藜麦蛋白肽的酶解制备及体外降血脂与降尿酸活性研究

为研究藜麦蛋白降血脂肽的最佳酶解工艺条件和降尿酸活性,本研究以藜麦为原料提取蛋白,采用胰脂肪酶抑制率为活性指标,通过单因素实验和响应面分析法优化降血脂肽的制备工艺,并对藜麦蛋白肽的胰脂肪酶抑制活性、牛磺胆酸钠结合活性、胆固醇酯酶抑制活性、黄嘌呤氧化酶抑制活性和氨基酸组成进行分析表征。结果表明,藜麦降血脂肽的最优酶解条件为pH1.6、酶解温度42.9℃、底物浓度3.03%、酶解时间1 h和酶底比0.2%,所得酶解液的胰脂肪酶抑制率理论值为90.43%,实际值为90.93%±0.10%。该条件下制备的最优酶解物表现出优异的体外降血脂效果,其胰脂肪酶抑制率和胆固醇酯酶抑制率的IC₅₀分别为7.49μg/mL和4.73 mg/mL,牛磺胆酸钠结合率的EC₅₀为0.53 mg/mL。此外,最优酶解物显示出良好的黄嘌呤氧化酶抑制效果(IC₅₀=5.97 mg/mL),表明其具有体外降尿酸的作用。氨基酸分析表明,藜麦蛋白肽的必需氨基酸含量丰富(34.23%),并且疏水性氨基酸和酸性氨基酸百分含量分别为34.11%和31.66%。藜麦蛋...     

12种植物粗多糖的体外抗肥胖及抗氧化活性研究

为了探讨12种植物粗多糖的体外抗肥胖及抗氧化能力,从中筛选出具有较好的抗肥胖及抗氧化活性的多糖样品。在体外分别检测12种粗多糖对胰脂肪酶和α-淀粉酶的抑制作用,以及对DPPH自由基的清除能力。实验结果显示,12种粗多糖对胰脂肪酶的抑制结果为黄芪多糖抑制率最好,达到了76%,其次是枸杞多糖为63%;对α-淀粉酶的抑制率测定结果,有9种多糖对α-淀粉酶的抑制率达到了25%左右;抗氧化活性测定中,有3种多糖对DPPH自由基的清除率达到了20%以上。实验表明枸杞多糖和黄芪多糖对胰脂肪酶和α-淀粉酶活性显示出了较好的抑制效果,且对DPPH自由基的清除效果也较好,具有进一步开发为减肥产品的潜在价值。     

广金钱草不同极性萃取物体外降脂及降血糖活性的比较

该研究旨在比较广金钱草乙醇提取物及其各萃取相的体外降脂及降血糖活性。以φ=75%乙醇为溶剂，回流提取得到广金钱草醇提物，经石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水依次萃取，利用比色法检测乙醇提取物及各萃取相中总黄酮、总酚含量，并根据胰脂肪酶和胆固醇酯酶的抑制率评价乙醇提取物及其各萃取相的体外降脂活性，对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率评价体外降血糖活性。研究结果显示乙酸乙酯萃取相中总黄酮和总酚含量最高，分别为154.57 mg/g和34.27 mg/g。乙醇提取物对胆固醇酯酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性最高，抑制率分别为53.24%和68.52%；正丁醇萃取相对胰脂肪酶表现出最高的抑制活性，抑制率达到77.39%。石油醚萃取相对α-淀粉酶的抑制作用最强，抑制率达到78.60%。研究表明，广金钱草乙醇提取物及其各萃取相具有显著的降脂和降血糖活性，可为其深入研究药理活性提供参考依据。     

乳清蛋白源降糖肽的酶法制备及工艺优化

通过酶法制备乳清蛋白肽,以α-葡萄糖苷酶抑制率和蛋白水解度为评价指标,对酶解温度、pH、酶解时间、液料比(纯水∶乳清蛋白粉)4个因素进行单因素试验和响应面优化分析,确定木瓜蛋白酶水解乳清蛋白制备降血糖粗肽的最佳工艺条件.结果 显示,最佳工艺条件为pH 5.1、酶解温度46C、液料比30∶1mL/g、酶解时间4.1 h....     

鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的制备及影响因素

以鸡腿肉为原料,提取并酶解肌原纤维蛋白得到鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽,采用单因素试验和正交试验研究鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的制备条件及温度、pH值、金属离子、模拟胃肠液对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽功能特性的影响。结果表明：鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的最优酶解条件为：在鸡肉肌原纤维蛋白质量浓度为9 g/100 mL的溶液中,加入500 U/g胰蛋白酶,40 ℃酶解3 h,所得脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率高达67.35%,对α-淀粉酶的抑制率为23.0%;温度、pH值和金属离子对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽的活性有显著影响（P＜0.05）,温度为75 ℃、pH值为4、无金属离子存在时,鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率较高;模拟胃液对鸡肉蛋白源脂肪酶抑制肽功能特性的影响不显著（P＞0.05）,模拟肠液能显著降低脂肪酶抑制肽对脂肪酶活性的抑制率（P＜0.05）,但已经达到预期效果。     

驼乳蛋白α-淀粉酶抑制活性肽的制备与鉴定

利用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶对驼乳蛋白进行水解,对其酶解工艺、α-淀粉酶抑制活性、氨基酸组成、分子质量分布以及肽段序列进行比较研究,以期获得高活性的α-淀粉酶抑制活性肽。结果表明,酶解可提高驼乳蛋白的α-淀粉酶抑制作用。相对于碱性蛋白酶,在木瓜蛋白酶用量4%、酶解温度55℃、酶解pH 7.0、酶解时间2 h的最佳工艺条件下,水解驼乳蛋白获得的多肽具有更高的α-淀粉酶抑制活性。肽序列分析显示碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶水解驼乳蛋白制备的多肽分别鉴定出110种和69种肽段,其中IPLPLPLPLP和LPLPLPLR为最有效的α-淀粉酶抑制活性肽。因此,驼乳蛋白可以成为功能性食品或保健品中控制糖尿病有效成分的潜在来源。     

大豆乳清废水综合利用研究进展

为了提高大豆乳清废水中大豆乳清蛋白的应用价值,以大豆乳清蛋白为原料采用酶解法在自制的超声-恒温反应体系中制备抗氧化肽。以总还原力、DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率为指标,结合单因素实验和响应面法优化大豆乳清蛋白的酶解工艺。随后,利用超滤法（截留分子量30 kDa）回收水解液中的抗氧化肽,并以抗坏血酸为参照,评价其体外抗氧化活性。结果表明：中性蛋白酶和胃蛋白酶组合最适于大豆乳清蛋白的水解;在此基础上,确定的最佳工艺条件为酶-底物比5000 U/g 大豆乳清蛋白、酶解时间6 h和大豆乳清蛋白浓度9.0 mg/mL,所得大豆乳清蛋白水解液的DPPH自由基清除率为62.3%±1.1%。从该水解液中超滤所得抗氧化肽的总还原力、DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率的IC₅₀值分别为0.128、0.221和0.185 mg/mL,分别是抗坏血酸IC₅₀值的2.56、40.76、1.47倍,表明抗氧化肽的活性略低于抗坏血酸。因此,大豆乳清蛋白可作为制备高活性抗氧化肽的来源。     

酶法制备花生α-葡萄糖苷酶抑制肽的工艺优化

为促进花生蛋白资源的开发利用及发挥花生肽的降血糖作用，采用碱溶酸沉法制备花生蛋白，并利用不同商品蛋白酶水解花生蛋白制备花生肽。以α-葡萄糖苷酶抑制率为评价指标，对蛋白酶进行了筛选。在此基础上，采用单因素试验和响应面试验对花生α-葡萄糖苷酶抑制肽的制备工艺进行了优化。另外，考察了花生蛋白水解度和花生肽α-葡萄糖苷酶抑制活性的相关性。结果表明：与其他商品蛋白酶相比，胰蛋白酶制备的花生肽的α-葡萄糖苷酶抑制活性最高；酶法制备花生α-葡萄糖苷酶抑制肽的最优工艺条件为将花生蛋白于95 ℃加热5 min进行预处理，采用胰蛋白酶水解，水解时间62 min，加酶量8.9%，底物质量浓度4.1 g/100 mL，在最优条件下花生肽α-葡萄糖苷酶抑制率达到(68.82±0.24)%，此时花生蛋白的水解度为10.09%；水解度在8.0%~11.5%范围内与花生肽的α-葡萄糖苷酶抑制活性呈显著正相关。综上，花生蛋白经胰蛋白酶水解后得到的花生肽对α-葡萄糖苷酶具有显著的体外抑制活性。     

大豆多肽中α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制剂的虚拟筛选及体外活性验证

目的:通过抑制碳水化合物消化酶的活性延缓碳水化合物的消化,来预防和控制糖尿病的作用已经成为多领域的研究热点。β-伴大豆球蛋白是大豆蛋白中含量最高的功能性蛋白,但其胃肠道消化后产生的多肽是否具有抑制碳水化合物消化酶的活性还不得而知。方法:将β-伴大豆球蛋白进行胃肠道模拟消化,通过虚拟筛选和ADMET预测选出α-葡萄糖苷酶抑制肽和α-淀粉酶抑制肽,检测多肽对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制作用。结果:通过胃酶、胰酶和糜蛋白酶将β-伴大豆球蛋白虚拟酶解成95个小分子多肽;筛选出8个α-葡萄糖苷酶抑制肽和α-淀粉酶抑制肽;发现氢键和静电相互作用在多肽与α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶结合中起重要作用;体外验证发现四肽EASY具有较强α-葡萄糖苷酶抑制效果,其IC50值为208.6 μg/mL,未发现明显α-淀粉酶抑制效果。结论:α-葡萄糖苷酶抑制肽EASY具有抑制碳水化合物消化酶的活性,可能成为控制糖尿病的潜在抑制剂。     

基于BP神经网络的牡蛎α葡萄糖苷酶抑制剂活性肽制备工艺优化

为获得α-葡萄糖苷酶抑制率活性较好的活性肽,采用牡蛎为原料,选取中性蛋白酶和动物蛋白水解酶进行酶解。以牡蛎酶解活性肽的α-葡萄糖苷酶抑制率为评判指标,进行均匀设计实验,获得了酶解温度、加酶量和底物浓度三者与牡蛎活性肽α-葡萄糖苷酶抑制率之间的关系。将前三者作为BP神经网络的输入,后者作为输出设计神经网络,对牡蛎酶解过程进行模拟以及对牡蛎活性肽的活性进行预测,并得出最优酶解工艺参数。结果表明:酶解温度为55℃,酶解时间为5 h,加酶量为600 U/g,底物浓度为0.25 g/m L时,酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率最大为89.22%。因此,利用BP神经网络可对牡蛎酶解非线性过程进行较好的模拟,并且对酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率可进行较好预测,有利于牡蛎酶解活性肽的产业化制备。      

燕麦肽的制备、抗氧化性及其对α-淀粉酶抑制作用的研究

采用酶法制备燕麦肽,并对其抗氧化性及α-淀粉酶抑制作用进行了研究。在单因素分析的基础上采用正交实验分析方法对燕麦肽水解条件进行优化,测定其抗氧化性;对超滤分离后的两种燕麦肽组分的α-淀粉酶抑制作用进行比较;选用<5ku的燕麦肽通过单因素分析对α-淀粉酶抑制作用条件进行优化。结果表明,燕麦肽的最优水解条件为pH7.5,料液比1∶14,温度60℃,加酶量6%,此条件下燕麦肽DPPH清除率可达到80.11%,1.8mg/mL燕麦肽对Fe2+的螯合能力达到60.24%,3.2mg/mL燕麦肽对羟自由基清除率达到49.15%;5mg/mL小于5ku燕麦肽组分对α-淀粉酶的抑制率为68.98%,5mg/mL大于5ku燕麦肽组分对α-淀粉酶的抑制率为51.06%,小于5ku燕麦肽生物活性较强;燕麦肽对α-淀粉酶抑制作用的最优条件为底物浓度90mg/mL,多肽浓度12mg/mL,抑制时间为10min。燕麦肽具有较好的抗氧化性和α-淀粉酶抑制作用,在开发功能性食品方面具有较大的应用价值。      

基于BP神经网络的牡蛎α葡萄糖苷酶抑制剂活性肽制备工艺优化

为获得α-葡萄糖苷酶抑制率活性较好的活性肽,采用牡蛎为原料,选取中性蛋白酶和动物蛋白水解酶进行酶解。以牡蛎酶解活性肽的α-葡萄糖苷酶抑制率为评判指标,进行均匀设计实验,获得了酶解温度、加酶量和底物浓度三者与牡蛎活性肽α-葡萄糖苷酶抑制率之间的关系。将前三者作为BP神经网络的输入,后者作为输出设计神经网络,对牡蛎酶解过程进行模拟以及对牡蛎活性肽的活性进行预测,并得出最优酶解工艺参数。结果表明:酶解温度为55℃,酶解时间为5 h,加酶量为600 U/g,底物浓度为0.25 g/m L时,酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率最大为89.22%。因此,利用BP神经网络可对牡蛎酶解非线性过程进行较好的模拟,并且对酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率可进行较好预测,有利于牡蛎酶解活性肽的产业化制备。     

牡丹籽油及植物提取物的降血糖降血脂活性

以功能因子对α-淀粉酶、α-葡萄糖苷酶、胰脂肪酶、胆固醇酯酶和胆固醇胶束溶解度抑制率为评价指标,筛选出5种活性成分。以α-淀粉酶和胆固醇酯酶活性为评价指标,用正交t值法和加权综合分析的方法对5因素主成分分析及辅药交互作用分析。结果表明牡丹籽油、茶多酚和银杏黄酮是复方的主要成分,绞股蓝皂甙和苦瓜提取物是辅药,且主药和辅药及辅药之间可以协同抑制酶活性。     

超声辅助纤维素酶法提取辣木籽多酚的工艺优化及其体外活性

本实验以辣木籽为原料,研究纤维素酶添加量、乙醇体积分数、纤维素酶解时间、超声时间对辣木籽多酚提取量的影响,并采用响应面法优化超声辅助纤维素酶法提取辣木籽多酚工艺。此外,研究辣木籽多酚的体外抗氧化和降糖降脂活性。结果表明,超声辅助纤维素酶法提取辣木籽多酚最佳工艺为:酶添加量0.30%、乙醇体积分数53.00%、酶解时间31.00 min、超声时间33.00 min,在此条件下,所得辣木籽多酚的提取量为6.90 mg/g,与预测值无显著性差异。辣木籽多酚提取物具有较好的抗氧化活性,对ABTS自由基和DPPH自由基的清除能力的IC₅₀分别为0.76和0.61 mg/mL。同时,辣木籽多酚提取物具有较好的胰脂肪酶和α-淀粉酶抑制活性,其对胰脂肪酶和α-淀粉酶抑制率的IC₅₀分别为1.35和6.55 mg/mL。该研究为辣木籽多酚提取物的提取和应用提供理论依据。     

酶解乳清蛋白制备降胆固醇活性肽的工艺研究

利用生物酶技术酶解乳清蛋白,制备具有降胆固醇活性的多肽,通过响应面试验、二次旋转回归设计建立回归模型,以胆固醇胶束溶解度抑制率为评价指标,对乳清蛋白的酶解条件进行了优化。结果表明,乳清蛋白的最佳酶解条件为：酶解时间8.5 h、酶解温度55 ℃、酶解pH 8.0、加酶量4.7%、乳清蛋白含量5.8%,在此条件下,酶解乳清蛋白得到的活性肽的胆固醇胶束溶解度抑制率为18.21%。     

亚麻籽饼粕蛋白提取工艺优化及其水解物抑制α-淀粉酶活性研究

该研究以亚麻籽加工副产物-亚麻籽饼粕为原料制备α-淀粉酶抑制活性肽。采用响应面优化法对亚麻籽蛋白提取工艺进行优化,利用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶对所提取亚麻籽蛋白进行酶解,采用3,5-二硝基水杨酸法（3,5-dinitro salicylic acid,DNS）来测定α-淀粉酶活性,比较不同蛋白酶酶解产物的α-淀粉酶抑制活性。根据优化结果与实际条件调整,亚麻籽蛋白的提取条件为pH 9.5,料液比为1∶20（g/mL）,温度为50℃,一次浸提时间为120 min以及二次浸提时间为60 min。测得最佳试验条件下亚麻籽饼粕蛋白的提取率为83.27%。α-淀粉酶抑制活性表明,经碱性蛋白酶酶解后得到的酶解产物具有较高的活性,其α-淀粉酶的抑制活性为27%。     

乳清蛋白肽-钙螯合物的制备及性质研究

目的:研究乳清蛋白肽与金属离子螯合的工艺及螯合物的性质,发掘乳清蛋白与金属离子螯合物的保健功效,为人们提供一种新型的保健食品。方法:以水解度和抗氧化活性为指标,筛选最适酶解乳清蛋白的酶,优化酶解乳清蛋白的条件。将所得乳清蛋白肽与钙离子进行螯合反应,优化螯合工艺制备螯合产物,探讨乳清蛋白肽-钙离子螯合物的理化性质和生物活性。结果:碱性蛋白酶为酶解乳清蛋白的最适用酶。最佳酶解工艺条件是:酶解温度50℃、最适pH 8.0、酶/底物800 U/g、底物质量浓度0.05 g/m L、水解时间1 h。优化的乳清蛋白肽-钙螯合物制备条件是:以固体钙的形式添加,乳清多肽与氯化钙质量比20∶1,反应时间20 min,反应温度50℃。采用红外光谱法对螯合物进行表征,所得物质为乳清蛋白酶解物与钙的螯合复合物。结论:经酶水解得到的乳清多肽可与钙离子螯合,所得螯合物具有显著的抗氧化活性,为乳清蛋白复合产品的开发提供试验依据。     

抑制α-葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽制备工艺研究

目的研究超声波辅助蛋白酶酶解制备抑制葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽工艺方法。方法以冷榨花生蛋白粉为原料,以底物浓度、pH值、加酶量、温度、时间、超声波功率为考察因素,以α-葡萄糖苷酶抑制率为考察指标,在单因素实验基础上,通过响应面的Box-Benhnken实验设计进行工艺优化。结果超声波辅助蛋白酶酶解制备的α-葡萄糖苷酶抑制活性肽复合物的最优工艺条件为底物浓度11.13%、pH值9.45、加酶量1.2%、温度42℃、时间44min、超声波功率1200W;此工艺条件下的α-葡萄糖苷酶抑制率的响应面模型预测值为91.07%,验证实验的抑制率为(88.70±0.63)%,与模型预测值相差2.60%,说明模型与实际情况拟合较好,验证了预测模型的正确性。结论响应面法对超声波辅助蛋白酶解制备抑制α-葡萄糖苷酶的花生蛋白活性肽工艺条件参数优化是可行的,得到的工艺条件具有实际应用价值。     

发酵酸化技术对乳饼蛋白质降解及蛋白肽生物活性的影响

通过发酵酸化技术研制发酵型乳饼,以传统的直接酸化技术为对照,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）、液相色谱-质谱测定乳饼蛋白质降解情况和游离氨基酸含量,通过用液相色谱-串联质谱鉴定乳饼蛋白肽。并通过测定体外抗氧化活性、α-葡萄糖苷酶抑制率和血管紧张素转换酶（angiotensin-converting enzyme,ACE）抑制率表征乳饼蛋白肽的生物活性。SDS-PAGE结果表明,两种酸化技术均能促进乳饼蛋白质的降解,发酵酸化技术对乳清蛋白的降解程度更高,能促进游离氨基酸的释放。从发酵酸化乳饼中鉴定出潜在的ACE抑制肽23?条、抗氧化肽6?条和降糖肽5?条,而传统的直接酸化乳饼中分别为13、4?条和1?条。发酵酸化技术能显著提升乳饼蛋白肽的α-葡萄糖苷酶抑制活性和ACE抑制活性（P＜0.05）,其中分子质量＜3?kDa超滤组分对二者抑制率的IC50分别为1.250?mg/mL和0.416?mg/mL。发酵酸化技术能促进乳饼蛋白质降解,释放生物活性多肽,同时产生游离氨基酸,提升乳饼的生物学价值。     

双酶水解乳清蛋白ACE抑制肽的制备工艺优化

以乳清蛋白为原料,采用胃蛋白酶和胰蛋白酶双酶先后水解乳清蛋白,通过单因素试验和正交试验优化胃蛋白酶和胰蛋白酶水解乳清蛋白制备血管紧张素转换酶(ACE)抑制肽的工艺,将水解物以3 kDa超滤膜过滤,研究表明,胃蛋白酶水解乳清蛋白最佳酶解工艺条件为水解温度37℃、底物质量浓度6 g/100 mL、酶与底物比3 728 U/g,此时乳清蛋白ACE抑制率为86%;胰蛋白酶水解乳清蛋白最佳酶解条件为温度55℃、底物质量浓度6 g/100 mL、酶与底物比3 480 U/g,此时ACE抑制率为72%。利用超滤离心管获得分子量小于3 kDa的乳清蛋白ACE抑制率96%。