基于微滴式数字聚合酶链式反应技术的肉制品中鸭源性成分的定量检测

为实现肉制品中鸭源性成分的定量检测,基于微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)技术,以鸭生长激素(growth hormone,GH)基因为靶基因,建立肉制品中鸭源性成分的定量检测方法.结果表明:所建立的ddPCR方法能特异性检测鸭源性...     

聚合酶链式反应快速检测畜肉食品中鸭源性成分

目的：建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法：以鸭细胞色素C氧化酶Ⅲ（COⅢ ）基因序列为靶位点设计引物,进行聚合酶链式反应扩增,建立鸭源性成分检测方法;以常见畜禽肉,包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种进行特异性检测;以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液,对鸭肉DNA进行梯度稀释,检测灵敏度。结果：该方法能够有效的对鸭源性成分进行快速检测,具有较强的特异性,灵敏度较高（0.1 μg/kg）,且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响,可以快速、准确检测畜肉食品中掺杂的鸭源性成分。     

MIRA-LFD鉴别肉制品中鸭源性成分的方法研究

传统的肉制品动物源性成分检测对检测人员操作水平及试验条件等方面要求较高,不适于基层检测需要。多酶恒温快速扩增技术（multienzyme isothermal rapid amplification,MIRA）是一种新型的核酸扩增方式,整个反应在37℃条件下即可完成,相比昂贵的聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）仪器,检测成本以及试验条件要求明显降低。该研究通过结合多酶恒温快速扩增技术与侧向流层析技术（lateral flow dipstick,LFD）,建立一种鸭源性成分多酶恒温侧流式扩增技术（MIRA-LFD）的快速检测方法,并对其特异性、检出性以及应用的可行性进行评价。     

肉制品中鸭源性成分TaqMan探针实时荧光PCR检测方法的建立与应用

目的 建立TaqMan探针实时荧光PCR法快速检测肉制品中鸭源性成分的分析方法.方法 以鸭生长激素(growth hormone,GH)基因为靶基因,基于特异性保守序列设计引物和TaqMan探针,优化反应体系和反应条件,建立了鸭源性成分实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法.结果 所建立的real-tim...     

肉制品中鸭源性成分的实时荧光PCR检测

目的：建立基于实时荧光PCR技术的鸭源性成分的快速检测方法。方法：以鸭线粒体DNA序列为目的基因,设计并筛选了鸭源性特异性引物及探针,进行荧光定量PCR扩增,建立鸭源性成分检测方法。通过特异性、灵敏性、及盲样检测试验,对该体系进行验证。结果：该方法能够快速有效的检测鸭源性成分,具有较强的特异性及灵敏性,灵敏度约为0．01％（质量分数）;通过市售盲样肉制品的检测,表明该体系可用于定性检测加工肉制品中的鸭源性成分。结论：该方法特异性强,灵敏度高,可用于对肉制品中鸭源性成分的掺假鉴别。     

基于锁式探针的荧光定量PCR技术快速检测肉制品中鸭源性成分

[目的]肉类掺假是食品行业面临的严峻挑战,其中羊肉和牛肉用鸭肉掺假较为常见。本研究主要目的是为检测掺假肉制品中的鸭源性成分提供一个新的检测方法。[方法]本研究根据鸭线粒体基因组16s rDNA中的特异性序列设计鸭源锁式探针和扩增引物,并结合荧光定量PCR技术,建立肉制品中鸭源性成分检测的新方法。[结果]基于锁式探针的荧光定量PCR技术检测肉制品中鸭源性成分的检测灵敏度达到70fg·μL~(-1)。[结论]本研究建立的基于锁式探针的荧光定量PCR检测鸭源性成分方法检测特异性强,灵敏度高,为肉类掺假鉴定提供了新的技术手段。     

荧光定量PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的 建立一种快速、特异、灵敏的鸭源性成分检测方法。方法 本研究以鸭线粒体基因全序列为靶位点设计引物和探针, 进行荧光定量PCR扩增, 建立鸭源性成分检测方法; 以常见畜禽肉包括羊肉、牛肉、鸡肉、鹅肉、猪肉、兔肉、马肉、鹿肉等参考动物物种作特异性检测; 以50 mg/kg羊肉DNA作为稀释液对鸭肉DNA进行梯度稀释, 做灵敏度检测。结果 该方法能够有效对鸭源性成分进行快速检测, 具有较强的特异性, 灵敏度较高(可达0.1 μg/kg)并且羊肉成分的存在对鸭肉灵敏度检测没有影响。结论 该方法特异性强, 灵敏度高, 可以快速、准确检测畜肉食品中含有的鸭源性成分。     

微滴数字PCR方法检测畜肉食品中鸭源性成分

目的利用微滴数字PCR技术,建立鸭源性成分的快速、特异、灵敏检测方法。方法根据鸭线粒体基因全序列设计的引物及探针,利用微滴数字PCR进行扩增,建立鸭源性成分检测方法;以市场中常见畜禽肉为参考物种作微滴数字PCR特异性检测;以羊肉为干扰物观察微滴数字PCR的抗干扰性;将鸭肉DNA进行梯度稀释,对方法灵敏度进行检测。结果该方法能够有效对鸭源性成分进行检测,特异性强,灵敏度高,并且其他物种成分的存在对方法灵敏度检测没有影响。结论该方法特异性强,灵敏度高,可以实现畜肉食品中的鸭源性成分检测。     

基于实时荧光聚合酶链式反应技术定量检测肉制品中动物源性成分研究进展

实时荧光聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction,RT-PCR）技术灵敏度高、特异性强,广泛用于肉制品中动物源性成分的定性、定量分析。已有多种基于RT-PCR技术的分析策略用于实现肉制品中动物源性成分的定量检测,已报道的定量分析策略各有优势及缺陷,目前尚无可推广的国家标准方法发布。本文针对采用RT-PCR技术对肉制品中动物源性成分定量检测的分析策略及其中的关键因素（结果表示形式、靶基因、DNA提取效率、DNA降解、扩增效率、标准物质、物种基因组大小）进行综述分析,为建立最优定量分析模型提供思路,期望找到操作简便、成本较低、可推广实施的定量分析策略,实现对肉制品中动物源性成分进行准确定量检测,促进国家标准检测方法的制定。     

实时荧光聚合酶链式反应检测肉制品中的鸭源性成分

通过鸭的肌动蛋白β-actin保守基因设计可特异检测鸭肉成分的引物和探针,建立实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）技术检测鸭肉的方法,并通过模拟肉样和市售样品检测方法的准确性和适用性。结果表明：该方法可以特异性检测出麻鸭和草鸭成分,而对猪、牛、羊、鸡等DNA均没有扩增,检测灵敏度可达到1 pg DNA;通过模拟肉样检测确定最低质量分数检测限为0.01%;市售样品的检测结果表明,该方法能很好地应用于市场,满足市场检测需求。     

基于荧光定量PCR鉴定冷鲜肉制品中羊源性成分及其含量

建立一种快速、准确鉴定羊肉制品中羊源性成分并且量化羊肉成分含量的方法。以羊线粒体细胞色素b基因为靶基因,设计出具有特异性引物。选择真核生物核糖体16S rDNA为内参基因,采用实时荧光相对定量法。羊肉质量百分比的对数值与之对应的循环阈值差值ΔCt呈良好线性关系。标准曲线回归公式为y=-3.4057x-0.3112,R²=0.9916,扩增效率达E达96.62%。本试验中羊源性DNA检测限可达16 pg/μL,回收率在93.07%~106.20%。抽取8份市售羊肉制品进行检测,有3份含量低于50%。本试验中建立的实时荧光PCR检测方法操作方便、特异性强、灵敏度高,所得数据可靠,为肉制品羊源性成分检测提供了参考方法。     

基于基因检测方法快速鉴别不同种类畜肉

本研究以牛、羊、猪、狗、马5种畜肉为研究对象,建立基因快速检测方法。针对牛、羊、猪、狗、马线粒体基因筛选特异性引物,优化各畜种检测条件。利用特异性引物扩增各畜种DNA,制备重组质粒测序,建立常见肉及肉制品快速检测模型。结果表明,此方法成功实现了5种畜肉在30 min内同时快速检测,各畜种核酸引物特异性强,与其它物种无交叉反应发生。重组质粒测序结果与靶基因序列比对,同源性达100%。畜肉基因最低检测限为5×10^-7 μg,表明该快速检测方法特异性强、灵敏度高,可同时检测多个畜肉样品,完全适用于熟肉样品的检测,为快速鉴别牛、羊、猪、狗、马多畜种畜肉提供依据,并为以快速鉴别不同畜种为前提开展的研究提供理论参考。     

传统肉制品板鸭的研究现状

板鸭是中国传统腌腊肉制品的典型代表之一。本文在总结前人工作的基础上,从理论研究现状以及现代化改良技术等内容对有关板鸭的研究进行了综述,以期为进一步发展板鸭产业奠定一定的基础。     

肉及肉制品中牦牛源性成分的PCR鉴别

通过牦牛与其他常见物种的细胞色素b基因序列进行比对,设计牦牛的特异性引物,并进行聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)体系中不同条件、参数的考察,建立肉及肉制品中牦牛源性检测的PCR方法。该方法具有较好的专属性,建立的PCR体系仅对牦牛源性有扩增现象,而对其他物种无扩增,且对牦牛源性的检出限可达到1%。能够满足检验机构或生产企业对肉及肉制品中牦牛源性的检测需求。     

中国传统名优熟肉制品——北京烤鸭

介绍了北京烤鸭的历史沿革和加工制作方法.     

实时荧光定量PCR鉴定肉制品中牛源性成分及其含量

建立一种快速、准确鉴定牛肉制品中牛源性成分并且量化牛肉成分含量的方法。以牛线粒体细胞色素b基因为靶基因,设计出具有特异性引物。选择真核生物核糖体16SrDNA为内参基因,采用实时荧光相对定量法。牛肉质量百分比的对数值与之对应的循环阈值差值△Ct呈良好线性关系。标准曲线回归公式为y=-3.3645x+0.8737,R2=0.9926,扩增效率达98.25%。通过模拟混合样品对标准曲线进行质量评估,证明该方法适用于对牛肉成分的鉴定以及含量的检测,为量化肉制品中牛肉成分研究提供参考意见。     

鸭肉蛋白源抗氧化肽的酶法制备工艺

以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为指标,采用响应曲面法（response surface methodology,RSM）优化胃蛋白酶制备鸭肉抗氧化肽的最佳酶解工艺条件。结果表明：以底物质量浓度、酶与底物质量比和酶解时间为自变量,以DPPH自由基清除率为响应值,得到的回归方程拟合度高（R2=0.995 7,R2Adj=0.992 7）。其中酶与底物质量比对DPPH自由基清除率的影响最大,其次是酶解时间,底物质量浓度的影响最小。胃蛋白酶的最优酶解工艺条件为底物质量浓度10.89 g/100 mL、酶与底物质量比0.013%、酶解时间3.54 h,此时DPPH自由基清除率的理论值可达84.23%,通过优化验证实验测得,在最优酶解条件下,DPPH自由基清除率的实际值为（83.57±0.20）%。     

肉制品中鸡肉源成分的Proofman-LMTIA方法检测

为建立一种梯型熔解温度等温扩增技术（ladder-shape melting temperature isothermal amplification,LMTIA）结合Proofman 探针（proofreading enzyme-mediated probe cleavage）检测肉制品中的鸡肉,选取鸡细胞核中单拷贝且特异性强的prolactin receptor 基因为靶基因,设计LMTIA 引物和Proofman 探针,优化Proofman-LMTIA 反应体系,进行特异性、灵敏度和最低检测限测定。结果表明,Proofman-LMTIA 方法特异性强,可在30 min 内完成检测,检测灵敏度为1 ng/μL,对人工模拟的混合肉样的最低检测限为0.1%。该方法适用于基层单位对肉制品掺假进行快速检测。     

可视化核酸试纸条法快速检测肉及肉制品中鸭源成分

建立肉及肉制品中鸭源成分快速检测的可视化核酸试纸条法。设计鸭特异性引物,建立鸭成分检测可视化核酸试纸条方法,验证方法的特异性与灵敏度,并对市售肉及肉制品进行检测。该方法检测灵敏度0.1%,能够从鸭肉样品扩增出291 bp特异性DNA片段,而鸡、鹌鹑、猪、马、牛、羊、驴、鹿、骆驼、胡萝卜、白菜等动植物样品无扩增条带。建立的鸭源成分检测可视化核酸试纸条法特异性好,灵敏度高,简便,快速,是鸭源成分检测的有效方法。