提高酸乳中c9,t11- 共轭亚油酸含量的研究

本研究利用乳酸菌发酵法,添加合适的底物,在形成酸乳的同时提高乳中c9,t11- 共轭亚油酸,c9,t11-CLA的含量,筛选菌株的最佳配比条件,研究影响CLA 含量的因素,发现奶中影响酶促反应和菌株生长的营养成分均可以影响乳酸菌发酵中CLA 的产生。应用气相色谱检测出乳酸菌培养液中CLA 的其它异构体。     

生物转化共轭亚油酸乳杆菌的筛选

以选定的乳杆菌为对象,系统性地探究其生物转化共轭亚油酸(CLA)的规律,并筛选得到高产菌株。首先用酶标仪快速检测法,对5个种属76株乳杆菌生物转化CLA的能力进行了分析,然后利用GC-MS进一步分析高产菌株生物转化CLA产物异构体组成。结果显示:植物乳杆菌大部分可生物转化CLA,但菌株间转化能力存在较大差异;副干酪乳杆菌、干酪乳杆菌和卷曲乳杆菌普遍具备生物转化CLA的能力,但转化能力不高;唾液乳杆菌普遍不具备生物转化CLA的能力。筛选得到3株高产菌株,其中植物乳杆菌CCFM241 CLA的转化能力最高,CLA转化率为16.35%,转化产物存在3种CLA异构体,以t9,t11-CLA为主。     

白地酶脂肪酶选择性酯化分离CLA异构体的研究

本文研究共轭亚油酸异构体的分离方法。利用白地霉脂肪酶(Geotrichumcandidumlipase,GCL)催化合成正丁酯的方法,考察温度、体系水分、酶用量、反应时间、底物配比对脂肪酶催化酯化率和脂肪酸丁酯中c9t11含量的影响。结果表明,经过酯化的脂肪酸丁酯层中c9t11CLA含量达到79.85%,t10c12CLA含量为4.59%;含有13.75%的油酸;c9t11CLA占共轭亚油酸两种异构体总含量的94.56%。形成c9t11CLA正丁醇酯的选择性系数平均为17.80。脂肪酸与正丁醇比例对脂肪酸酯中c9t11CLA含量具有显著性影响,在选取的范围内水分含量、酶用量的影响不显著。要得到较高c9t11CLA含量的脂肪酸产物,反应因子应选择:水分为0.50%,脂肪酸与正丁醇用量比为2.00∶1.00,酶用量为100U/g。白地霉脂肪酶对催化c9t11共轭亚油酸与正丁醇的酯化反应具有较高的选择性,因此,脂肪酶选择性酯化分离CLA异构体的方法是可行的。     

优化乳杆菌高产共轭亚油酸的研究进展

共轭亚油酸(CLA)是亚油酸(LA)的一组位置和空间异构体的总称,其中具有生理活性的异构体是c9,t11-CLA和t10,c12-CLA,它们具有丰富的营养价值和医药价值。在乳球菌属和链球菌属等乳酸菌、丙酸杆菌、瘤胃细菌以及其它菌属中,分离纯化得到的亚油酸异构酶,可催化LA异构化为CLA,利用酶法合成CLA可以有效弥补传统化学合成法的缺陷。本文概述了近年来国内外利用紫外、微波、等离子体诱变、离子注入等物理或化学方法诱变、改造亚油酸异构酶,优化产酶条件和酶学特性,还阐述利用定点突变、基因敲除等基因工程方法,对生产菌株进行改造和培养条件优化,提高CLA产量的相关研究,为进一步筛选出高产共轭亚油酸菌株和CLA的产业化应用提供理论依据。     

乳酸菌制备CLA的研究

我们利用从酸菜汁中分离出的一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarumL18转化亚油酸(LA)来制备共轭亚油酸(CLA)。在MRS培养基中添加0.06%(wt/vol)的LA作为诱导剂,获得制备CLA的洗涤细胞。以游离LA为底物,植物乳杆菌Lactobacillus plantarumL18的洗涤细胞为催化剂,厌氧环境有利于生成CLA。0.1M的磷酸钠缓冲液、pH7.0、LA浓度2%(wt/vol)、细胞浓度为20%(wt/vol)、30℃,反应64h,CLA的产量最高。反应液中生成的CLA产物为c9,t11/t9,c11-CLA和t10,c12-CLA异构体的混合物。     

油酸和亚油酸异构体的气相色谱-质谱分析

采用气相色谱-质谱法分析油酸和亚油酸异构体的出峰顺序和质谱特征,结果表明:脂肪酸在强极性毛细管柱BPX-70(120 m×0.25 mm×0.25μm)上的出峰顺序具有一定规律。油酸和亚油酸异构体中,出峰顺序依次为C_(18:1 6t)、C_(18:19t)、C_(18:1 11t)、C_(18:1 9c)、C_(18:1 11c)和C_(18:2 9t,12t)、C_(18:2 9c,12t)、C_(18:2 9t,12c)、C_(18:2 9c,12c)。根据断裂规律和质谱特征分析,油酸甲酯的特征离子为m/z 55(基峰离子)、222([M-74]~+)、264([M-32]~+)和296(M~+),而亚油酸甲酯的特征离子为m/z67(基峰离子)、220([M-74]~+)、263([M-31]~+)和294(M~+)。油酸和亚油酸的异构体分别具有相同的特征离子,且质谱图极为相近,说明不能通过特征离子和质谱图判断油酸和亚油酸异构体中的双键位置和顺反构象。     

产共轭亚油酸乳酸菌的筛选及体外特性评价

从117株泡菜和婴儿粪便源中筛选高产共轭亚油酸(CLA)的乳酸菌,对其进行功能性和安全性评价。采用紫外分光光度法初筛得到27株CLA转化率大于8%的菌株,通过GC-Q-TOFMS验证其CLA异构体组成,最终获得8株CLA转化率在10%以上,同时发酵液中c9,t11-CLA、t10,c12-CLA异构体质量浓度高于20 μg/mL乳酸菌。对这8株菌进行自凝集、疏水性、黏附性能、胃肠道耐受能力、抑菌活性、安全性等体外特性评价。结果表明,植物乳杆菌NCU001044、NCU006007整体表现优异,自凝集率皆大于60%,具有中度疏水能力,且黏附率分别为8.81%,9.10%。两株菌在pH 2.5酸性条件下存活率分别为95.68%,84.63%,在质量分数为0.3%的胆盐中存活率均高于65%。安全性方面,两株菌对青霉素、苄卡西林、四环素、红霉素中性敏感或敏感,无溶血活性。本研究筛选到具有高效生物转化有益CLA异构体能力的植物乳杆菌2株,这2株菌具有良好的胃肠道定植能力,以及酸、胆盐耐受力,对致病菌表现出较高的抑制作用,可进一步投入发酵产品及功能性微生态制剂的开发。     

产共轭亚油酸植物乳杆菌的筛选、鉴定与诱变

从传统泡菜中筛选得到1 株乳酸菌lp15 能够合成共轭亚油酸(CLA),经16S rRNA 全序列分析法和API 系统鉴定法鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。利用人工诱变方法,以lp15 为出发菌株,采用紫外线、硫酸二乙酯(DES)依次诱变处理,经进一步液体发酵复筛获得多株突变菌株,CLA合成能力较出发菌株提高了29.3%～52.2%。其中lp15-2-1 突变菌株为CLA 生成能力最高菌株,MRS 培养液中添加0.2mg/mL LA 培养48h,CLA 产量达30.13μg/mL。经气相色谱(GC)检测分析,产物中cis9, trans11- 共轭亚油酸(c9, t11-CLA)占76.5%,trans10, cis12-共轭亚油酸(t10,c12-CLA)占23.5%。     

共轭亚油酸两种主要异构体冷冻结晶分离工艺研究

应用冷冻结晶技术,对共轭亚油酸两种主要异构体c9,t11 CLA和t10,c12 CLA进行分离。结果表明,通过尿素包合法,去除原料中的饱和脂肪酸,然后在乙醇作溶剂情况下,将乙醇与共轭亚油酸乙酯按18:1配比,置于-56℃低温冷柜中,反应96 h后得沉淀结晶产品,其所含的t10,c12 CLA比c9,t11 CLA高达12.28:1,共轭亚油酸总含量为95.17%。     

微生物催化制备功能性油脂——共轭亚油酸的研究

从酸菜中分离出的一株植物乳杆菌Lactobacillus plantarum诱导培养，在氮气保护下利用休止细胞催化制备共轭亚油酸。0．1M磷酸钠缓冲液、pH值7．0、亚油酸浓度2％（w／v）、细胞浓度20％（w／v）、30℃。反应64h，共轭亚油酸产量最高。c9，t11／t9，c11—CLA异构体在产物脂肪酸中的比例为30％。