多重PCR鉴定动物源空肠弯曲菌和结肠弯曲菌方法的建立

建立鉴定空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的多重PCR(mPCR)方法。方法 分别以16S rRNA、马尿酸酶和16S-23S rRNA基因为靶序列设计特异性引物,建立多重PCR方法检测37株菌株样品,同时采用ⁱⁿgene CAM nested PCR检测试剂盒检测验证,进行结果比较分析。结果 该多重PCR方法可扩增出空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的特异性条带,其他对照菌株均未扩增出条带,具有较好的特异性;检测敏感性可达0.81pg/μl空肠弯曲菌DNA,0.93pg/μl结肠弯曲菌DNA。多重PCR方法和试剂盒检测结果的符合率为100%,二者与国标GB/T 4789.9—2008方法的符合率达97%以上。结论 本试验建立的多重PCR方法操作快速方便、节约试验成本,具有较好的特异性、敏感性和重复性,可用于弯曲菌的鉴定。     

Fla-DGGE法对食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检测和分型

本文应用鞭毛蛋白基因flaA和flaB的变性梯度凝胶电脉(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)方法对食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌进行检测和分型。采用RBB(rpeated bead beating)、CTAB和丙酮-氯仿抽提三种方法提取样品基因组后进行fla-DGGE检测,结果完全一致。10份生鲜鸡、鸭肉样品中有8份含有空肠弯曲菌或结肠弯曲菌,其中3份含有两种或两种以上的空肠弯曲菌或结肠弯曲菌或它们的不同型别。克隆测序后结果表明,有7份样品被同一种空肠弯曲菌所污染,其中3份样品还被同一种结肠弯曲菌所污染,1份样品被污染情况严重,检测到含有一种结肠弯曲菌和三种空肠弯曲菌。Fla-DGGE方法快速、准确、灵敏度高,可用于食品中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的快速检测和分型。     

辽宁省鸡源空肠弯曲菌耐药性监测与分析

目的了解辽宁省内鸡源空肠弯曲杆菌耐药性情况。方法采用特异性选择培养基分离出空肠弯曲菌,并使用生化反应和分子生物学方法双重方法进行鉴定,并进行耐药性分析。结果采集的辽宁省某屠宰场的鸡盲肠共198份样品,分离鉴定得到60株空肠弯曲菌,分离率为30.3%。同时对60株空肠弯曲菌进行了药物敏感性检测。结论 60株空肠弯曲菌几乎均对红霉素、庆大霉素、克林霉素和萘啶酸耐药,其MIC90值均高于所测试的最高药物浓度。空肠弯曲杆菌氟苯尼考和泰利霉素的敏感性最强。     

醋酸菌的分离纯化及初步鉴定

以腐烂的水果为材料,通过富集、分离纯化、产酸鉴定、初筛、复筛、菌属鉴定等得到4株产酸较高菌株(8,13,15,16).对这4株优势菌株的形态、培养特征、生理生化特性的分析,鉴定为醋酸杆菌属.并且对上述产酸高菌株进行氧化乙醇能力试验,得出菌株在酒精含量为7％时产酸量最高.     

徐州市禽源弯曲菌的分离鉴定及耐药性分析

目的 了解徐州市市售禽肉中弯曲菌的污染状况及对抗生素的耐药情况。方法 随机采集农贸市场及超市新鲜或冷冻禽肉72份,采用滤膜法分离培养鉴定弯曲菌;采用琼脂稀释法测定分离出的菌株对6类11种抗生素的耐药性。结果 72份样品中共检出29份弯曲菌,总检出率为40.28%（29/72）,空肠弯曲菌和结肠弯曲菌检出率分别为19.44%（14/72）和20.83%（15/72）;新鲜禽肉和冷冻禽肉检出率分别为68.72%（22/32）和17.5%（7/40）,差异有统计学意义（χ2=19.412,P<0.05）,空肠弯曲菌在新鲜禽肉和冷冻禽肉中检出率分别为34.38%（11/32）和7.5%（3/40）差异有统计学意义（χ2=8.198,P<0.05）,结肠弯曲菌在新鲜禽肉和冷冻禽肉中检出率分别为34.38%（11/32）和10%（4/40）差异有统计学意义（χ2=6.404,P<0.05）;空肠弯曲菌耐药较高的五种抗生素为：萘啶酸100.00%(14/14)、环丙沙星100.00%(14/14)、四环素100.00%(14/14)、 氟苯尼考64.29%(9/14) ,庆大霉素28.57%(4/12);结肠弯曲菌耐药较高的五种抗生素为：萘啶酸100.00%(15/15)、环丙沙星100.00%(15/15)、四环素100.00%(15/15)、链霉素86.67%(13/15),庆大霉素80%(12/15) ;两种弯曲菌的多重耐药性均为100.00%。结论 徐州市市售禽肉中弯曲菌污染率较高,其中新鲜禽肉较冷冻禽肉中检出率高,徐州地区弯曲菌耐药情况严重     

空肠弯曲菌定量检测方法的建立和优化

目的 建立一种空肠弯曲菌定量检测方法,为食品安全风险评估提供准确的数据支持。方法 参照ISO/TS 10272—3和GB/T 4789.9—2008,基于MPN原理建立空肠弯曲菌定量检测方法,对定量加标的生鸡肉和鸡粪样品进行不同增菌培养基、不同培养环境和不同培养方式优化比对研究,用加标回收试验对建立的方法进行验证。结果 增菌培养基的优化选择:Preston肉汤对加标菌量10cfu/g的生鸡肉和鸡粪样品进行空肠弯曲菌检测的平均值分别为12.26和10.96MPN/g,Bolton肉汤检测的平均值分别为2.38和2.32MPN/g,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05);微需氧环境的优化选择:用三气培养箱法、产气袋法、抽气换气法和烛缸法对加标生鸡肉和鸡粪中的空肠弯曲菌检测的平均值分别为12.26和12.12MPN/g、12.26和10.96MPN/g、12.26和12.86MPN/g、10.82和12.12MPN/g,和三气培养箱法两两相比差异无统计学意义(P＞0.05);培养方式:静止培养法对加标生鸡肉和鸡粪空肠弯曲菌的检测值分别为15.8和15.2MPN/g,振荡培养法检测值分别为11.36和8.72MPN/g,二者比较差异有统计学意义(P＜0.05);用该法对低、中、高浓度加标生鸡肉样品的回收率分别为115.25%、111.5%和95.0%。结论 此方法可以对高污染样品中空肠弯曲菌进行准确定量,特异度高,值得推广应用。     

空肠弯曲菌与食品

近几年来空肠弯曲菌(Campylahacterjej－uni)已被世界各国公认为是引起人类急性腹泻,特别是婴儿腹泻的重要病原菌。空肠弯曲菌可以多种方式从动物宿主传播给人,也可通过直接接触污染的动物宰体传播。但是,更多的是通过摄入污染的食物或水而间接传播的,...     

辽宁省市售生禽肉食品中空肠弯曲菌毒力基因的鉴定

目的 通过对辽宁省生禽肉中空肠弯曲菌的污染状况进行调查,了解其生禽肉中空肠弯曲菌的毒力基因携带特点.方法 按照GB 4789.9—2014《食品安全国家标准食品微生物学检验空肠弯曲菌检验》及采用PCR扩增技术和哥伦比亚血平板检测的方法,对2018—2020年采自辽宁省14个监测点收集的335份生禽肉进行空肠弯曲菌的检测...     

小曲中霉菌的分离纯化鉴定

小曲中的微生物主要有霉菌、酵母以及少量的细菌，在小曲上能看到的菌丝基本上都属于霉菌。以广东省九江酒厂有限公司提供的小曲为出发菌，采用土豆汁培养基进行纯培养，选取长有24个单菌落的平板进行分离纯化。制成纯培养菌。通过菌落特征、形态、制片标本和生理生化试验对纯培养菌进行鉴定。共分离出根霉菌株9株，经鉴定。其中根霉属4株。毛霉属1株，曲霉属3株。青霉属1株。(小雨)     

基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法快速鉴定餐饮食品中的空肠弯曲菌

目的建立基质辅助激光解析电离-飞行质谱法(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)快速鉴定餐饮食品中空肠弯曲菌的方法。方法从餐饮样品中分离的疑似空肠弯曲菌经不同配比的基质液处理后进行质谱鉴定,通过分析鉴定概率值及其特征峰的信号强度来评价不同配比基质液对空肠弯曲菌鉴定的影响,并与16S rRNA鉴定结果进行比较。结果通过16S rRNA与MALDI-TOF-MS 2种鉴定结果一致,获得MALDI-TOF-MS鉴定空肠弯曲菌的最佳质谱基质液配比V_(乙醇):V_(乙腈):V_水=1:1.5:1,2.5%α-氰-4-羟基肉桂酸,5.0%三氟乙酸,鉴定概率值达99.9%。结论致病菌的前处理与优化基质液配比可以提高基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱鉴定的概率值。     

空肠和结肠弯曲菌鞭毛蛋白基因fla A的检测

目的 运用一种快速、敏感、特异的检测空肠和结肠弯曲菌的方法.方法 以空肠和结肠弯曲菌所共有特异的鞭毛蛋白基因 fla A的一段高度保守序列为引物,用PCR法扩增fla A基因上的一段约1 700 bp的片断.用该引物对空肠和结肠弯曲菌的标准株、福建省的食品分离株进行PER扩增检测,并同时检测该PCR方法的敏感性.结果 扩增片断表现出极好的特异性,2株空肠和结肠弯曲菌标准菌株、8株分离自不同食品样品的空肠穹曲菌和结肠弯曲菌菌株均为阳性,且敏感性实验显示该PCR方法的反应体系最低检出菌量为6 CFU.结论 该方法快速、敏感、特异,可用于突发性食物中毒和暴发感染的调查.     

东北市售鸡肉中空肠弯曲杆菌的分离鉴定、分型及耐药性分析

为了揭示东北地区市售鸡肉中空肠弯曲杆菌的污染情况、种群特征及耐药性。采集东北地区市售鸡肉样品1 000份,分离鉴定空肠弯曲杆菌。通过多位点序列分型技术分析空肠弯曲杆菌的遗传多样性。利用K-B琼脂扩散法检测该致病菌对8种抗生素的耐药性。结果表明:1 000份样品中共分离出62株空肠弯曲杆菌,污染率为6.2%;62株空肠弯曲杆菌被分为14个序列型(Sequence Type,ST),其中ST5和ST1为该种群的优势ST;耐药性分析结果显示,62株空肠弯曲菌对环丙沙星、复方新诺明和头孢噻肟具有高度的敏感性。     

红曲霉分离纯化、分类和鉴定研究进展

红曲霉是一类小型丝状腐生真菌,其代谢产物在食品、药品领域应用广泛。为更好地挖掘红曲霉种质资源,需要大量获得红曲霉菌株并对其进行分类和鉴定。该文介绍了可培养的红曲霉分离纯化方法,并分析其优缺点和应用示例;列举了目前红曲霉的分类概况,从形态分类、美国国家生物技术信息中心（NCBI）物种分类和国际公开报道提及之分类这三个方面来对比分析其认可度;简述了形态学鉴定、同工酶分析、脱氧核糖核酸（DNA）标记技术三种常见的红曲霉鉴定方法;提出了潜在的分离纯化和分类鉴定方法。旨在为高效获得红曲霉、明确菌种信息等工作提供参考。     

Analysis of Campylobacter spp. contamination in broilers from the farm to the final meat cuts by using restriction fragment length polymorphism of the polymerase chain reaction products

We investigated the genotype diversity and dynamics of Campylobacter jejuni and Campylobacter coli in six commercial broiler farms during rearing and abattoir processing. In total, 223 C. jejuni and 36 C. coli strains isolated (on farm, transportation crates, carcasses after defeathering, and chicken wing meat at the end of the processing line) were subtyped by PCR-RFLP based on flagellin (fla typing) gene. Eleven (C. jejuni) and four (C. coli) different RFLP patterns were found. Multiple C. jejuni genotypes were identified in five out of six farms (except Farm 5). Furthermore, a clear tendency for dominance of particular genotypes was observed in almost all farms except Farm 3. Although diverse C. jejuni genotypes were isolated on the farms and transport crates, they were not detected in chicken wing cuts at the end of the processing line. We also observed varied distribution of types in different sampling stages both at the farm level and the processing environment. However, the interpretation of such fluctuations is precarious as new types occurred on some occasions, particularly during processing. Our results show that chicken wing meat contamination resulted mainly from farm strain carryover, and that the carcasses were probably contaminated during processing. In addition, the new strain types observed were isolated more frequently after defeathering as compared to other processing steps. Therefore, this stage, in addition to evisceration, is one of the critical control points in the processing line to prevent cross-contamination and for controlling the spread of campylobacters.     

福建省2003-2005年食品中空肠和结肠弯曲菌的监测与分析

目的系统分析福建省食品中空肠和结肠弯曲菌的污染现状、分布特征,建立和完善食源性致病菌监测网络,为制定相关的食品卫生干预措施提供可靠的基础数据。方法2003-2005年选择福建省的8个地级市和南北2个贫困县的农贸市场为监测点,采集生畜禽肉类、生牛奶、生食蔬菜、鸡蛋、水产品5大类共730份食品样品。按照WHO推荐并作为《全国食品污染物监测相关实验室操作手册(食源性致病菌部分)》的弯曲菌检验方法,用加有生长促进剂和特定配方抗生素的布氏肉汤增菌,将增菌液划线接种至弯曲菌选择性琼脂CCDA平板,挑取可疑菌落转种在哥伦比亚血琼脂平板上纯化。纯化的可疑菌落做革兰染色镜检,湿片观察动力,同时做过氧化氢酶试验、氧化酶试验、马尿酸盐水解试验、吲哚乙酸酯试验等生化鉴定。结果检出弯曲菌阳性的样品39件,总的阳性率为5·34%。分离到空肠和结肠弯曲菌47株,其中空肠弯曲菌34株、结肠弯曲菌13株。不同种类的食品阳性率不同,阳性率最高的为生肉6·72%(36/536),其次为生食蔬菜5·88%(2/34),水产品0·95%(1/105),生牛奶与鸡蛋中均未检出。生肉类中阳性率最高的为鸡肉7·31%(19/260)。结论福建省市售食品中存在着不同程度的弯曲菌污染,应加强食品中空肠和结肠弯曲菌的监测,加强禽畜养殖、屠宰、运输和加工过程的卫生管理,防止交叉污染,有效地预防和控制弯曲菌感染的暴发和流行。     

Resistance of Campylobacter jejuni Isolated from Layer Farms in Northern Jordan Using Microbroth Dilution and Disc Diffusion Techniques

Campylobacter jejuni is an important pathogen of significant public health importance. This pathogen is associated with human infection and has been isolated from mammals and birds. Ninety‐two cloacal C. jejuni isolates were identified from 35 layer farms in Northern Jordan. Antimicrobial susceptibility was determined using minimal inhibitory concentration (MIC) and disc diffusion techniques with variable suggested breakpoints. Using MIC and EUCAST cut‐off values, the study revealed a significantly high resistance level (100%) among the layers’ isolates against ciprofloxacin and tetracycline. A relatively high resistance (41%) toward gentamicin and amoxicillin and low resistance to nalidixic acid (21%), erythromycin (14%), and florfenicol (6.5%) were also found. This high level of resistance may indicate abuses in the handling of antibiotics, which may require stricter control in the local layer industry. A good agreement between the 2 techniques used was demonstrated and the disc diffusion technique could be used as a rapid screening test for antimicrobial susceptibility of C. jejuni to many antibiotics using specific Campylobacter breakpoints.     

蜂毒肽的分离纯化及结构鉴定

目的 对蜂毒肽进行分离纯化,并进行结构鉴定。方法 以意大利蜜蜂蜂毒为原料,经溶解、超声、浸提、过滤等,并制备C18液相色谱柱,对一次纯化采用的流动相、洗脱程序进行优化,对二次纯化时进样量、进样浓度进行选择,冻干后得到高纯度蜂毒肽。利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)和液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)进行分子量测定等定性研究,利用傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)进行二级结构表征,尝试利用低场核磁共振(nuclear magnetic resonance, NMR)技术对其氢谱定性解析,基于高效液相色谱法(high performance liquid chromatography, HPLC)的面积归一化法测定蜂毒肽纯度。结果...