炎症性肠病中的自噬异常与中药干预研究进展

自噬（autophagy）是由溶酶体介导的细胞程序性降解途径，对维持细胞的稳态，清除胞内毒性物质和代谢能量的平衡具有重要的意义。研究表明自噬异常是炎症性肠病（inflammatory bowel disease,IBD）发生、发展的重要机制,与炎症反应的失调、病原菌侵袭和肠道黏膜的修复障碍密切相关。深入认识自噬调节在IBD防治中的价值对于优化现有治疗策略具有重要意义。本文基于中药在IBD防治中的应用现状，从自噬调节的角度分析了相关中药及其活性成分的作用机制和应用前景，并对相关研究存在的问题和发展趋势进行了初步探讨。     

从自噬在胰岛β细胞中的作用探讨糖尿病治疗的药物靶点

自噬是溶酶体降解受损的细胞器、蛋白质聚集体以及回收营养物质的一种分解代谢的过程。研究表明,自噬可以保护胰岛β细胞的结构,维持胰岛素的正常分泌和稳态。此外,自噬可减轻胰岛β细胞氧化应激,防止细胞凋亡以及清除泛素化蛋白聚集物等。因此,自噬在糖尿病的发生和发展过程中起着重要作用,可能成为预防和治疗糖尿病的一个新靶点。目前,噻唑烷二酮类、双胍类等临床常用降血糖药物已被证实通过可调节自噬发挥治疗作用。本文将从自噬、自噬在胰岛β细胞和糖尿病中的作用及自噬相关降血糖药物进行综述,为临床治疗糖尿病提供新的思路。     

巨噬细胞移动抑制因子通过调控自噬抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的:研究巨噬细胞移动抑制因子（macrophage migration inhibitory factor,MIF）对H9c2心肌细胞缺氧/复氧（hypoxia/reoxygenation,H/R）过程中自噬的影响，并探讨其分子作用机制。方法:利用MIF特异性siRNA瞬时转染H9c2心肌细胞，建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型，给予自噬经典抑制剂3-甲基嘌呤（3-MA），蛋白免疫印迹（Western blot）检测MIF、LC3、Cleaved caspase-3以及mTOR蛋白的表达。 结果:干扰MIF后可抑制H/R诱导的心肌细胞自噬；自噬抑制剂3-MA抑制H/R诱导的心肌细胞自噬，减少细胞凋亡的发生；沉默MIF后可增加H/R过程中p-mTOR的表达。 结论:MIF可通过抑制自噬减少H9c2心肌细胞H/R损伤，其作用机制可能与激活mTOR有关。     

自噬与炎症性肠病关系的研究进展

自噬是由自噬相关基因（autophagy-related genes, ATGs）调控细胞，使细胞内老化、损伤的细胞物质被送到溶酶体内降解和再循环利用，从而维持细胞稳态。炎症性肠病（inflammatory bowel disease, IBD）是一种自身免疫性疾病，而自噬选择性地以细胞内病原体为目标进行破坏的能力被认为是先天免疫反应的一个关键方面。遗传研究表明，几种自噬相关基因在IBD发病机制中具有临床相关性。本文将阐述自噬在IBD中的作用及其临床相关的最新进展，以及以自噬为靶点的IBD治疗策略。     

自噬在肠缺血再灌注损伤中的研究进展

肠缺血/再灌注损伤（intestinal ischemia reperfusion injury, II/RI）是临床常见的病理过程，缺血再灌注导致肠黏膜及远隔器官损伤，诱发全身炎症反应综合征（systemic inflammatory response syndrome, SIRS）和多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome, MODS）。自噬是机体应激条件下的防御调控机制，具有维持细胞质、蛋白质和细胞器稳态的功能。自噬机制复杂，由进化上保守的自噬相关基因 （autophagy-related gene, ATG）编码的蛋白质复合物以及多种信号分子、通路协同调控。研究发现，自噬参与肠缺血再灌注损伤的过程，因此，揭示自噬在II/RI中的作用机制，可为II/RI的防治提供依据。     

黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶途径抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬的研究

目的:探讨黄芪皂苷通过调控蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）途径影响高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞（ARPE-19细胞）自噬水平。方法:体外培养人视网膜色素上皮细胞,实验分为正常对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）,高糖组（30 mmol/L葡萄糖）,黄芪皂苷组（30 mmol/L葡萄糖+2.5、5、10 μg/mL黄芪皂苷）。噻唑蓝比色（MTT）法检测ARPE-19细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹（Western blot）法检测自噬相关蛋白及PERK途径关键因子表达水平。添加PERK特异性抑制剂GSK2606414,Western blot检测对细胞自噬水平的影响。结果:与正常对照组比较,高糖组ARPE-19细胞活性降低,凋亡率升高,自噬相关蛋白LC3表达水平明显升高,另一自噬相关蛋白p62蛋白表达水平明显降低。PERK途径关键因子葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、Perk和增强子结合蛋白的同源蛋白（CHOP）表达水平明显上调,差异具有统计学意义（P＜0.05）。与高糖组比较,黄芪皂苷组ARPE-19细胞活性升高,凋亡率降低,LC3蛋白表达水平明显下调,p62蛋白表达水平明显上调,GRP78、Perk和CHOP蛋白水平明显降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。PERK特异性抑制剂GSK2606414能够进一步抑制黄芪皂苷组ARPE-19细胞LC3蛋白表达水平,上调p62蛋白表达水平,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:黄芪皂苷能够抑制高糖诱导的人视网膜色素上皮细胞自噬水平,其作用机制可能与抑制蛋白激酶R样内质网激酶途径有关。     

PI3K/Akt/FOXO3a信号通路介导的保护性自噬参与肺腺癌获得性顺铂耐药表型重塑

目的：比较顺铂压力下人肺腺癌亲本A549细胞与获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞自噬水平,探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。方法：不同浓度顺铂（cisplatin, DDP）干预亲本A549细胞及获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞,应用CCK-8法比较两株细胞耐药指数、免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）表达水平;应用10 μmol/L顺铂（相当于亲本A549细胞半数抑制浓度,即A549 IC50值）干预A549及A549/DDP细胞,构建细胞应激状态,CCK-8法比较两株细胞生存活力,免疫印迹法比较自噬相关蛋白（Beclin 1、LC3Ⅱ及p62）、凋亡相关蛋白（Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3）、转录因子FOXO3a及其磷酸化蛋白（p-FOXO3a）表达水平,免疫荧光法观察FOXO3a亚细胞定位,并利用自噬晚期抑制剂巴弗洛霉素A1（Baf A1）干预A549及A549/DDP细胞,进一步验证顺铂压力下细胞自噬激活情况;利用蛋白激酶抑制剂干预PI3K/Akt信号通路,免疫印迹法检测顺铂压力下A549及A549/DDP细胞Akt、p-Akt及自噬相关蛋白表达水平,以探寻肿瘤细胞获得性耐药表型重塑的分子机制。结果：与亲本A549细胞相比,获得性顺铂耐药表型的A549/DDP细胞具有更强的顺铂耐药性及较高的基础自噬水平。在10 μmol/L顺铂压力下,A549/DDP细胞存活率明显高于A549细胞;A549细胞中,顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达水平,下调Bcl-2表达、促进Bax及Cleaved Caspase-3活性片段表达增加,诱导细胞凋亡;A549/DDP细胞中,相同浓度的顺铂通过抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调Beclin 1及LC3Ⅱ表达、下调p62表达,促进细胞保护性自噬,使耐药细胞获得生存活性。 结论：顺铂诱导亲本A549细胞凋亡可能与抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,上调转录因子FOXO3a表达有关;A549/DDP细胞顺铂耐药表型的获得可能与顺铂抑制PI3K/Akt/FOXO3a信号通路,抑制FOXO3a磷酸化,上调细胞保护性自噬相关。     

自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用

目的: 探讨自噬在米诺环素保护PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧中的作用。方法: 构建PC12细胞氧糖剥夺-复糖复氧模型,采用米诺环素(MC,1、10、100 μmol/L)或3-甲基腺嘌呤(3-MA,5 mmol/L)进行干预,MTT检测细胞活力,单丹磺酰戊二胺(MDC)染色观察自噬泡,Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白轻链3(LC3Ⅱ)、泛素结合蛋白P62/SQSTM l的表达。结果: 氧糖剥夺处理后,1 μmol/L 和 10 μmol/L的MC能显著提高PC12细胞的存活率,而 100 μmol/L 则会加重细胞的损伤。蛋白LC3Ⅱ和Beclin1的表达与MC的浓度呈正相关性,自噬抑制剂3-MA能够降低LC3Ⅱ和Beclin1,增加P62/SQSTM l的表达逆转MC的保护作用。结论: 低剂量(1、10 μmol/L)MC能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达,诱导PC12细胞产生自噬从而保护氧糖剥夺-复糖复氧处理后的PC12细胞。     

自噬在米诺环素保护大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用研究

目的:探讨自噬在米诺环素保护脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:制备大鼠脑中动脉栓塞(MCAO)模型后,注射米诺环素或3-MA进行干预,对大鼠神经功能进行评分;采用TTC法测定脑梗死体积;透射电镜法观察大脑皮层细胞的超微结构及其自噬小体数目的变化;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ、p62的表达。结果:22.5 mg/kg和45 mg/kg米诺环素组能够显著降低大鼠神经功能评分,减少脑梗死体积,提高LC3Ⅱ和Beclin1的表达,增加p62的降解;高剂量米诺环素（90 mg/kg）组能够进一步提高LC3Ⅱ和Beclin1的表达,然而其大鼠神经功能评分和脑梗死体积却显著增加;自噬小体数也显著增多;当同时给予自噬抑制剂3-MA后,能显著逆转米诺环素（45 mg/kg）的神经保护作用。结论:低剂量米诺环素能够通过增加LC3Ⅱ和Beclin1的表达、促进p62的降解,诱导自噬从而减轻大鼠脑缺血再灌注损伤;而高剂量米诺环素可能是因为其过度激活自噬导致大鼠脑缺血再灌注损伤加重。     

哺乳动物细胞自噬关键节点及相关药物的研究进展

自噬是一种在压力条件下被激活的可降解和循环利用大分子和细胞器的代谢过程。自噬对维持细胞内环境的稳态有重要作用，并与许多疾病尤其是肿瘤的发生发展息息相关，这使得以调控自噬为靶标的新药开发及临床治疗研究越来越受到瞩目。但是，自噬过程的调控机制非常复杂，本文就目前受到关注的涉及自噬信号通路的mTOR、ULK、Beclin-1、Atg12连接系统、LC3脂质化连接系统、p62等关键节点及相关药物研究进展做一介绍。     

热毒宁对流感病毒感染致AECOPD患者呼吸困难评分及氧化应激的作用

目的: 研究热毒宁对慢性阻塞性肺疾病合并流感病毒感染患者呼吸困难评分及氧化应激水平的作用。方法: 选取可疑病毒感染的慢性阻塞性肺病(COPD)门诊患者320例,用RT-PCR方法检测病人痰液中流感病毒。共检出流感病毒阳性者42例,随机分为热毒宁组(接受热毒宁治疗)和对照组。比较治疗后,两组患者呼吸困难评分[呼吸困难表(MRC)和基础呼吸困难指数(BDI)]、诱导痰中氧化应激因子丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及血浆炎症因子(IL-6、IL-8)水平。结果: 治疗后,热毒宁组BDI高于对照组(P<0.05),而两组MRC评分无统计学差异。热毒宁组诱导痰中MDA、SOD 及血浆中IL-8的水平与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论: 热毒宁通过调节氧化应激水平,改善流感病毒感染的慢性阻塞性肺疾病的呼吸困难情况。     

新型冠状病毒肺炎治疗新策略：间充质干细胞疗法

当前新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019, COVID-19）全球蔓延,全球累计确诊超过16 750万例。新型冠状病毒传播具有高传染性,人体感染后具有呼吸道症状、发热、严重呼吸综合征、器官衰竭,甚至死亡。对于COVID-19目前没有特异性治疗方法,大部分治疗方案采用的是对症支持治疗,但是预后差。间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）不仅能够修复损伤的肺组织,还具有调控免疫、抗炎等作用,具有良好的临床应用前景。本文将对MSCs应用于新冠病毒肺炎治疗做一综述,以供同行参考。     

COVID-19免疫相关发病机制与免疫治疗研究进展

新型冠状病毒肺炎（COVID-19）由新型冠状病毒（SARS-CoV-2）引起,肆虐全球。其病情的进展、演变与机体免疫防御功能密切相关,适宜的宿主免疫促进病毒清除,但是免疫失调则影响病毒清除,且引起过度炎症反应而导致免疫病理损伤,使病情恶化。因此,应用针对SARS-CoV-2感染所致的免疫功能紊乱的相关治疗,有望成为治疗COVID-19的有效策略。     

浆细胞样树突状细胞(pDCs)在慢性乙肝中的研究进展

乙型肝炎病毒在体内持续存在的机制复杂,其中机体细胞免疫功能低下是病毒不能有效清除的重要原因。树突状细胞在清除病毒及肿瘤免疫中发挥激活特异性免疫的效应。浆细胞样树突状细胞(pDCs)是树突状细胞的一个亚型,它是体内产生IFN-α的最主要细胞,并放大对病原体的免疫杀伤效应,从而在抗病毒过程中起重要作用。在慢性乙肝患者外周血中pDCs的功能和数量都有所降低,可能与慢性乙型肝炎病毒不能有效清除有关。本文简述了pDCs基本功能及可能参与慢性乙型肝炎的有关机制。     

miR-29a/HMGB1信号通路在高糖高脂诱导的心肌细胞纤维化中的作用

目的：探究miR-29a/HMGB1信号通路在高糖高脂（hyperglycemia and hyperlipidemia, HGHL）诱导的H9C2细胞纤维化过程中的作用。方法：使用含葡萄糖（33 mmol/L）和棕榈酸酯（500 μmol/L）的DMEM培养基干预H9C2细胞24 h用于后续实验。共有8个实验分组,分别为NC组、HGHL组、miR-NC组、mimics组、inhibitor组、pc-HMGB1组、si-HMGB1组和miR-29a mimics+pc-HMGB1组。流式细胞术检测各组H9C2细胞的凋亡率。Western blot实验检测各组H9C2细胞内转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ（PPARγ）和高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的表达量。RT-qPCR检测各组细胞中miR-29a以及TGF-β1、CTGF、MMP-9、PPARγ、HMGB1 mRNA的表达水平。划痕实验检测各组H9C2细胞的迁移能力。结果：HGHL干预后,H9C2细胞的凋亡率显著增加（P<0.05）,细胞迁移能力显著增强（P<0.05）,细胞内TGF-β1、CTGF和MMP-9 mRNA表达水平显著增加（P<0.05）,PPARγ mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）,相应蛋白的表达量也随mRNA的变化发生改变（P<0.05）,此外H9C2细胞内miR-29a的表达水平也显著降低（P<0.05）。转染miR-29a mimics后,H9C2细胞因HGHL干预引起的凋亡率增加受到显著抑制（P<0.05）,细胞的迁移能力也受到显著抑制（P<0.05）,细胞内TGF-β1、CTGF和MMP-9蛋白表达量和mRNA表达水平相较于HGHL组显著降低（P<0.05）,PPARγ蛋白表达量和mRNA表达水平显著增加（P<0.05）。转染miR-29a inhibitor后促进了HGHL诱导的H9C2细胞纤维化过程。miR-29a负调控HMGB1蛋白及其mRNA在H9C2细胞内的表达,双荧光素酶报告基因实验结果显示HMGB1是miR-29a的下游靶基因。转染si-HMGB1与转染miR-29a mimics对HGHL诱导的H9C2细胞纤维化作用类似。同时转染miR-29a mimics与pc-HMGB1对HGHL诱导的H9C2心肌细胞纤维化无显著影响。 结论：HGHL干预后显著增加H9C2细胞的凋亡率,增强其迁移能力和纤维化的过程。同时HGHL干预显著下调miR-29a在细胞内的表达水平,miR-29a通过负调控HMGB1在细胞内的表达进而影响HGHL诱导的H9C2细胞纤维化。     

Sorption of Flu Viruses from Aqueous Media by Composites of Electrically Conducting Polymers: Polyaniline and Polypyrrole

Composites of polymers with conjugated chain structures, polyaniline and polypyrrole, are used as sorbents for human and bird flu viruses. Sorption properties of the composites are compared to characteristics of the initial polymers. It is shown that polymer composites containing metallic silver nanoparticles possess sorption activity, similarly to their composites with polyethylene and the initial polyaniline and polypyrrole. The introduction of silver into polypyrrole resulted in an enhancement of the sorption activity as compared to that of the initial polymer. Nontoxic metal—polymer composites reduce considerably the concentrations of human flu viruses A(H1N1), A(H3N2), and B and bird flu virus A(H5N2) with different structures of surface virion proteins in aqueous media at a sorbent concentration of 10–20 mg/mL in the temperature range from +4 to 37°C.     

自噬在肾间质纤维化小鼠中的表达趋势

目的: 观察肾间质纤维化单侧输尿管梗阻模型（UUO）术后不同时间点自噬的表达趋势。方法: 32只清洁级健康雄性ICR小鼠随机分组：假手术（Sham）组、UUO模型（UUO）组,分别在 UUO术后 3、7、14 d 处死小鼠,假手术组7 d处死,每组小鼠8只。留取血清检测血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）,肾组织行HE和Masson染色,观察光镜病理结果,电镜超微结构观察自噬体的形成,Westernblot检测肾组织LC3蛋白和P62蛋白的表达。结果: UUO术后梗阻侧肾脏皮质变薄,小管萎缩,间质纤维化,单个核细胞浸润,肾小球无明显病变,病理变化以UUO术后14 d最突出。与Sham组相比,LC3-Ⅱ蛋白含量从3 d开始逐渐增高,7 d时达峰值,14 d时下降;而P62与LC3-Ⅱ相反,3 d开始下降,7 d达最低值,14 d又逐渐恢复,表明自噬在7 d这个时间点表达最显著。电镜显示UUO术后7 d出现自噬小体和吞噬泡现象。结论: UUO术后自噬的表达有一定的时间依赖性,在7 d时表达最显著,自噬与病理严重程度不平行。