葡糖基转移酶抗体的制备与研究

以葡糖基转移酶免疫产蛋母鸡,应用酶联免疫吸附测定法测定鸡蛋黄中免疫球蛋白的活性.实验结果表明,经葡糖基转移酶免疫后可以得到高效价的蛋黄抗体,其抗远援链球菌的效价约为一般IgY的16倍.体外模拟实验表明经远援链球菌免疫的蛋黄抗体确实有抗牙菌斑形成的能力,从而具备防龋齿的功效.     

支原体糖基转移酶对哺乳动物细胞的影响

支原体是引起人类多种疾病的微生物，常常寄居于人体细胞、组织中。通过细胞生长曲线、粘附实验、抗饥饿实验、抗氧化实验及Western blot方法，初步探讨了发酵支原体糖基转移酶对哺乳动物细胞的影响。结果表明，支原体糖基转移酶对细胞生长没有太大的影响，但是抑制了细胞粘附及抗氧化能力，促进了细胞的抗饥饿能力。将有助于让人们更深入地了解支原体如何引起人类及其它哺乳动物多种疾病的细胞和分子机制。     

自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体的纯化与检测

为了提纯并鉴定自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体,探讨其在部分组织中的免疫定位．首先合成带谷胱甘肽转移酶标签的自噬基因融合蛋白,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,然后用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测抗体浓度,最后用免疫亲和纯化方法提纯抗血清中的多克隆抗体,酶联免疫吸附法检测抗体效价,蛋白印迹检测抗体特异性及在组织中的表达情况．结果表明：制备得到自噬基因融合蛋白重组多克隆抗体经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其质量浓度为每10μL含5μg,用酶联免疫吸附法显示此抗体效价及特异性较高,蛋白印迹显示蛋白大小为55kD左右．     

响应曲面法在环糊精糖基转移酶反应中的应用

通过单因素实验确定了pH、温度、加酶量、反应时间对环糊精糖基转移酶生产γ-环糊精有影响．并用响应面实验确定了生产γ-环糊精的最佳工艺参数：pH8．12、温度60℃、加酶量1200U／g底物．该工艺条件下，γ-环糊精的产量可达14．31mg／mL．     

环糊精糖基转移酶中色氨酸残基的化学修饰

以N-溴代琥珀酰亚胺为修饰剂,对环糊精糖基转移酶（CGTase）中的色氨酸的分布及其与酶活力的关系进行了研究,发现色氨酸与酶的活性有关,酶被修饰后引起荧光光谱发生了变化．     

苏丹红Ⅰ多克隆抗体的制备研究

研究制备抗苏丹红Ⅰ的多克隆抗体.采用混合酸酐法合成免疫抗原苏丹红Ⅰ明胶,按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体.采用酶联免疫吸附法鉴定抗血清中抗苏丹红Ⅰ多克隆抗体效价.结果表明,苏丹红Ⅰ抗体的效价为1:8 000,可用于苏丹红Ⅰ的免疫学检测.     

四环素与金霉素完全抗原的制备研究

采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA与金霉素-BSA完全抗原，分别将两种不同偶联法制备的四种完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。酶联免疫吸附法测定出抗四环素与金霉素特异性抗体的效价最高达1：320000，这为进一步制备抗四环素与金霉素抗体提供了良好的免疫原，同时为食品中四环素类残留的免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

Ser411磷酸化p70S6k的细胞免疫化学定位

培养NIH3T3细胞，结合免疫印迹和细胞免疫荧光染色法，对p70的S6激酶（p70^S6k）及其第411位丝氨酸（Ser^411）处于磷酸化状态的细胞定位进行研究．利用免疫荧光染色技术，发现p70^S6k存在于细胞的各个部分，而Ser^411磷酸化后的p70姒只存在细胞核内．将细胞核与细胞质分离，并利用抗磷酸化Ser^411的抗体进行免疫印迹分析，发现只有细胞核部分才出现免疫条带，说明Ser^411磷酸化后的p70^S6k特异性地存在于细胞核当中．     

抗体在生物医学中的研究进展

自抗体被发现以来，人们有计划地对抗体基因序列进行改造，使抗体及其相关产品在多种疾病诊断和治疗中发挥着重要的作用．简述了抗体改造研究经历的3个不同阶段，即免疫血清学研究阶段、单克隆抗体研究阶段和基因工程抗体研究阶段，以及抗体的研究现状．     

深红酵母产生的类胡萝卜素对蛋黄着色的研究

用含经破碎细胞壁的深红酵母菌体的饲料进行鹌鹑喂养试验，来研究深红酵母的类胡萝卜素对鹌鹁蛋的着色．随着鹌鹁不断进食深红酵母，实验组的蛋黄色价和类胡萝卜素含量不断升高，8d后，蛋黄的色价从6级增加到15级，对照组的蛋黄的色素保持在6级左右．用丙酮和石油醚提取蛋黄色素，进行360～600nm波长光谱扫描，实验组的波形与β-胡萝卜素的波形基本相同．用反相高效液相色谱分析蛋黄中β-胡萝卜素的含量，实验组可达到0．032mg/yolk，比对照组提高了21倍．实验结果表明，深红酵母是一种很好的天然蛋黄着色剂和营养增补剂．     

发菜中糖基转移酶基因的克隆及原核表达

发菜(Nostoc flagelliforme)是一种陆生蓝藻,前期转录组测序发现糖基转移酶基因转录水平较正常上调2.29倍.以发菜基因组为模板克隆糖基转移酶基因,获得长度为1 290bp的核酸序列.通过生物信息学分析表明,通过生物信息学分析表明,该基因具有较高保守性,蛋白质二级结构主要构成方式为随机卷曲和α螺旋,是亲水性蛋白,酪氨酸、苏氨酸、丝氨酸磷酸化位点个数分别为2、9、18,蛋白质分子量为47.54kDa,等电点为9.33.正负电荷氨基酸残基数分别为61和51.随后,将该基因插入质粒pET-28a中成功构建重组表达质粒,然后转化至BL21大肠杆菌感受态中进行原核表达.在OD值为0.8时,用1mM IPTG在16℃下诱导表达20h后,获得预期大小重组蛋白(47.54kDa).研究首次成功克隆得到发菜糖基转移酶基因,并构建重组质粒于大肠杆菌中高效表达,实验结果为进一步研究发菜多糖代谢分子调控机制奠定了基础,也为今后糖基转移酶基因工程菌株的构建提供理论依据.     

大豆皂甙的提取及在制曲中的分解

主要研究了大豆皂甙的提取方法和皂甙糖基在制曲中的变化。结果表明，脱脂大豆经６０％－７０％乙醇提取、丁醇转移，可得到２．８％粗皂甙。粗皂甙可以用Ｄ１０１多空吸附树脂柱提纯。在米曲霉菌制曲中，大部分皂甙糖基被吕解，但部分皂甙反而糖基增加；在黑曲霉制曲中，只有皂甙糖基的水解，没有皂甙糖基的增加。     

Soybean Saponin Extraction and its Hydrolysis in Koji Making

主要研究了大豆皂甙的提取方法和皂甙糖基在制曲中的变化。结果表明，脱脂大豆经６０％～７０％乙醇提取、丁醇转移，可得到２．８％粗皂甙。粗皂甙可以用Ｄ１０１多空吸附树脂柱提纯。在米曲霉菌制曲中，大部分皂甙糖基被水解，但部分皂甙反而糖基增加；在黑曲霉制曲中，只有皂甙糖基的水解，没有皂甙糖基的增加。     

四环素与金霉素完全抗原的制备研究

采用戊二醛交联法和混合酸酐法制备了四环素-BSA与金霉素-BSA完全抗原,分别将两种不同偶联法制备的四种完全抗原按照常规免疫程序免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,酶联免疫吸附法测定出抗四环素与金霉素特异性抗体的效价最高达1320000,这为进一步制备抗四环素与金霉素抗体提供了良好的免疫原,同时为食品中四环素类残留的免疫学检测方法的建立奠定了基础.     

活性蛋黄抗体的毒性试验

通过小鼠急性毒性试验、大鼠急性毒性试验、小鼠嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、Ames试验及大鼠30d毒试验来评估蛋黄抗体的安全性．试验结果表明，7d内小鼠和大鼠均未出现明显中毒症状和死亡，3项致突变试验结果也均为阴性．大鼠30d长毒试验中临床检查、血像、生化、脏器组织病理学等项目测定均无异常．结论为IgY无急性毒性和致突变性，属安全制剂．     

玉米须黄酮类ax-5″-methane-3′-methoxymaysin和ax-4″-OH-3′-methoxymaysin的抗氧化活性

利用硫代巴比妥酸法（TBA法）、共轭二烯检测法（紫外法）对从玉米须中分离得到的2个黄酮类2″-O-a-L-鼠李糖基6-C-（6-脱氧-ax-甲基-木-已-4-羰基）-3′-甲氧基木犀草素（ax-5″-methane-3′-methoxymaysin）和2″-O-a-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖基-3′-甲氧基木犀草素（ax-4″-OH-3′-methoxymaysin）的抗脂质体过氧化的能力进行了检测．结果表明：ax-5″-methane-3′-methoxymaysin比ax-4″-OH-3′-methoxymaysin对共轭二烯（CD-POV）的产生有更强的抑制能力，均表现出一定的量效关系．它们的半抑制浓度IC50分别为0．5μg／mL和4．9μg／mL．玉米须黄酮类单体对丙二醛（MDA）的抑制能力和对CD-POV的抑制能力基本一致，只是MDA达最大值时比CD-POV达最大值时需要的时间更长．     

卵黄抗体提取副产物的综合利用研究

卵黄抗体副产物中蛋黄和蛋清是清洁的理想蛋白质.本文采用木瓜蛋白酶对蛋黄和蛋清进行酶解,通过正交试验设计对影响酶解的主要因素:料液比、酶解时间、加酶量进行了优化研究;在最佳酶解条件下酶解得到蛋黄(清)水解液后,辅之以特定工艺开发出了高附加值的氨基酸蛋奶营养口服液.同时,根据一定的配方调制成蛋黄(清)液,通过单因素试验设计研究其喷雾干燥工艺条件,将其加工成具有特定功能的高蛋白营养粉.经严格检测,研制出的产品均符合该类食品相关国家标准,并对卵黄抗体提取副产物综合利用的研究有一定的促进作用.     

抗氨甲酰化蛋白抗体的制备及其ELISA检测方法的建立

为了制备抗氨甲酰化蛋白抗体,探讨了氨甲酰化与瓜氨酸化之间的关系,开发氨甲酰化蛋白检测试剂盒。以牛血清白蛋白(BSA)和氰酸钾(KCNO)为原料合成人工完全抗原(Hcit-BSA),然后免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠,获得抗血清,间接ELISA测定抗体效价,用方阵实验确定抗体最佳稀释倍数和包被抗原的最佳包被浓度,间接竞争ELISA检测抗体特异性。结果表明:抗体效价大于1∶8 000,抗体最佳稀释倍数为1∶4 000,包被原最佳包被浓度为0.25μg/mL,抗体能特异性识别氨甲酰化产物(carbamylation-derived products,CDPs)。Hcit-BSA具有较强免疫原性,使BALB/c小鼠产生抗氨甲酰化蛋白抗体,也为建立一种简便、快速、特异性强的免疫分析方法奠定了基础,为一些疾病的早期快速检测提供了可能。     

TNT荧光偏振免疫检测方法研究

研究旨在利用新制备的多克隆抗体首次建立2,4,6-三硝基甲苯（TNT）的荧光偏振免疫分析方法．通过设计合成新的TNT半抗原TNT—BSA,偶联载体蛋白后免疫新西兰大白兔,制备亲和力高、特异性强的多克隆抗体．结合新设计合成的荧光示踪物TNT—PDAM建立了TNT的荧光偏振免疫分析方法．试验结果表明,TNT荧光偏振免疫分析方法检测限为7．5μg／L,检测范围为13．8~129．7μg／L,IC50为39．3μg／L．     

发酵产柴胡皂苷酶的研究

研究了用酶水解柴胡皂苷分子上的部分糖基，使皂苷部分水解生成低糖、高活性皂苷的方法．探讨了3种菌株对柴胡皂苷糖基的水解能力，得到1种具有较高活性的菌株SP．以2，用于水解柴胡皂苷.通过TLC法分析得到柴胡皂苷酶解最佳反应条件为40℃、24h,pH=5．0，在此基础上的酶反应回收率为118.8％.