免疫亲和柱结合超高效液相色谱-串联质谱法测定牛奶中的16种真菌毒素比较研究

目的 通过比较5种不同商品化多合一免疫亲和柱的可检测目标毒素种类、回收率和稳定性,筛选性能最优的免疫亲和柱,建立免疫亲和前处理-超高效液相色谱-串联质谱法(ultraperformanceliquid chromatography-tandem mass spectrometry, UPLC-MS/MS)测定牛奶中16种真菌毒的方法。方法 牛奶样品分别经5种不同多毒素免疫亲和柱进行净化富集,用优化后的UPLC-MS/MS,在多反应监测模式下测定,同位素内标法定量,筛选覆盖牛奶中真菌毒素污染种类全面、回收率和稳定性最佳的免疫亲和柱,并进行免疫亲和柱性能评价和方法学验证,最终将方法应用于实际样品检测。结果 免疫亲和柱A对牛奶中16种真菌毒素在低、中、高3个添加水平均具有良好的准确度和精密度,加标回收率在83.6%～126.8%之间,相对标准偏差为0.2%～18.4%。柱A内各毒素残留水平低于仪器检出限,柱容量在21.8～1317.5 ng之间。使用免疫亲和柱A富集净化样品,各目标毒素在线性范围内线性良好,相关系数均大于0.99,定量限为0.0010～0.2000ng/g。应用该方法对牛奶质...     

复合免疫亲和柱净化高效液相色谱法同时测定小麦中的4种真菌毒素

建立了一种复合免疫亲和柱净化高效液相色谱法同时测定小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、黄曲霉毒素B,和赭曲霉毒素A 4种真菌毒素的分析方法.样品利用80％的乙腈水溶液(v/v)提取后,采用复合免疫亲和柱净化,并通过高效液相色谱仪进行分离.色谱柱为ZORBAX Eclipse Plus C18柱(250 mm×4.6...     

超高效液相色谱-串联质谱法同时测定小麦中的4种限量真菌毒素

目的 建立复合免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定小麦中4种限量真菌毒素的分析方法.方法 小麦样品粉碎后,通过80％的乙腈水溶液(V:V)提取后,采用复合免疫亲和柱净化,并利用超高效液相色谱串联质谱的多反应监测模式进行测定分析.色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C18柱(100 mm×2.1 mm...     

黄曲霉毒素免疫亲和柱性能评价方法及应用

探索建立一种简便可靠的黄曲霉毒素免疫亲和柱性能评价方法并利用该方法对国内市场上5个主流品牌产品进行对比评价。依据评价结果进行产品采购使用,经3年多实用经验证明了方法的可靠性。该性能评价方法不仅能够从确保检测质量和降低检测成本两方面指导亲和柱的采购还能够协助倒逼生产商不断提升产品质量。     

免疫亲和柱的制备及在真菌毒素检测中应用的研究进展

真菌毒素是真菌的次生代谢产物,是引起谷物和饲料污染的重要元凶,其检测手段日趋完善。目前免疫亲和柱在真菌毒素检测分析方面已经被广泛使用,本文综述了免疫亲和柱的原理及其制备方式,及其在几种常见真菌毒素检测方面的应用。      

单端孢霉烯类真菌毒素多目标分析方法的研究进展

本文从样品前处理和检测两个环节,梳理总结了近年来国内外单端孢霉烯类真菌毒素多目标分析的有关研究成果。采用体积比介于80/20~90/10的乙腈/水溶剂,通过超声震荡、高速搅拌等方式处理是目前应用较广的提取方法。以免疫亲和柱和Mycosep多功能净化柱为代表的固相萃取(SPE)技术净化(纯化)样品效率较高。单端孢霉烯类真菌毒素的检测方法可分为物理化学法和免疫分析法两类,物理化学法中的液质联用检测具有灵敏度高、检测时间短、提取范围广等显著优势。     

免疫亲和柱在真菌毒素检测中的应用

利用真菌毒素的特异性质的抗体制作而成的免疫亲和柱,已经成为一种新型净化技术,也逐渐被广泛地应用于检测真菌毒素实验。免疫亲和柱具备的特异性质,除了可以将样品中的大部分干扰因素清除之外,还可以有效提升检测方法的灵敏性,大大缩短检测时间,减少溶剂的使用量。     

基于壳聚糖微球的黄曲霉毒素B1免疫亲和柱开发制备

目的 基于壳聚糖微球制备一种用于黄曲霉毒素B1检测前处理的免疫亲和柱。方法 通过优化化学交联法的反应条件,包括壳聚糖分子量、氨基和醛基摩尔比、壳聚糖浓度和水相油相比,制备粒径大小合适且均一的壳聚糖微球,并以此为载体偶联黄曲霉毒素B1的单克隆抗体制备免疫亲和柱。对亲和柱性能进行分析,使用阳性实际样品对亲和柱使用效果进行验证。结果 确定了壳聚糖微球的最佳制备条件。在此条件下制备的免疫亲和柱非特异性吸附率为5.26%,对单克隆抗体偶联率为90.90%,柱容量为2.69 μg AFB₁/mL壳聚糖微球,检测回收率为92.1%~98.6%,相对标准偏差为0.61%~2.53%。用于实际样品检测回收率为87.90%~96.37%。 结论 本研究建立的免疫亲和柱制备过程简单,成本低,为黄曲霉毒素B1痕量检测前处理提供一种新的方案。     

啤酒酿造原料中黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A同时检测分析方法研究

研究建立同时检测啤酒及酿造原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A的免疫亲和柱净化-柱后化学衍生-高效液相色谱方法。样品经过甲醇-水(80∶20,v/v)提取,通过免疫亲和柱进行富集和净化,采用Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱,以乙腈-2%乙酸(40∶60,v/v)为流动相,等度洗脱,柱后以0.5%碘溶液衍生、改变波长荧光检测。结果表明,黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和赭曲霉毒素A检出限分别为0.05μg/kg(AFB1)、3.19μg/kg(ZEA)和0.22μg/kg(OTA),标准曲线的线性范围分别为0.2~10.0μg/L、10.0~1000.0μg/L和5.0~50.0μg/L;在大麦样品中加标回收率为90.0%~109.5%,相对标准偏差为2.18%~4.94%。被检37个样品的真菌毒素含量检测结果表明,正常贮存下的啤酒原料均未检测出真菌毒素,但在霉变大麦样品中可以检测出少量的真菌毒素。     

高效液相色谱-串联质谱法同时测定酿酒原料中10种真菌毒素

建立酿酒原料中10种真菌毒素的高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测方法。样品经84%乙腈提取后,采用黄曲霉毒素免疫亲和柱净化、外标法定量4种黄曲霉毒素;使用多功能柱净化、同位素内标法定量样品中另外6种真菌毒素。结果表明,10种真菌毒素在各自的线性范围内线性关系良好,相关系数不低于0.998,10种化合物检出限为0.0022~1.79μg/L,定量限为0.075~5.95μg/L;加标回收率为61%~116.2%,相对标准偏差为0.88%~8.61%。该方法具有灵敏度高、稳定性好、定量准确的特点,适用于不同酿酒原料中多种真菌毒素的定量检测。     

抗黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的制备

制备黄曲霉毒素M1污染样品的净化前处理免疫亲和柱.利用无血清培养基制备的高纯度抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose 4B进行偶联、装柱后通过IC-ELSIA对免疫亲和柱的性能评价确立了最佳反应条件.免疫亲和柱的有效柱容量为500ng,经添加回收试验测定的平均回收率为92.46%0,变异系数2.3%...     

免疫亲和柱净化-HPLC法测定小麦粉中的黄曲霉毒素B_1、玉米赤霉烯酮和脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量

建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定小麦粉中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的方法。小麦粉样品经乙腈-水振荡提取,三合一免疫亲和柱净化后,采用双通道荧光检测器串联光化学衍生器同时测定黄曲霉毒素B1和玉米赤霉烯酮,二极管阵列检测器测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇。样品中各真菌毒素平均加标回收率为74.8%~105.2%,相对标准偏差为1.96%~6.26%。此方法可用于实验室开展小麦中3种真菌毒素含量的检测。     

去氢甲睾酮多克隆抗体免疫亲和柱的制备研究

将去氢甲睾酮多克隆抗体同CNBr-Sepharose 4B进行偶联,制成了对去氢甲睾酮具有特异性吸附的免疫亲和柱(IAC),优化了免疫亲和柱的制备和使用条件;同时用间接竞争ELISA (icELISA)和高效液相色谱法(HPLC)对该免疫亲和柱的性能进行评价.结果表明:CNBr-Sepharose 4B偶联抗体的最佳反应时间为2.5 h,抗体最佳初始质量浓度为0.5 mg/mL;IAC的柱容量约为1 700 ng DMT/g干胶;最适洗脱条件为80％的甲醇-水溶液,平均加标回收率为97.87％.该亲和柱重复使用3次,回收率仍不低于90％.     

现行黄曲霉毒素液相色谱检测法的比较与评价

目的 综合评价检测黄曲霉毒素的几种现行液相色谱-荧光法。方法 采用均质(涡旋)、超声辅助液液萃取技术对样品中的黄曲霉毒素进行提取, 免疫亲和柱和多功能柱净化。并采用不同的检测技术[三氟乙酸(TFA)柱前衍生法、光化学柱后衍生法、碘和溴柱后衍生法、大体积流动池直接检测及光化学柱后衍生串联大体积流动池]对玉米质控样品中黄曲霉毒素进行了分析。结果 各方法的检测结果均较理想, 可满足常规样品的检测要求。结论 超高压液相色谱-大体积流动池检测法在有效提高工作效率的同时, 大量减少了有毒有害试剂的使用量, 且具有最高的检测灵敏度, 可满足GB 2761-2011中对各类样品中黄曲霉毒素的限量要求。采用乙腈-水或甲醇-水体系均能达到较好提取黄曲霉毒素的目的。免疫亲和柱的净化效果较多功能柱好。     

全自动免疫磁珠法与免疫亲和柱法测定食用油中黄曲霉毒素B1的对比研究

采用全自动免疫磁珠净化与免疫亲和柱净化的前处理方法，结合超高效液相色谱法对不同食用油中黄曲霉毒素B₁进行定量检测，并对两种前处理方法结果准确性、加标回收率、检测时间进行了对比。结果表明：全自动免疫磁珠净化与免疫亲和柱净化测定植物油标准物质，结果分别为15.59μg/kg和14.64μg/kg，均在标准值范围内；对不同种类食用油添加不同量的黄曲霉毒素B1标准物质，加标回收率均在88%～110%之间，相对标准偏差均在5%以内。采用Bland-Altman法对全自动免疫磁珠净化法和免疫亲和柱净化法进行差异分析，结果显示这两种净化方法的差异在可接受范围内。两种方法在净化和富集食用油中黄曲霉毒素B₁均可满足实验要求，可以互相代替使用。通过检测时间对比，全自动免疫磁珠净化搭配使用真菌毒素全自动净化仪前处理方法可同时处理多个样品，平均一个样品净化时间小于3 min，处理时间短、实验效率更高。     

免疫亲和层析及其在真菌毒素检测中应用

该文简介免疫亲和层析工作原理,载体要求与选择,免疫亲和柱制备与使用,重点综述免疫亲和层析在黄曲霉毒素,赭曲霉毒素,玉米赤霉烯酮,脱氧雪腐镰刀菌烯醇,伏马毒素,T-2毒素等真菌毒素检测中应用最新进展。     

免疫亲和柱净化-超高效液相色谱串联质谱法同时测定火锅底料中的5种真菌毒素

目的：建立复合免疫亲和柱净化、超高效液相色谱串联质谱检测火锅底料中的黄曲霉毒素B1(Aflatoxins B1,AFB1)、黄曲霉毒素B2(Aflatoxins B2,AFB2)、黄曲霉毒素G1(Aflatoxins G1,AFG1)、黄曲霉毒素G2(Aflatoxins G2,AFG2)、赭曲霉毒素A(Ochratoxin A, OTA)的方法。方法：样品提取后,经复合免疫亲和柱净化,以0.1%甲酸水和甲醇为流动相梯度洗脱,用Agilent EclipsePlus C18 RRHD色谱柱分离,ESI+进行多反应监测,内标法定量。结果：5种真菌毒素的线性范围在0.1～10.0 ng/mL,相关系数(r)>0.999,检出限0.1μg/kg,定量限0.3μg/kg。3个加标水平下(0.2、5.0、10.0μg/kg)的回收率在81.38%～97.87%之间,相对标准偏差为0.79%～6.18%。结论：该方法快速准确,可用于火锅底料中5种真菌毒素的定性、定量检测。     

不同净化柱处理对小麦粉中4种镰刀菌毒素的净化效果

比较MycoSep~?226多功能净化柱、DZT MS-PREP免疫亲和柱和实验室制备聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱在检测小麦粉中4种镰刀菌毒素(玉米赤霉烯酮、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、T-2毒素、HT-2毒素)过程中的前处理效果。选择MycoSep~?226多功能净化柱、DZT MS-PREP免疫亲和柱和实验室制备聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱,通过不同的提取和前处理方法,以及建立高效液相色谱-串联质谱检测法,对小麦粉中的4种镰刀菌毒素进行测定。DZT MS-PREP免疫亲和柱处理小麦粉样品所得的回收率为88.01%~107.31%,相对标准偏差为1.09%~14.42%;聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱的回收率为70.05%~112.80%,相对标准偏差为3.42%~12.25%;MycoSep~?226多功能净化柱的回收率为69.42%~111.12%,相对标准偏差为1.46%~13.24%。免疫亲和柱具有重复利用,有机溶剂耗用量少、特异性强等显著优势,且聚苯乙烯-二乙烯苯树脂免疫亲和柱为新载体免疫亲和柱的制备提供了依据。     

粮食真菌毒素快速检测产品性能评价与分析

真菌毒素污染是全球性粮食质量安全的首要问题,随着食品安全现场快速监管力度的不断加强,对快速检测方法的需求日益增长,许多真菌毒素快检产品应运而生。由于快速检测结果的准确性与快检产品质量和性能密切相关,因此选择市场占有率较高的5个真菌毒素快速检测品牌,采用科学的评价规程从检测结果可靠性、基质匹配性以及综合性能等方面对产品进行了多维评价。评价指标包括准确度、精密度、定量范围、检测结果判定范围、检测时间以及检测成本等,真菌毒素种类分别为脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮和黄曲霉毒素B₁。评价结果显示,5个品牌的真菌毒素快速检测产品用于玉米、小麦和糙米基质中常见真菌毒素检测时的回收率在61%～178%之间,相对标准偏差在4%～38%之间,不同品牌间存在显著差异;各品牌产品的人员间检测结果相对标准偏差在0.4%～22.2%之间,部分品牌在检测某种粮食基质时易受到人员操作的影响;大部分品牌对不同粮食基质的匹配性良好。综合性能评价结果表明：5个品牌中品牌A的3种真菌毒素快检产品对粮食基质适用性最佳。     

同时检测食品中多种类真菌毒素的研究进展

食品中普遍存在着多种真菌毒素的共同污染,其联合毒性加剧了健康风险,检测单个或者单一种类的真菌毒素已无法满足保障食品安全的要求,快速、高效且同时检测多种类真菌毒素成为必然趋势。本文简述食品中真菌毒素污染的特点,从样品前处理方法和检测技术两方面介绍目前监测食品中多种类真菌毒素的研究进展。液液萃取、固相萃取、免疫亲和柱法以及QuECHERS法等被应用于多种类真菌毒素同时提取、富集和净化,超高效液相色谱和多级别、高分辨率的质谱联用技术在多组分同时检测和非靶标性真菌毒素鉴定中独具优势。本文可为同时检测食品中多种类型的真菌毒素研究及应用提供参考。