日本血吸虫童虫早期诊断抗原模拟表位的初步筛选研究

目的:利用噬菌体随机12肽库技术筛选日本血吸虫感染早期诊断抗原。方法:用日本血吸虫感染后21d兔血清从噬菌体12肽库中经3轮筛选,有效地富集与早期感染兔血清有亲和力的噬菌体克隆。随机挑取11个单克隆分别纯化、扩增,随后采用ELISA、DOT-ELISA等检测方法,挑选出与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆。结果:挑选出3个与感染后21d兔血清具有高亲和力的噬菌体单克隆。结论:用感染后21d兔血清从噬菌体随机12肽库中能筛选到日本血吸虫童虫早期诊断抗原模拟表位。     

基于不同频率信号的多表位串户排查系统设计

近年来随着新建小区的增多,电能表串户现象时有发生,用户串户排查研究越来越引起重视。设计了基于不同频率信号的多表位串户排查系统,可在不断电、免入户的情况下智能排查多个户表关系,不影响用户的正常用电,由于无需入户,解决了传统串户排查过程中的入户难问题,降低了排查难度,提高了排查效率。     

鲤春病毒血症病毒Shlj1株糖蛋白空间结构及其B细胞抗原表位的预测

为预测鲤春病毒血症病毒(Spring Viremia of Carp Virus,SVCV)Shlj1株糖蛋白(Glycoprotein,G)的空间结构及B细胞抗原表位,采用RT-PCR法从接种SVCV的鲤上皮细胞悬液提取的病毒总RNA中扩增糖蛋白基因,并通过序列测定获得Shlj1株糖蛋白基因的核苷酸序列及氨基酸序列,利用Phyre2对Shlj1分离株的糖蛋白空间结构进行预测,使用DNAStar软件综合分析糖蛋白的柔性区域、亲水性、表面可能性和抗原指数参数。结果表明:获得的SVCV Shlj1株糖蛋白核苷酸序列长1527 bp,推导出其氨基酸序列为509aa;空间结构预测显示,SVCV Shlj1株糖蛋白存在一定数量的α-螺旋、β-折叠、β-转角及大量无规则卷曲结构,空间构象较规则;抗原指数及抗原表位指数分析显示,糖蛋白中存在许多抗原指数较高的区域,该区域平均抗原指数为1.025,最大值达1.250,其中5个区域(4~26、145~157、293~302、315~327、407~491氨基酸区段)可能是B细胞抗原表位的主要分布区域。本研究结果为SVCV糖蛋白表位疫苗的设计及单克隆抗体的制备奠定了理论基础。     

喉癌相关基因的生物信息学分析及真核表达载体的构建

喉癌相关基因(LCRG1)是喉癌候选抑瘤基因,目前能用于临床病理标本免疫组化的单克隆抗体依然甚少。本研究通过生物信息学分析喉癌相关基因蛋白的二级结构及抗原表位,得出最有可能的抗原表位区域为9-22,41-52,91-100,103-110,125-134,145-148,151-163,166-177,187-192,209-225,235-242,251-259,273-282等13个区域。利用PCR扩增喉癌相关基因,获得867 bp,将该片段插入真核载体V152H中,构建真核表达质粒V152HLCRG1。再将该质粒转染到人胚肾HEK293细胞,经SDS-PAGE证实成功表达后用Ni2+2NTA柱层析纯化,得到纯度>95%的蛋白,为筛选单克隆抗体奠定了理论基础。     

果蝇Bves蛋白的表达、纯化及多克隆抗体的制备

目的为了进一步研究细胞粘附分子Bves在肿瘤的发生及转移过程中的作用,需要获得Bves蛋白并制备其抗体。方法根据Flybase网站所提供的Bves基因序列,以果蝇的总RNA为模板进行PCR扩增,得到Bves部分编码序列,随后将其连接到pET-28a载体上获得原核表达载体。重组表达质粒经酶切测序鉴定后,转化入大肠杆菌BL21感受态细胞中,并用IPTG诱导融合蛋白的表达,使用活化的Ni-IDA凝胶柱亲和纯化,将纯化后得到的His-Bves融合蛋白免疫注射新西兰大白兔制备Bves多克隆抗体,并用Western blot对抗体效价进行检测。结果和结论获得了Bves原核表达重组融合蛋白及高效价的兔抗Bves多克隆抗体,为后期深入研究Bves基因的功能奠定了基础。     

基于Web技术的水、电、气、热四表远程自动抄表系统软件设计

本文介绍了四表远程自动抄表系统的整体结构,以及系统软件的设计目标和Web服务器应用程序的五种类型,介绍了系统软件的Web服务器应用程序功能设计、普通Web客户端应用程序功能设计与数据采集控制终端应用程序功能设计。     

重组人胰高血糖素样肽-1类似物的分离纯化和鉴定

将合成的人胰高血糖素样肽-1[recombinant human glucagon-like peptide-1(7~37),rhGLP-1]类似物基因插入到原核表达质粒pGEX-4T-3中,构建成rhGLP-1类似物与谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione-S-transferases,GST)的融合表达载体pGEX-rhGLP-1类似物,转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组菌株。IPTG诱导表达的菌体经高压均质机破碎后,离心收集包涵体,经尿素变性、Glutathione-Sepharose 4B亲和层析、肠激酶酶切、SP-Sepharose FF层析和反相层析RP-C18脱盐后冻干,得到纯度大于96%的rhGLP-1类似物,经质谱测定,分子量与理论值一致。生物学活性分析表明,rhGLP-1类似物具有促进表达有GLP-1受体的HEK293细胞c AMP增加的活性。     

基于FLUS模型的县域土地利用变化模拟与扩张分析

为探究未来土地利用变化空间格局演变特征,在模型精度验证的基础上,采用FLUS模型、马尔可夫链(Mark-ov chain)、空间叠加分析、核密度分析等方法,设置了自然发展、政策约束两种情景,模拟了2025年祥云县土地利用变化,并分析了不同地类扩张的空间格局特征.结果表明:自然发展情景下,建设用地主要在道路沿线及建成区周...     

基于改进等效杆端位移法的卸载模拟分析

在对结构拆撑过程进行力学计算时,等效杆端位移法是目前最常用的方法之一,但等效杆端位移法也存在一些不足。为此,以支撑胎架的整体稳定性分析为基础,提出了一种基于等效杆端位移法的新的卸载模拟分析方法,称之为改进等效杆端位移法。借助有限元分析软件ANSYS,应用改进等效杆端位移法,对某实际工程的卸载过程进行了模拟分析,并与现场实测值进行了对比,验证了此方法的准确性,为胎架卸载的模拟分析提供了一种新的有效方法。     

安非他酮缓释片与帕罗西汀片治疗惊恐障碍的疗效观察

目的:对照观察安非他酮缓释片与帕罗西汀片治疗惊恐障碍患者的效果和安全性。方法:将82例惊恐障碍患者随机分为研究组和对照组,各41例。研究组采用安非他酮缓释片治疗,对照组使用帕罗西汀片,疗程均为6周。采用惊恐障碍相关症状量表(PASS)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD)和汉密尔顿焦虑量表(HAMA)评定疗效,治疗前后分别对患者行心电图、肝功能、肾功能等检查以评价安全性。结果:治疗第1、2、4、6周末,两组的PASS、HAMD及HAMA评分均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组治疗第1、2、4、6周末的PASS、HAMD及HAMA评分与对照组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗6周末,研究组的总有效率为80.0%,对照组为77.5%,两组的总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。研究组出现性功能障碍、情感高涨、情绪易激惹、心电图异常的例数均多于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:安非他酮缓释片治疗惊恐障碍与帕罗西汀效果相当,且起效较快、药物不良反应轻,值得推广应用。     

抑郁障碍患者脑功能磁共振研究

目的:应用低频振幅(ALFF)分析方法研究首次发病为抑郁障碍的患者脑功能的异常,探讨首发抑郁障碍发病的脑机制。方法:对2011年11月-2013年10月在山西医科大学第一医院收集的13例首发抑郁障碍患者进行脑功能磁共振扫描,另选取14例年龄、性别、受教育年相匹配的正常对照组进行脑功能磁共振扫描,采用汉密尔顿抑郁评分变化测定临床反应。结果:抑郁组与正常对照组比较研究发现右侧中央旁回ALFF值明显大于正常对照组(P<0.05);右侧的岛叶、海马、尾状体的ALFF值明显低于正常对照组(P<0.05)。结论:抑郁障碍患者与正常对照组相比存在静息态脑功能的异常。     

人血清对生殖支原体LAMPs诱导THP-1细胞表达TNF-α的影响

目的探讨人血清对生殖支原体(Mg)脂质相关膜蛋白(LAMPs)诱导TNF-α表达的影响。方法提取对数期Mg的LAMPs,分别加入脂蛋白脂肪酶,蛋白酶K及人血清预处理后,刺激THP-1细胞,ELISA法测定其TNF-α水平。结果 Mg LAMPs为一混合蛋白,其活性成分为脂质成分,能激活THP-1细胞表达大量TNF-α,且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性。人血清能上调LAMPs诱导的TNF-α水平,且与LAMPs浓度呈明显的剂量依赖性。结论人血清上调Mg LAMPs诱导THP-1细胞表达TNF-α。     

金黄色葡萄球菌双组分系统反应调节蛋白AgrA的原核表达、纯化及活性鉴定

AgrA作为金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统(two-component signal transduction system,TCST)的反应调节因子,能调控细菌毒力因子的表达,在金黄色葡萄球菌致病过程中起着重要的作用。采用无限制克隆法构建AgrA表达载体,在AgrA蛋白的C端融合绿色荧光蛋白(GFP)标签,通过实时监测GFP的荧光强度来快速检测重组蛋白的表达水平。首先利用单因素实验,筛选出宿主菌株BL21-(DE3)-PlysS;其次,结合Box-Behnken试验设计,筛选出最优蛋白质表达条件:诱导时间为22h、转速为222r/min、诱导剂浓度为0.5mmol/L,AgrA产量达到5.56mg/L。最后,基于AgrA蛋白LytTR区域的非放射性凝胶阻滞实验(non-radioactive electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证了AgrA的生物活性。提出了反应调节蛋白AgrA在大肠杆菌高效可溶性表达的策略,为双组分信号转导系统的体外研究奠定基础,也为其他反应调节蛋白的可溶性表达与分离纯化提供了一个可行借鉴。     

田菁花粉过敏原的分离、纯化及鉴定

目的：初步分离、纯化及鉴定田菁花粉变应原蛋白。方法对田菁花粉粗提液进行提取,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对粗提液蛋白组分进行分离,并对其分子质量进行测定。收集10例过敏患者血清,通过免疫印迹法（Western-blotting）对花粉变应原成分进行鉴定,用离子交换层析对其变应原进行初步纯化,并通过免疫印迹法进行鉴定。结果田菁花粉有蛋白条带20余条,其中主要条带有12条,16、19和27 ku为其特异性的过敏原,其中16和19 ku 为其主要过敏原。田菁花粉通过离子交换层析纯化出变应原主要集中在Ⅳ和Ⅰ峰,其对应的分子质量为16和19 ku。结论初步分离、纯化及鉴定了田菁花粉变应原,为临床过敏性疾病的诊断和治疗奠定了基础。     

子宫腺肌病中缺氧诱导因子-1的表达及其临床意义

目的:探讨子宫腺肌病患者在位和异位内膜组织中缺氧诱导因子-1蛋白的表达及其临床意义。方法:采用免疫组化方法检测子宫腺肌病患者的在位和异位内膜组织各60例,并将其与正常子宫内膜30例的阳性率进行统计学分析。结果:HIF-1表达中,子宫腺肌病内膜、肌层的表达大于正常子宫内膜及肌层。子宫腺肌病中异位和在位内膜中的表达为86.67%和65.00%,相比正常子宫内膜33.33%,差异有统计学意义(P<0.05)。异位内膜表达也高于在位内膜,比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:子宫腺肌病的发生、发展与HIF-1关系密切,可促进子宫腺肌病细胞的生长、血管形成。     

白花鬼针草花粉过敏原的分离鉴定与纯化

目的提取和分离纯化白花鬼针草花粉主要过敏原,并鉴定主要过敏原的致敏性。方法提取白花鬼针草花粉蛋白粗提液,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离粗提液蛋白组分并测定其分子质量,经离子交换层析法分离纯化几类主要的蛋白,Western blotting分别检测其与花粉过敏患者血清IgE结合情况及10位正常人阴性混合血清结合情况,对比鉴定每种主要蛋白质致敏原的致敏性。结果 SDS-PAGE结果示：在12.5-120ku之间广泛分布了20余条蛋白条带,其中主带7条,分子质量在35-70ku和10-15ku的区带蛋白含量最为丰富,余下的范围内还有约10余条次带。Westen-blotting检测示：白花鬼针草花粉变应原的致敏性强,与花粉过敏患者血清特异性IgE结合大。离子交换层析出6类主要变应原蛋白,其分子质量分别为70、65、54、49、39及33ku;阴性对照组Westen-blotting在70ku处有弱显色。结论白花鬼针草花粉的主要过敏原为70、65、54、49、39及33ku;70ku变应原致敏性最强。     

探索石油矿区宣传思想文化体系建设思考

坚持团结稳定,鼓劲、正面宣传为主,是宣传思想工作必须遵循的重要方针。我们正在进行具有许多新的历史特点的伟大斗争,面临的挑战和困难前所未有,必须坚持巩固壮大主流思想舆论,弘扬主旋律,传播正能量,激发全社会团结奋进的强大力量。     

粉尘螨第十六类变应原的克隆表达、纯化及免疫原性鉴定

目的 获得大量具有良好IgE结合活性的粉尘螨第十六类变应原（Der f16）的重组变应原,以促进粉尘螨变态反应性疾病的特异性诊断及治疗的研究.方法 挑取经纯培养的粉尘螨,提取总RNA,根据已知Der f16基因序列设计引物,经RT-PCR扩增Der f16基因片段,产物连入pMD32-T载体中.扩增后,利用限制性内切酶EcoR Ⅰ和XhoⅠ双酶切将目的 基因片段连接到pET32a表达载体上,转化到大肠杆菌（E.coli BL21）中经IPTG诱导表达.表达载体经亲和层析纯化,SDS-PAGE检测蛋白纯度,Western bolt检测变应原免疫学活性.结果 以粉尘螨总RNA为模板成功克隆出Der f16基因,与数据库中Der f16基因同源性为100%;经IPTG诱导后,大肠杆菌大量表达Der f16蛋白,所获得的重组蛋白分子质量为73 ku,上清及沉淀物均有蛋白表达,且上清表达量高于沉淀物.重组Der f16能够与螨过敏患者血清中的IgE 反应,而不与健康者血清中的IgE反应.结论成功构建了Der f16的原核表达载体,并高效表达和纯化出具有免疫原性的Der f16重组蛋白.