辐照骨髓淋巴细胞对成骨细胞的影响

探索辐照后骨髓淋巴细胞对成骨细胞增殖分化的影响。采用酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞,密度梯度离心法获取大鼠骨髓淋巴系细胞,137Csγ-射线辐照淋巴细胞和成骨细胞,剂量6 Gy,分组为0 Gy成骨细胞+0 Gy淋巴细胞(0OB0L),0 Gy成骨细胞+6 Gy淋巴细胞(0OB6L),6 Gy成骨细胞+6 Gy淋巴细胞(6OB6L),共培养6 h后,取各组淋巴细胞与正常成骨细胞共培养,MTT和PNPP法观察其对成骨细胞增殖和分化的影响,Real time PCR方法观察成骨细胞ALP、OCN、RANKL和OPG的基因表达变化。结果显示,辐照骨髓淋巴细胞抑制成骨细胞分化,成骨细胞ALP和OCN的表达显著降低,RANKL的表达增高,RANKL/OPG的比值则显著升高。辐照后的骨髓淋巴细胞抑制成骨细胞分化并且可能通过改变RANKL/OPG的比值进而影响破骨细胞的功能。     

硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射所致凋亡的影响

探讨硫酸镁对大鼠神经干细胞辐射损伤的保护作用。取新生大鼠神经干细胞进行培养,用免疫荧光法进行神经干细胞的鉴定后用含有不同浓度硫酸镁的培养基培养神经干细胞,选择出硫酸镁的合适浓度为0．00125g／mL。将神经干细胞分为空白对照组、实验对照组（照射）和实验组（照射＋硫酸镁）。分别用2和4Gy ^10Coγ射线对实验对照组和实验组进行照射,分别于照射后24、48和72h用流式细胞仪对各组神经干细胞凋亡率进行检测,同时采用透射电镜对神经干细胞凋亡形态进行观察。与空白对照组比较,实验对照组各时间点神经干细胞的凋亡率明显升高,（t（2Gy,72h）=30．60,t（4Gy,72h1=31．85,p〈0．05）,细胞呈现出明显的凋亡形态,并可见凋亡小体。与实验对照组比较,实验组各时间点神经干细胞的凋亡率明显降低,（t（Gy,72h）=9．08,t（4Gy,72h1p〈0．05）,且细胞形态损伤明显减轻。硫酸镁能降低电离辐射对神经干细胞的凋亡率,减轻电离辐射所致神经干细胞核损伤的形态。     

电离辐射对体外培养肾小管上皮细胞1α羟化酶表达的影响

研究电离辐射对体外培养肾小管上皮细胞1α羟化酶表达的影响。采用实时荧光定量（Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,Real—time Q—PCR）技术与透射电镜等方法,观察3Gy、5Gy和10Gy ^137Csγ,射线单次照射（剂量率为0．85Gy／min）体外培养肾小管上皮细胞后1α羟化酶mRNA表达水平及细胞线粒体形态的改变,并与不受照（0Gy）组比较。结果表明,低剂量（3Gy）γ射线照射24h后即出现肾小管上皮细胞1α羟化酶mRNA表达水平的明显降低（p〈0．05）,且随受照剂量的增加下降幅度增大;电镜观察显示受照后肾小管上皮细胞线粒体呈现肿胀、基质变薄、电子密度减低、嵴断裂、数量减少与排列紊乱等变化。     

γ射线诱导破骨细胞凋亡

参照上海医科大学放射医学研究所七室建立的破骨细胞培养方法,将分离的破骨细胞培养在玻片上,利用０．５、１、３、５Ｇｙ＾１３７Ｃｓγ射线照射破骨细胞,采用荧光染色方法观察辐射对破骨细胞形态的影响。结果表明：破骨地辐射敏感,较低剂量即可引起破骨细胞凋亡,其中３Ｇｙ为诱导破骨细胞凋亡的最佳反应剂量,此时破骨细胞凋亡比例最高,可作为凋亡基因研究模型,为进一步探讨辐射所致骨质疾病的机理、预防、治疗提供实验依据     

放射性骨丢失机制与防护研究进展

放射治疗可引起照射部位骨组织产生放射性骨损伤,发生骨丢失、骨质疏松,甚至病理性骨折。放射性骨丢失的主要原因是电离辐射可促进破骨细胞的骨吸收过程,抑制成骨细胞的骨形成过程。根据电离辐射对骨组织细胞影响的具体机制,以及骨组织细胞对不同剂量的电离辐射的不同响应,可采取相应的治疗和防护措施。本文从动物水平和细胞水平两个方面介绍放射性骨丢失的研究进展,并针对其发生机制提出可能的防护措施。     

电离辐射对MC3T3细胞增殖和Notch1、Jagged1基因表达的影响

揭示了电离辐射对成骨细胞系MC3T3细胞的增殖及其对Notch1和Jagged1基因表达的影响.成骨细胞系MC3T3细胞,经过0、2和4Gy 137Cs γ射线照射,运用MTT、实时定量PCR技术,检测电离辐射对与MC3T3细胞的增殖和增殖分化相关基因Notch1和Jagged1表达的影响.照射剂量为2和4 Gy时,细...     

低剂量电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞CuZn SOD活性的影响

采用MTT法观察了低剂量电离辐射对小鼠腹腔巨噬细胞铜锌超氧化物歧化酶（CuZn SOD）活性的影响，同时用较大剂量作为对照，观察两者的不同之处，而且还利用印迹杂交方法观察了CuZn SOD的mRNA水平变化，结果表明，从转录水平上低剂量电离辐射可导致小鼠腹腔巨噬细胞CuZn SOD mRNA水平下降，而CuZn SOD活性却无明显改变；较高剂量电离辐射使小鼠腹腔巨噬细胞CuZn SOD活性在照射后8－12h明显增强。     

低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

研究不同低剂量X射线对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。采用常规苏木精-T尹红(HE)染色法和原位末端标记术(TUNEL)通过光镜观察不同低剂量x射线照射后小鼠睾丸在生精周期不同阶段各类生精细胞凋亡的剂量及时程效应关系。结果表明，低剂量电离辐射诱导生精细胞凋亡具有明显的细胞种类规律性，在较低剂量照射(0．025Gy)时，以精原细胞凋亡为主，随剂量增加(0．05-0．2Gy)才逐渐累及精母细胞，并且精原细胞凋亡率明显高于精母细胞，很少累及精子细胞和精子。低剂量电离辐射诱导生精细胞凋亡具有一定规律性．这为深入探讨低剂量辐射兴奋效廊机制提供了更深层次的实验证据。     

低剂量率γ射线杀伤肿瘤细胞机制的实验研究

用60Co源以1Gy/min剂量率照射Hela细胞,剂量分别为1、2、5、10、15Gy.用AnnexinV和PI双染法观察凋亡细胞形态;DNA梯形条带证实凋亡存在;克隆形成分析细胞增殖能力.结果显示:(1)Hela细胞凋亡率随照射剂量和时间的增加呈上升趋势,照射后168h组各剂量点凋亡率高于其他各时间组.2Gy以下时凋亡率改变不大,达5Gy时凋亡率显著增加,且达峰值(72.57±2.04)%(P＜0.001).(2)早期凋亡细胞,PS外翻,胞膜呈绿色荧光圈.凋亡晚期出现Annexin V-FITC及PI染色均阳性的外绿内红的细胞图像.坏死细胞则为红色.(3)凋亡细胞碎片呈"梯状"条带.(4)1Gy/min的剂量率照射,剂量为2-15Gy,克隆形成率由(58.95±0.36)%降至(1.67±0.35)%(P＜0.001).表明低剂量率γ射线照射可诱导Hela细胞凋亡,其凋亡率与照射剂量相关,在5Gy时凋亡率最高.     

60Co γ射线照射人肝癌细胞诱导PIF1基因mRNA变化

分别用2 Gy和4 Gy ⁶⁰Co γ射线照射人肝细胞HepG2,利用real-time PCR方法检测PIF1基因mRNA表达量的变化,以探讨PIF1基因是否参与电离辐射致DNA损伤应答。结果表明,不同剂量的γ射线照射HepG2细胞后,PIF1 mRNA表现出一致的变化规律:即照后先轻微降低随后一直高表达,高表达至少持续到照射后12 h。提示电离辐射能够诱导PIF1表达,表达水平与剂量、时间相关。     

曲古菌素A增强食管癌细胞系EC9706对X射线的辐射敏感性

利用流式细胞仪及荧光定量PCR技术,分别检测细胞凋亡率和DNA损伤修复相关基因mRNA表达变化,以探讨曲古菌素A（Trichostatin A,TSA）能否在体外增强食管癌细胞对X射线的敏感性。结果显示,辐射前TSA的处理显著提高了X射线引起的细胞凋亡率（P〈0．05）;X射线的单独处理显著上调了基因ATM、XRCC2和Lig4（8Gy除外）的mRNA水平（P〈0．05）,TSA单独和TSA联合X射线都下调了ATM、XRCC2和Lig4的mRNA水平。提示TSA很可能通过下调ATM、Lig4和XRCC2mRNA水平使食管癌细胞对X射线敏感。     

12C6+照射对小鼠睾丸组织脂质过氧化、SOD活性及细胞周期的影响

为评估重离子照射的生殖毒性,探讨其损伤的可能机制,用0、0.5、1、2或3Gy剂量12C6 离子对性成熟昆明雄鼠下腹部进行局部照射,6h后处死小鼠,取睾丸组织,用流式细胞术检测睾丸细胞凋亡率和细胞周期,用化学试剂盒检测组织中超氧化物岐化酶(SOD)的活性以及脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平.结果表明,与对照组(0Gy)相比,低剂量照射(0.5Gy)组中睾丸组织SOD活性增加(P>0.05),但SOD活力随剂量增加而下降,在2Gy和3Gy照射组中呈显著抑制作用(P<0.05);睾丸组织中MDA含量随剂量增加,2Gy和3Gy照射组呈显著性差异(P<0.05).流式细胞术检测结果显示,1～3Gy 12C6 照射可导致睾丸组织中单倍体、二倍体及四倍体细胞数量显著减少(p<0.01),凋亡率明显增加(p<0.01)以及G2/M期阻滞(p<0.01).提示12C6 照射可能通过自由基损伤途径,诱发细胞凋亡和细胞周期异常,从而造成睾丸组织损伤,生殖能力下降.本实验结果为抗氧化剂和自由基清除剂用于临床重离子治疗中对性腺的防护提供了理论依据.     

~(60)Coγ射线照射人血淋巴细胞诱导p53相关基因mRNA表达水平的变化

采用不同剂量(0~10 Gy)60Coγ射线照射人外周血淋巴细胞,通过抽提mRNA,采用real-timePCR检测不同剂量照射后淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA表达水平的变化。筛选出最佳照射剂量(5 Gy)后,用该最佳照射剂量照射淋巴细胞,检测不同时间点(0~72 h)淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA表达水平的变化。结果表明,淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA的表达水平随照射剂量的增加而增加,并呈现出剂量效应关系。在5 Gy最佳剂量照射后,淋巴细胞GADD45基因mRNA表达水平随时间的推移不断增高,在8 h时达到最高,随后开始逐渐降低;淋巴细胞CDKN1A基因mRNA表达水平随时间的推移未见明显变化趋势。淋巴细胞系中GADD45和CDKN1A基因mRNA的表达水平与照射剂量均有较好的剂量效应关系,两者均有可能作为电离辐射的生物剂量计来估算受照剂量水平。     

X射线诱导人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达上调

应用实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,定量分析不同剂量X射线体外照射对人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达的影响,探讨了运用mRNA水平变化作为电离辐射生物剂量计的可能性。结果表明:经1、2、3、5Gy X射线照射后24h,GADD45和p21基因表达均明显上调。GADD45基因表达在1-5Gy照射剂量范围内呈指数相关。p21基因表达在1-3Gy照射剂量范围内呈线性剂量效应关系,但5.0Gy照射后,其表达不再继续增加。结果表明,X射线照射后人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因的表达在一定剂量范围内呈剂量依赖性上调,GADD45更适合发展为核事故受照射人员的分子生物剂量计。     

电离辐射对小鼠骨髓细胞CDK4表达的影响

采用流式细胞术和Northern blot检测X射线全身照射后小鼠骨髓细胞CDK4转录水平和蛋白表达的变化。结果表明,2GyX射线全身照射后4－48h CDK4 mRNA转录水平及蛋白表达均明显下降;0.5-6Gy X射线全身照射后12h CDK4 mRNA水平及蛋白表达亦呈降低改变。结果提示,CDK4在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞G1期阻滞中可能起重要作用。     

电离辐射对HelaS3细胞凋亡与细胞周期的影响

研究了电离辐射对HelaS3细胞凋亡和细胞周期的影响,进一步探讨细胞凋亡与细胞周期的关系,为肿瘤放化疗方案的制定提供基础资料。采用PI、Hoechst33342双梁和PI单梁,用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果表明,给予0.5-4.0Gy X射线照射后8h细胞凋亡开始增加,12h达最大值,12－24h有下降趋势,但24h开始又逐渐增加,到72h时又接近12h水平。S期和G2／M期细胞均明显增加,并呈剂理依赖性,Go/G1期细胞则呈剂量依赖性减少,且这种变化在受照射后24h最明显。说明一定剂量电离辐射可以诱导明显的G2/M阻滞和S期阻滞,并可诱导HelaS3细胞凋亡的产生,两者之间有一定的关系。     

局部辐照大鼠血清对成骨细胞增殖分化的影响

SD大鼠胫骨部位30Gy照射2周和12周后处死,取血离心得血清;酶消化法分离培养新生SD大鼠头盖骨成骨细胞。采用MTT和PNPP法观察不同血清对成骨细胞增殖和分化的影响;用流式细胞仪观察成骨细胞周期变化;用RealtimePCR方法观察成骨细胞CyclinD、CyclinE、p21和p53的表达。结果显示：辐照2周和12周的大鼠血清抑制成骨细胞增殖,对成骨细胞ALP的表达无明显影响;辐照2周和12周的大鼠血清增加G1期成骨细胞比例,减少S期和G2期细胞比例;辐照2周大鼠血清抑制成骨细胞CyclinD和CyclinE的表达;12周大鼠血清促进成骨细胞p21和p53的表达,抑制成骨细胞CyclinE的表达。局部辐照大鼠血清通过抑制成骨细胞CyclinD和CyclinE表达,上调p21和p53的表达持续阻滞细胞于G1期抑制成骨细胞增殖。     

γ射线诱导人肿瘤细胞B7.1分子表达的研究

为研究电离辐射与人肿瘤细胞B7．1分子表达之间的关系，探讨肿瘤细胞在照射后免疫原性增强的机理。采用间接免疫荧光－流式细胞仪测定技术，用30、40、50、60Gyγ射线照射5种肿瘤细胞和一种非肿瘤细胞后，观察不同培养时间（24、48、72、96h）内这些细胞B7．1分子的表达水平。用^3H－TdR释放试验测定肿瘤细胞和淋巴细胞共反应后细胞毒活性。结果表明，未经熙射的肿瘤细胞不表达B7．1分子。经40Gy照射后，SMMC－7721肝癌细胞、PC－12嗜铬神经瘤细胞、A－549肺癌细胞表达B7．1共刺激分子，与对照组相比有非常显著性差异，但SHG胶质瘤 细胞和HOS骨肉瘤细胞经60Gy照射后仍未B7．1分子的表达。淋马细胞与表达B7．1分子的肿瘤细胞共反应后细毒胞活性明显高于未照射组（p＜0．01）。实验提示，γ射线能诱导人肿瘤细胞表达B7．1分子，增强肿瘤细胞的免疫原性。     

沉默人乙酰转移酶样蛋白基因对结直肠癌CL187细胞放射敏感性的影响

探讨沉默人乙酰转移酶样蛋白(Human acetytransferase-like protein, hALP)基因表达对结直肠癌CL187细胞放射敏感性的影响。通过临床数据库挖掘h ALP基因在结肠癌组织的表达情况;CL187细胞沉默hALP后接受递增剂量(0 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy)射线照射,运用克隆增殖实验和细胞存活率检测实验分析细胞放射敏感性变化;结直肠癌CL187细胞沉默hALP后接受8 Gy射线照射,使用流式细胞分析术检测细胞凋亡情况;CL187细胞沉默hALP基因后接受8 Gy射线照射,使用Western blotting检测hALP基因、P53和BAX的蛋白表达水平。结果显示:CL187细胞沉默h ALP基因后接受2 Gy射线照射,沉默hALP基因组与对照组的细胞存活分数分别是0.63、0.5,相对生物学效应1.26;沉默hALP基因后射线照射引起的细胞凋亡从19.53%增高到36.49%(p0.05);沉默hALP基因后射线照射引起P53、BAX表达水平进一步增高。结果提示,沉默hALP基因表达提高了结直肠癌CL187细胞的放射敏感性。hALP基因的表达水平与细胞放射敏感性之间存在相关性,有可能是预测结直肠癌放射敏感性的分子靶标。     

电离辐射联合顺铂对人肺癌细胞中BTG3基因表达的影响

加速器产生的6-MV X-射线一次性照射体外培养的人肺腺癌细胞株A549和SPCA-1,细胞的吸收剂量分别设置为0、1、3、5和8 Gy,细胞照射后24 h及单次接受5 Gy照射后6、12和24 h后取样;X-射线联合顺铂对BTG3表达的影响研究设立单纯照射组(5 Gy)、顺铂处理组(20μmol·L-1顺铂)和联合处理组(5 Gy+20μmol·L-1顺铂),上述实验均以未给予任何处理的细胞为对照组;采用Western blot及RT-PCR法检测受到不同剂量电离辐射及照射后不同时间肿瘤细胞中BTG3表达水平。Western blot与PCR检测结果均显示,A549和SPCA-1细胞在受到不同剂量的X-射线照射后24 h,其BTG3蛋白及mRNA表达量均明显增加,并随电离辐射剂量的增加而增加,与对照组比较有统计学差异(t=5.25-15.75,p0.05);照射后不同时间检测结果显示,细胞在X-射线照射4 h后BTG3蛋白及mRNA的表达量即开始上升,并持续到照射后24 h,与照射前相比有统计学差异(t=7.52-11.18,p0.05);联合处理组BTG3的表达量均明显高于单纯照射组、顺铂处理组和对照组(t=7.02-15.86,p0.05)。电离辐射联合顺铂可以上调肺癌细胞株中BTG3的表达,BTG3基因有可能作为肺癌放化疗的靶基因。