北衙金矿中蜡样芽孢杆菌的检测

利用地质体表土壤中蜡样芽孢杆菌数量作为指示菌去探寻隐覆金矿是一种非常有效的方法.采用可培养法、定性PCR扩增法及荧光原位杂交法对滇西北北衙金矿矿区蜡样芽孢杆菌的分布情况进行了检测.结果表明:选用蜡样芽孢杆菌专用培养基-卵黄琼脂培养基没有分离到该菌;定性PCR方法也未能扩增到蜡样芽孢杆菌的特异性解旋酶gyrB基因;采用荧光原位杂交的方法也未检测到该菌株,故推断北衙金矿区不存在蜡样芽孢杆菌异常现象.因此,以蜡样芽孢杆菌作为指示菌,寻找覆隐金矿的方法并不一定适用于所有金矿.     

芽孢杆菌BC4铬抗性相关基因chrA的克隆表达

以芽孢杆菌BC4菌株为对象,通过对其铬抗性相关基因chr A的克隆表达来测定其编码蛋白ChrA还原Cr(Ⅵ)的能力以及该蛋白在芽孢杆菌Cr(Ⅵ)去除中的作用,可帮助进一步阐明芽孢杆菌与Cr(Ⅵ)的作用机理,并为芽孢杆菌应用于铬污染治理奠定理论基础。PCR扩增出芽孢杆菌BC4菌株铬抗性相关基因chr A,PCR产物经克隆与测序,得到chr A完整的DNA序列。该序列大小为1182bp,共编码393个氨基酸,预测编码蛋白分子量为43kDa。根据利用NCBI所进行的BLAST序列比对结果,判断该基因为铬转运蛋白编码基因。将chr A基因PCR产物双酶切后连接到表达载体pET28b并转化进大肠杆菌BL21中,对其表达产物进行分析。结果表明,chr A基因在大肠杆菌BL21中表达约43kDa的蛋白,与预期结果相符;重组菌株对Cr(Ⅵ)的耐受能力高于对照菌株,说明ChrA蛋白在芽孢杆菌BC4的Cr(Ⅵ)抗性机制中起重要作用,且重组菌株对Cr(Ⅵ)具备较强的抗性。     

多重PCR方法检测食品中转基因成分

根据转基因农作物中最常用的花椰菜花叶病毒启动子（CaMV35S）和根癌农杆菌终止子（NOS）的序列，设计合成了两对不同的引种和相对应的两种荧光双链探针（FDCP），分别建立了多重PCR，应用FDCP的实时荧光PCR同时检测转基因成分35S启动子和NOS终止子的方法，并利用该套方法对马铃薯、大豆、玉米、甜椒、番茄等实物样品进行了检测，发现13份样品有6份检出35S启动子、NOS终止子，其余7份样品的检测结果为阴性，表明作者建立的多重PCR方法能有效检测出35S和NOS成分，其中多重PCR法具有灵敏度高、特异性好的特点，多重荧光PCR法则更为简便、快速、准确。     

枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转氨酶的异源表达

以野生型枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增获得带有sD序列及谷氨酸棒状杆菌信号肽AS0949的BTG基因。将其与大肠杆菌-谷氨酸棒状杆菌穿梭表达载体pXMJ19连接,构建重组质粒pXMJ19-Sbtf转化谷氨酸棒状杆菌ATCC13032。经IPTG诱导后该重组茵发酵液具有交联酪蛋白的能力,表明该重组茵能够实现分泌表达。     

芽孢杆菌促进植物生长的研究进展

芽孢杆菌(Bacillus)在自然界中分布广泛,其中有多种是植物根际促生菌的重要组成部分,因其具有促进植物生长、增强植物抗病能力、改善土壤质量等作用,是当下热门的研究方向。本文总结了芽孢杆菌促进植物生长机制和常用芽孢杆菌促进植物生长的能力,并对芽孢杆菌在今后的应用与发展前景进行了展望。     

蕈状芽孢杆菌SH-1抗菌活性物质发酵条件优化

从土壤中筛选到一株芽孢杆菌SH-1,该菌株能够产生抑制多种细菌的活性物质,初步确定该菌株为蕈状芽孢杆菌．通过单因素实验及正交实验对蕈状芽孢杆菌SH-1菌株所产生抗菌物质的发酵条件进行优化,采用牛津杯法测定该菌株所产抗菌物质的抑菌活性,最终确定蕈状芽孢杆菌SH-1菌株产生抗菌物质的最适发酵条件为：温度36℃,pH8,转速180r／min,接菌量体积分数4％,发酵时间24h．     

一株产生广谱抗菌物质地衣芽孢杆菌的筛选与鉴定

采用异步培养法,从土壤样品中筛选到一株产抗菌物质活性较强的菌株F69．结合菌落形态、生理生化指标和16SrDNA序列分析对菌株F69进行菌种鉴定．菌株F69在系统发育上属于芽孢杆菌属,它和地衣芽胞杆菌菌株的16SrDNA序列相似性最高为99％,该菌株被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis）．菌株F69可作为抗菌物质产生菌进行进一步深入研究．     

花生制品中金黄色葡萄球菌SYBR Green qPCR快检方法的评价研究

金黄色葡萄球菌是花生及其制品中常见的一种食源性致病菌,针对金黄色葡萄球菌的快速检测方法对实现花生及其制品中的食品安全防控有重要意义.根据金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因(nuc)设计了3对特异性引物,同时优化了退火温度,成功建立了一种特异性引物的SYBR Green实时荧光定量PCR(qPCR)快速检测方法,进一步对该方法的特异性、重现性及灵敏度进行了验证.以8种模拟污染花生加工产品为实验对象,对该方法与荧光定量PCR试剂盒-探针法及商品化Baird-Parker干粉培养基法进行了评价研究.结果表明,建立的SYBR Green qPCR快速检测方法特异性和重现性良好,最低检测限为8.99 copies/μL,其灵敏度比荧光定量PCR试剂盒-探针法高2个数量级. SYBR Green qPCR快速检测方法具有成本低、检测快速、特异性好、灵敏度高的优点,可用于花生及其制品中金黄色葡萄球菌的快速检测,也可为防控其他食品中的金黄色葡萄球菌污染提供参考.     

应用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术检测副溶血性弧菌

以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·mL-1,与普通PCR方法相当。副溶血性弧菌的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。     

猪流行性腹泻病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

为开发一种快速、准确检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的实时荧光定量PCR方法,根据引物设计原则在病毒基因组序列保守区设计了一对PEDV特异性引物,通过系统优化建立了EvaGreen实时荧光定量PCR方法,对其特异性、灵敏度和重复性进行了分析,并将该方法应用于90份临床样品检测。结果表明:该实时荧光定量PCR可以特异性地检测PEDV,对其他非靶标病毒无交叉反应,最低检测限为5 copies/μL;使用3个不同浓度的标准品进行批内和批间重复,Ct值的变异系数在2.8%以下,表明该方法重复性好;临床样品中PEDV的阳性率为48.9%。建立的实时荧光定量PCR是一种快速、准确、高度灵敏且特异的检测方法,可用于PEDV流行病学调查和临床诊断。     

溶藻弧菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法的建立

采用自行建立和优化的依赖于核酸序列恒温扩增(NASBA)检测体系,对溶藻弧菌进行检测。采用溶藻弧菌的hsp60基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测溶藻弧菌的NASBA检测法,并进行了特异性和灵敏度试验。结果表明:所建立起的NASBA检测方法,灵敏度为6.9×102 cfu.mL-1,高于普通PCR方法。溶藻弧菌的依赖于核酸序列恒温扩增检测方法具有较高灵敏度和和良好特异性,并且对仪器要求更低,用普通恒温设备即可进行反应,具有广阔的推广前景。     

多重PCR法检测食品中大肠杆菌O157

以大肠杆菌O157的stx1、stx2、wzy基因为靶基因,建立了一种新的多重PCR检测方法。PCR扩增结果与各参考菌株基因型一致。PCR结果表明,wzy基因特异性强,可作为检测O157菌株的标志基因,且为开发大肠杆菌O157的分子检测技术提供新的研究思路。     

HPV16 L1基因的PCR扩增、纯化和酶切鉴定

用重组DNA技术获取人乳头瘤病毒(HPV)16型晚期基因L1.以提取的宫颈癌细胞株Caski细胞总DNA为模板,设计一对L1基因特异引物,用PCR方法扩增HPV16 L1重组基因,用柱层析技术纯化和酶切初步鉴定HPV16 L1重组基因.该方法不仅可以扩增出HPV16 L1重组基因,用层析技术纯化HPV16 L1重组基因,还能通过酶切鉴定PCR产物HPV16 L1全长基因,为HPV感染的检测诊断和宫颈癌疫苗的制备奠定基础.     

厌氧氨氧化细菌的分子生物学鉴定

采用分子生物学方法从厌氧氨氧化污泥中提取细菌总DNA,使用特异性引物进行PCR扩增。扩增产物经过克隆、测序后,得到厌氧氨氧化菌部分16S rDNA序列(长度为838 bp)。将得到的序列构建系统发育树进行分析。结果表明,厌氧氨氧化污泥中的厌氧氨氧化细菌与Anaerobic Ammonium-Oxidizing Planctomycete(AJ131819)细菌在进化上关系最近,并将该类细菌暂命名为Anaerobic Ammonium-Oxidizing Planctomycete ASBBR Gene。     

条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR检测方法的构建

以管家基因18S rRNA为内参,采用SYBR GreenI荧光染料法,构建了条斑紫菜HSP90基因实时荧光定量PCR的检测方法,为条斑紫菜HSP90和18S rRNA基因筛选出定量引物各1对,获得的扩增曲线基线平整、指数区明显、斜率大且固定。两基因的熔解曲线显示单特异峰,Tm分别为88.5和85℃。两基因标准曲线的斜率分别为-3.307和-3.308,扩增效率都约为100.6%,Ct值在13～32范围内有良好的线性关系。构建的实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强,准确可靠、重复性好,检测周期短,为进一步研究HSP90基因在胁迫下的表达差异奠定了基础。     

假单胞菌ZL13邻苯二酚2,3-双加氧酶基因的克隆表达

寻找新型高效石油降解菌,并研究其相关基因一直是石油降解领域的热点.本文以细菌Pseudomonas sp.ZL13的降解性质粒pZL-1的DNA为模板,通过PCR扩增的方法进行基因克隆,得到邻苯二酚2,3-双加氧酶基因.序列分析结果表明,该基因大小为924bp,编码307个氨基酸;序列同源性比较结果显示,该基因与荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)和恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的基因序列的相似性较高,处于同一分支.将目的基因连接到pGEX-4T-2表达载体上,在E.coli BL21中成功表达,转化子具有原油降解能力.     

氮吸附法简易、快速测定固体的表面积

本文介绍了一种简易、快速测定固体物质的比表面积的方法.研究了样品管冷却空间及装置自由空间的大小对固体比表面积测定结果的影响.该方法具有操作简单,测定速度快和测定范围较广以及精密度和准确度均较好,是一种快速而可靠的比表面积的测定方法.     

绿色木霉DNA提取方法研究

利用CTAB法、简化CTAB法、氯化苄法和快速提取法等4种方法提取了绿色木霉DNA,并采用琼脂糖凝胶电泳和PCR对DNA进行了评价.凝胶电泳检测结果表明4种方法均可提取到绿色木霉DNA,但PCR检测结果表明只有CTAB法和简化CTAB法提取的DNA可用作CBHII基因的PCR模板.     

用组合引物PCR法简便快速筛选阳性正向克隆

PCR扩增的小片段DNA用T载体连接.转化受体菌后观察不到典型的蓝/白斑.用插入片段的特异性引物对菌落进行PCR来筛选阳性正向重组于,测序鉴定结果吻合率达100%,说明当利用颜色特性挑选阳性克隆成为困难时,菌落PCR技术是一种简单、快速、可靠的筛选方法.