPMcAb。反应4小时后．SDS－PAGE电泳结果显示，90％以上的AFPMcAb被降解为F（ab′）2片断、经S－200层析柱纯化后，F（ab′）2片断的回收率为理论值的48％。用双抗体夹心竞争抑制ELISA法测定经S－200纯化的AFPMcAbF（ab′）2片断的活性。其活性与完整的AFPMcAb相同。抑制效价均为1：6400。     

东亚钳蝎蝎毒的毒性及其F(ab’)_2抗体的制备

目的测定东亚钳蝎(Buthus martensii Karsch,BMK)蝎毒的毒性,并制备能有效中和BMK蝎毒的F(ab’)2抗体。方法分别经腹腔和肌肉注射小鼠,测定不同产地(山西、山东、河南、辽宁)BMK蝎毒对小鼠的半数致死量(LD50);以山西产BMK蝎毒免疫云南矮种马,获得免疫血浆,经盐析、酶解、加热等步骤制备F(ab’)2抗体,采用ELISA、免疫扩散和小鼠体外中和试验分别测定超免血浆、纯化的IgG及F(ab’)2抗体对各地产BMK蝎毒的抗体效价。结果山西产BMK蝎毒的LD50最小,小鼠腹腔注射的LD50为1.67 mg/kg,肌肉注射LD50为2.06 mg/kg。制备的F(ab’)2抗体的纯度为86.5%;纯化的IgG稀释至1×10-9 mg/ml,抗体ELISA效价呈阳性,较纯化前(1×10-7 mg/ml)提高了100倍;纯化的IgG和制备的F(ab’)2抗体与山西产BMK蝎毒比例为0.4∶1时,免疫扩散试验出现清晰的沉淀线,与其他产地BMK蝎毒比例均为0.1∶1时,出现清晰的沉淀线;F(ab’)2抗体与山西产BMK蝎毒质量比为2∶1时,可保护小鼠100%存活。结论成功利用蝎毒免疫动物制备了高纯度的F(ab’)2抗体,该抗体可有效中和多个产地的BMK蝎毒。     

人抗破伤风毒素免疫球蛋白国际标准品的协作标定

应用中和试验、血凝试验和ELlSA对人抗破伤风毒素免疫球蛋白国际标准品的推荐品进行了测定。中和试验测定样品A(推荐品)的效价为134.2(3.04％)IU/瓶;B(阳性对照)为58.6(7.95％)IU/瓶;C(阴性对照)为〈201U/瓶。ELISA测定的效价,A为108.2(7.13％)Iu/瓶;B为55.6(11.56％)IU/瓶。用血凝试验测定的效价,A为160.7HAU/瓶;B为84.3HAU/瓶。除血凝试验测定的结果偏高外,其它两法测定的结果均与协作组相近。此国际标准品已经WHO第43次生物检定专家委员会确定,效价为120IU/瓶。     

A型肉毒抗毒素的层析纯化

目的层析纯化A型肉毒抗毒素,提高免疫球蛋白F(ab′)2的纯度。方法采用阴离子交换层析纯化A型肉毒抗毒素,并通过试验设计(design of experiment,DoE)方法优化缓冲液的pH与电导。结果流穿液中的小分子杂蛋白含量受电导的影响较显著,并随着电导的降低而降低,而pH在试验设计范围内对其影响较小;聚集体/聚合体含量在低pH、高电导时含量较高,高pH、低电导时含量较低;F(ab′)2的纯度主要受电导的影响,并随着电导的升高而降低,在试验设计范围(2~20 ms/cm)内,F(ab′)2的纯度均在90%以上。结论采用阴离子交换层析可有效降低A型肉毒抗毒素中聚集体/聚合体以及部分小分子杂蛋白的含量,提高F(ab′)2的含量。     

肠道病毒71型多克隆抗体F(ab’)2片段的制备及其体外中和效果评价

目的制备肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)多克隆抗体F(ab’)2片段,并评价其体外中和效果。方法采用硫酸铵分级沉淀法从EV71感染的兔血清中提取Ig G,用胃蛋白酶进行酶解,正交试验确定最佳酶解条件;使用阴离子交换层析(Q Sepharose Fast Flow)纯化得到F(ab’)2片段,采用体外中和试验检测其对EV71的中和效果。结果硫酸铵分级沉淀法得到电泳纯的Ig G;最佳酶解条件为:胃蛋白酶与Ig G按1∶10的质量比混合,47℃反应4 h,在此条件下,F(ab’)2的产率最大值为79.51%,且方差分析表明,酶切比例对F(ab’)2产率的影响最大,温度次之,时间对F(ab’)2产率的影响不明显;经阴离子交换层析纯化,可有效去除Fc片段,得到电泳纯的F(ab’)2;F(ab’)2具有与Ig G、正常血清同等的中和效果。结论成功制备了EV71兔多克隆抗体F(ab’)2片段,初步确定该F(ab’)2片段具有良好的体外中和效果。     

精制马抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白疏水层析方法的优化

目的对精制马抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白疏水层析方法进行优化。方法将胃蛋白酶直接加入制备好的高效价马抗H5N1禽流感病毒血清进行消化裂解,再加入饱和度为26%的硫酸铵溶液,盐析沉淀离心一次后,直接进行疏水层析进一步纯化F(ab′)2抗体。结果连续洗脱依次出现6个蛋白峰,50min左右,洗脱峰3开始出现,其中含大部分F(ab′)2抗体,此时硫酸铵摩尔浓度约为1.0～1.1mol/L。阶段梯度洗脱,当硫酸铵摩尔浓度降至1.0mol/L时,大量F(ab′)2片段被洗脱下来,纯度达90%以上。结论优化了精制马抗H5N1禽流感病毒免疫球蛋白的疏水层析方法,降低了硫酸铵用量,减少了离心次数,生产周期也大大缩短。     

层析技术制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒F(ab’)_2

目的采用层析技术制备高纯度的马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrom coronavirus,MERS-CoV)F(ab’)_2。方法以MERS-CoV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,采用亲和层析技术提取血清IgG,经胃蛋白酶酶切后,通过阴离子交换层析、疏水层析、凝胶过滤层析分别对F(ab’)_2进行纯化;以MERS假病毒检测所制备的IgG与F(ab’)_2中和活性。结果凝胶过滤层析实现了F(ab’)_2的高纯度分离,最终制备的F(ab’)_2收率约70%,纯度为93%以上,具有良好的中和活性,其半数抑制浓度(IC_(50))为5.13μg/ml。结论制备了高纯度马抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2,为人用抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2生产工艺的建立奠定了基础。     

卤水石灰法制备Mg(OH)_2

为降低卤水石灰法制备Mg(OH)2过程中产物中的钙摩尔分数,探讨了卤水浓度、反应温度、卤水滴加速度、加料方式等对产品质量的影响规律,采用正交实验研究洗涤时间、洗涤温度、洗涤用水量和洗涤次数各因素对钙摩尔分数的影响效果.研究结果表明,卤水滴加速度为3 mL/min、卤水浓度控制为1.5 mol/L、反应温度在60℃时可以制得钙摩尔分数较低的Mg(OH)2,洗涤脱钙的影响效果的主次顺序基本为洗涤温度大于用水量大于洗涤时间大于洗涤次数.     

水化法制备超细Mg(OH)_2的研究

以菱镁矿为原料,采用水化法制备Mg(OH)2 超细粉体,研究了水化温度、添加剂对水化产物颗粒大小的影响。结果表明:NaOH为添加剂,水化温度70℃所得产物颗粒最细,产物d50为0 94μm;NaOH作添加剂时,随OH-浓度增加,产物粒径减小,当OH-浓度为1mol/L,所得产物粒径最小,其d50为0 94μm,但随OH-浓度的进一步增加,颗粒有增大趋势;氨水作添加剂时变化趋势与NaOH作添加剂类似,当OH-浓度为1 55mol/L时,产物粒径最小,d50在1 6μm左右。     

F掺杂TiO_2的制备及其甲醇电氧化性能研究

采用水热法制备了F掺杂的TiO2,将其与碳黑机械混合制成复合载体,采用微波辅助加热乙二醇法制备了载Pt电催化剂。通过X射线衍射(XRD)和扫描电镜(SEM)对F-TiO2进行了表征,结果表明,F掺杂后,TiO2仍然呈锐钛矿结构,形貌呈纳米片层结构。Pt/F-TiO2-C催化剂表现出很好的催化活性和稳定性,循环伏安法和计时电流法的测试结果表明,复合载体中F的加入有利于甲醇的电催化氧化,提高了Pt对甲醇氧化的抗毒化能力,使其质量比活性是商业Pt/C催化剂的1.2倍。     

N/F/TiO2的制备及光催化氧化性能

以钛酸四丁酯为钛源,以尿素和氟化铵为N、F源,制备N/F/TiO2光催化材料,用于亚甲基蓝降解效率研究.结果表明,摩尔比为N∶F∶Ti=1∶4∶5的光催化剂在锻烧温度为600℃、pH =7的条件下,100 mg N/F/TiO2光催化剂对100 mL浓度为20 mg/L的亚甲基蓝溶液光催化降解4h时效率最高.     

N/F/TiO_2的制备及光催化氧化性能

以钛酸四丁酯为钛源,以尿素和氟化铵为N、F源,制备N/F/TiO2光催化材料,用于亚甲基蓝降解效率研究。结果表明,摩尔比为N∶F∶Ti=1∶4∶5的光催化剂在锻烧温度为600℃、pH=7的条件下,100 mg N/F/TiO2光催化剂对100 mL浓度为20 mg/L的亚甲基蓝溶液光催化降解4 h时效率最高。     

Co掺杂对Na3V2(PO4)2F3材料结构和电化学性能的影响

首次采用溶胶-凝胶法制备Co掺杂Na_3V_(2-x)Co_x(PO_4)_2F_3(x=0.00,0.05,0.1,0.2)钠离子电池正极材料。使用XRD、FE-SEM、恒流充放电和交流阻抗测试分析了Co掺杂对Na_3V_2(PO_4)_2F_3材料的结构和电化学性能的影响。结果表明,Co~(2+)取代V~(3+)可在Na_3V_2(PO_4)_2F_3晶格内产生V~(3+/4+)混合电价从而提高Na_3V_2(PO_4)_2F_3材料的电子电导率,具有更大离子半径的Co~(2+)替换V~(3+)可增大Na_3V_2(PO_4)_2F_3晶胞体积,扩宽钠离子传输通道,从而提高其离子电导率。此外,Co掺杂可有效减小Na_3V_2(PO_4)_2F_3电极的电荷转移阻抗。电化学测试结果表明,x=0.1时的Na_3V_(1.9)Co_(0.1)(PO_4)_2F_3电极展现出了最优异的电化学性能,0.1C时的首次放电比容量为111.3mAh·g~(-1),5C时首周可逆容量为91.9mAh·g~(-1),循环80次的容量保持率为70%。     

Al_2(SO_4)_3催化玉米芯直接液化制备糠醛研究

以玉米芯为原料,采用Al_2(SO_4)_3催化液化选择性制备糠醛,考察反应温度、催化剂添加量及水含量对玉米芯转化及糠醛产率的影响。结果表明,Al2(SO4)3催化剂对玉米芯液化及糠醛选择性制备具有明显的促进作用。研究获得玉米芯选择性制备糠醛的最佳反应条件为:反应温度150℃、催化剂添加量0. 45 g及水含量10%。最佳反应条件下玉米芯转化率为78. 5%,糠醛产率为84. 9%。玉米芯及其液化残渣的红外及热重分析表明,玉米芯中三大组分均得到了明显降解。     

Al_2(SO_4)_3催化玉米芯直接液化制备糠醛研究

以玉米芯为原料,采用Al_2(SO_4)_3催化液化选择性制备糠醛,考察反应温度、催化剂添加量及水含量对玉米芯转化及糠醛产率的影响。结果表明,Al2(SO4)3催化剂对玉米芯液化及糠醛选择性制备具有明显的促进作用。研究获得玉米芯选择性制备糠醛的最佳反应条件为:反应温度150℃、催化剂添加量0. 45 g及水含量10%。最佳反应条件下玉米芯转化率为78. 5%,糠醛产率为84. 9%。玉米芯及其液化残渣的红外及热重分析表明,玉米芯中三大组分均得到了明显降解。     

Co(OH)_2碱性浆化氢还原制备超细Co粉

首次实现了Co(OH)2浆料在碱性介质中的氢还原反应, 并由此制得了粒度小于0.1μm的超细金属钴粉. 还原终点的pH为8～12, 反应一般可在30～60 min内完成, Co的金属转化率接近100%. 考察了pH、温度、氢分压、催化剂等对还原速度的影响,并与Ni (OH)2碱性水浆的氢还原作了简单比较.