中国妇女宫颈癌与人乳头瘤病毒关系的研究

人宫颈癌与人乳头瘤病毒(HPV)的关系是当前国际重视的研究课题之一。在我国有关研究鲜有报道。本文在国内五个地区(新疆、北京、湖北、黑龙江、贵州)共获得病理学确诊的人宫颈鳞状上皮癌318例,宫颈上皮内新生物(CIN)14例,宫颈及外阴湿疣48例,慢性宫颈炎34例及正常宫颈上皮组织24例。将上述组织提取DNA后,以~32P标记的HPV—11,16,18三型病毒DNA为探针与上述组织进行Dot Blot及Southern Blot核酸杂交。其中32例宫颈癌10例正常宫颈及27例宫颈及外阴湿疣还进行平行的电子显微镜对比研究。对于湿疣病例还进行了以酶标法代替H标记的原位核酸杂交的观察研究,结果表明:     

人宫颈癌与人乳头瘤病毒关系的基因

人宫颈癌与人乳头瘤病毒(HPV)的关系是当今国际重视的研究课题之一。在我国有关研究鲜有报道。本文在国内五个地区(新疆、北京、湖北、黑龙江,贵州)共获得经病理学确诊的人宫颈鳞状上皮癌318例,宫颈上皮内新生物(CIN)14例,宫颈及外阴湿疣48例,慢性宫颈类34例及正常宫颈上皮组织24例。将上述组织提取DNA后,以~(32)p标记的HPV-11,16,18三型病毒DNA为探针与上述组织进行核酸杂交,其中32例宫颈癌10例正常宫颈及27例宫颈及外阴湿疣还进行平行的电子显微镜对比研     

人宫颈癌与人乳头瘤病毒关系的超微结构与病毒基因分子检测的对比研究

1)经临床及病理诊断的136例官颈鳞癌;24例官颈炎;8例正常官颈鳞状上皮,取自三个不同地区——新疆,北京和湖北。从以上标本提取DNA供核酸杂交用。以32~P-dTTP进行标记的HPV-6B,11,16,18的质粒DNA作为探针,与上述宫颈癌,宫颈炎及正常宫颈上皮DNA进行斑点核酸杂交。部分进行Southern blot杂交和双向电泳。结果表明136例癌中76例的DNA中可检测到HPV-16 DNA的相关序列(56％),並有明显的地区差异——新疆的阳性率为82％(19/23),北京65.3％(32/49),湖北39％(25/64),八例正常宫颈均为阴性。Southern blot杂交及双向电泳表明病毒DNA整合入癌细胞基因之     

呼肠病毒与细胞凋亡

从SARS患者生前咽拭子和尸检肺组织分离病毒阳性的培养细胞超薄切片中,在电子显微镜下不仅发现了呼肠病毒,而且还查见具有超微结构形态特征的凋亡细胞。凋亡早期的感染细胞,其细胞核染色质浓缩、边集显著,胞浆内尚可查见病毒包涵体的残迹。多数凋亡细胞胞浆内未查见呼肠病毒及其包涵体。在早期,凋亡细胞胞核形状变化不大,核染色质呈不规则的边集、浓缩,或呈平台状。继而,凋亡细胞胞核形状高度不规则,染色质浓缩、致密,可见核孔残迹,但细胞轮廓尚保存完好,外周可查见含核质凋亡小体。到后期,凋亡细胞高度皱缩．核固缩并碎裂成细小的片块或颗粒,胞质稀少,胞体呈芽球状,细胞膜外围可查见大小不等、形状多样的含核质凋亡小体。此研究结果提示：与SARS相关呼肠病毒所诱导的细胞凋亡有可能在SARS的发病机制中起重要作用。     

真核细胞染色质结构的电镜观察以及ESI技术在分析染色质结构中的应用

在电镜下观察了大鼠肝细胞核和鸭红细胞核的核小体、30nm纤维和放射环等染色质结构。应用电子能量损失谱成像技术(ESI)对染色质中DNA的磷元素进行了分析,在现有实验条件下,我们可以探测到一个核小体内的300个左右的磷原子,从而显示了核小体内DNA的分布。     

基于DNA序列信息的核小体位点预测

核小体位点参与很多细胞活动并且在调控细胞进程中起重要作用,核小体位点的精确定位对生物医学和药物学有重大意义。该文结合机器学习算法和DNA序列信息建立一个新的核小体位点预测模型,目的是为了更快更精确地预测核小体位点。实验中使用K间隔核酸对组成特征和位置特异性核苷酸偏好特征将DNA序列进行编码,然后使用支持向量机对模型进行训练和分类预测。最后将该方法和目前主流的核小体位点预测模型在相同的数据集上做Jackknife测试,实验结果证明了该方法提高了核小体位点预测的正确率。     

人宫颈及外阴湿疣的病理及人乳头瘤病毒的形态发生学

1)经临床及病理诊断的十六例人生殖道湿疣标本(14例取自宫颈,2例取自外阴)在电镜下显示当人乳头瘤病毒(HPV)感染的早期,鳞状上皮的基底及副基底层明显增生,核大而圆,常染质色丰富并出现多量的“染色质之间颗粒”“染色质周围颗粒”及“核体(nuclear bodies)”,分裂像很多。这是产生乳头状或扁平“疣”的病理基础,在以往文献中未引起足够重视。2)细胞被HPV感染的早、中期,胞质及核内逐渐出现由电子致密度高的均匀基质组成的团块,呈圆或椭圆形,边缘大部清晰。这种致密基质团盐随病变的发展逐渐增大互相融合,形成胞质内核周巨大的基质     

小鼠肝细胞核凋亡的超微结构观察

用胡萝卜细胞胞浆制备的非细胞体系中 ,加入纯化的小鼠肝细胞核并以细胞色素 C诱导细胞核发生凋亡。在透射电子显微镜和扫描电子显微镜下都观察到凋亡的细胞核呈现典型的凋亡形态学特征 ,例如染色质的凝集及趋边化 ,细胞核表面形成空泡化结构并有大量的凋亡小体结构出现。在此基础上对凋亡小体结构在形成及排出核外的过程进行了详细的观察和分析。     

小鼠肝细胞核调亡的超微结构观察

用胡萝卜细胞胞浆制备的非细胞体系中,加入纯化的小鼠肝细胞核并以细胞色素C诱导细胞核发生调亡。在透射电子显微镜和扫描电子显微镜下都观察到凋亡的细胞核呈现典型的调亡形态学特征,例如染色质的凝集及趋边化,细胞核表面形成空泡化结构并有大量的凋亡小体结构出现。在此基础上对调亡小体结构在形成及排出核外的过程进行了详细的观察和分析。     

用光钳揭示DNA

康奈尔大学和麻省医学院的研究人员利用激光钳揭示了核小体中的DNA的解螺旋过程。该项研究表明,DNA在三个阶段得以释放供其他分子识别。     

低功率CO_2激光治疗扁平流疣32例报告

本文报告了低功率CO_2激光治疗32例扁平疣。治疗方法是用激光炭化疣体表面,形成结痂。术后创面12小时内保持干燥。32例中,一次治愈6例(18.7%),二次治愈18例(56.2%),三次治愈7例(21.2%)。激光可破坏病毒复制,使疣破坏、脱落。     

肝细胞HBV原位核酸杂交及电镜观察

电镜原位分子杂交技术,对病毒性疾病的诊断,肿瘤的基础研究及临床诊断以及核酸的细胞定位有重要意义。它是利用已知序列的DNA或RNA片段为探针,按碱基配对的原则去识别与之互补的靶DNA或RNA,形成DNA-DNA或DNA-RNA的杂交。通过生物素化的探针与胶金的络合物以及同位素化的探针显示结果,从而达到检测和分析的目的。该技术具有特异性强,灵敏度高,定位准确的特点。例如可利用已知的病毒癌基因及细胞中的癌基因,采用原位杂交的方法在电镜水平进行肿瘤学的研究。也可测定病毒基因的位置和特定基因在染色体上的定位。我们利用生物素化的HBV-DNA探针与胶金的络合物(HBV-DNA-G prob)对肿癌病人肝细胞内HBV进行了检测。     

一株正常人外周血带EB病毒的B淋巴细胞(H—18)的超微结构研究

H—18细胞系由我国一例正常人外周血分离出的B淋巴细胞培养成株。经免疫荧光及免疫酶标光镜检查发现该细胞EB病毒壳抗原(VCA)阳性,如用正丁酸钠及巴豆油等病毒激活剂处理后,大量细胞(30—40％)显示VCA阳性。分离出的病毒可使体外培养细胞转化。用正常H—18细胞为对照,经正丁酸钠(4mM/ml)及巴豆油(500ng/ml)处理H—18后12,24,36,48,72小时的标本用国产DXB 2—12电镜观察。发现正常H—18细胞超微结构与正常人B淋巴细胞有很大差别。大小不一,核很不规则,核比例大,且几全部由常染色质组成。为分化很差或为转化的淋巴细胞。个别细胞内可见EB病毒之核壳体及其形态发生过程,证明该细胞带有EB病毒并进行病毒的复制。经正丁酸钠及巴豆油处理后12小时,部分细胞可见病毒大量复制。随时间的延长逐步增多,至72小     

应用电镜放射自显影技术研究病毒DNA的复制及宿主细胞内RNA的转录

应用电镜放射自显影技术研究了鸭瘟病毒(DPV)DNA复制及宿主细胞内RNA的转录功能,并扼要报导了我们的主要实验结果: 1.DPV的DNA合成是在核内电子密度较低的均匀基质中进行的,随后,转移到电子致密的毒浆结构中装配病毒核壳体。从病毒DNA复制到发育成熟的病毒仅需3小时。 2.DPV的DNA复制的持续时间较长。病毒DNA的复制与核壳体的装配及病毒的成熟与释放可同时进行。 3.DPV在细胞核内装配,也可在细胞质内装配。 4.宿主细胞的核仁依然存在,并保持其转录RNA的功能。     

尖锐湿疣的超微结构和乳头瘤病毒抗原的检测

1986年6月至1987年12月,我科共做尖锐湿疣活组织检查80例。诊断根据病史,大体表现和组织学检查。光镜下每例均查见凹空细胞。(Koilocyte)30例作了人乳头瘤病毒抗原(HPV—Ag)检测,采用PAP免疫酶染色法(DAKO kit)。12例检测出HPV—Ag,阳性率40％。阳性细胞主要见于表层和棘层上部的凹空细胞,表现为细胞核内呈棕褐色颗粒,细胞浆内未见棕褐色颗粒。各例阳性细胞数量差异较大,阳性率与取材大小和数量有较大系系。HPV—Ag阳性的凹空细胞与HPV—Ag阴性的凹空细胞,光镜下形态无明显差异。15例取新鲜组织按电镜常规处理,制片,电镜下5例找到病毒颗粒,阳性率33.3％。均见于表层和棘层最上部细胞的核内。病毒颗粒呈球形,直径50-55nm,有致密核心和衣壳,无包膜,典型者排列呈结晶状图1。凹空细胞较大,核增大,核膜欠规则,一些细     

酵母和果蝇胚胎期核小体定位模式比较研究

在进行酵母与果蝇胚胎期核小体定位研究时,发现不同物种或同一物种中不同表达模式基因与全体基因的排列比较中,核小体分布呈现出差异性。我们观察到酵母全体基因中核小体排列对核小体缺失区域(NFR)的基因3’端比基因5’端的影响小,而果蝇中对两者的影响却是一样的。且酵母与果蝇胚胎期沉默型基因中NFR的两个边界之间的核小体排列都出现了相同规律。它揭示了核小体组织在基因组的整个进化过程中具有的前进性,同时也具有保守性。     

痘苗病毒复制与中间纤维的关系

痘苗病毒属于痘病毒科,是最大最复杂的一类动物病毒。其繁殖过程中最突出的特点是,病毒的DNA复制是在宿主细胞质内进行的。最近发现,在真核生物的细胞核中,有活性的DNA聚合酶不是沿DNA模板滑行,而是固定在核骨架上进行DNA复制。那么在细胞质内复制的痘苗病毒DNA是否也与某种细胞骨架成分相关?其复制方式是否也与核内DNA复制的模型相似?这不仅对于深入了解病毒DNA复制方式,而且对于了解细胞骨架的结构与功能都有重要的意义。     

基因工程重组人乳头瘤病毒亚基因致癌的分子生物学及超微结构研究

我们用基因分子生物学结合超微结构的方法在318例人宫颈癌标本中证明人乳头瘤病毒16型(HPV-16)与中国妇女宫颈癌的发生关系密切。它的亚基因片段,E_6-E_7早期基因可能是HPV-16的致癌基因。本文采用近年来开始发展起来的基因工程方法,将HPV-16的全部早期区基因及E_6-E_7基因分别重组至逆转录病毒(小鼠白血病病毒)的基因组中,将比重组的逆转录病毒导入培养细胞,在细胞中大量牛成并释放病毒颗粒到培养液中(此细胞称为重组病毒生成细胞)。借助重组病毒感染方式介导基因转移进行体外转化研究。采用重组逆转录病毒感染方式研究属于DNA病毒的HPV-16的致癌潜能,国内外尚未见报道。我们证明它是目前体外研究转化功能效率最高,最稳定的方法。     

应用电镜原位分子杂交技术对腺病毒DNA在宿主细胞内进行定位

以Biotin标记的dATP(Bio-7-dATP)通过缺刻翻译(Nick Translation)制备腺病毒的基因组探针,建立了电镜原位杂交技术,并研究腺病毒感染的HeLa细胞内病毒DNA的分布。结果表明,免疫胶体金颗粒特异地标记在腺病毒感染的细胞核内,并且在核内呈区域性分布。整装抽提后的细胞原位杂交结果显示出,胶体金颗粒呈族状马串珠状结合在核骨架上,从而在形态学上证实了腺病毒DNA与核骨架的紧密结合关系。     

传染性软疣病毒形态发生和发育过程的电镜观察

本文对１５例初形成的传染性软疣（ｍｏｌｌｕｓｃｕｍｃｏｎｔａｇｉｓｕｍＭＣ）组织进行了电镜观察。发现（１）传染性软疣病毒（ＭＣＶ）的形态发生分三个阶段：即细胞中央形成中等密度的丝粒状区——病毒前包涵体；随后在该区内出现高密度的细粒链状团块——病毒前基质；然后在该团块状物边部形成双层膜，该膜分割包围病毒前基质形成圆形的初期病毒颗粒。（２）ＭＣＶ的发育则有四个期：即初期、中期、成熟期和退变期。侧体不是ＭＣＶ的普遍结构，而是中期ＭＣＶ发育中形成的暂时结构。