地塞米松对顺铂诱导的HepG2细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响

目的: 探讨地塞米松对顺铂诱导HepG2细胞凋亡的影响,并观察Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。方法: HepG2细胞与顺铂及不同浓度的地塞米松共培养,RT-PCR检测Bcl-2、Caspase-3的mRNA表达,Western blot检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达,流式细胞术(FACS)检测各组HepG2细胞的凋亡情况。结果: 随着地塞米松浓度的增加,HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达量升高,Caspase-3蛋白表达量下降。同时细胞凋亡率降低。结论: 地塞米松部分通过Bcl-2途径抑制肝癌细胞的凋亡,而Caspase-3又在调控细胞凋亡中起重要作用。     

氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的作用机制

目的: 探讨氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的可能作用机制。方法: 人肺癌细胞株A549和NCI-H460 细胞先加入终浓度IL-1β₁ 1μg/L刺激 24 h,再加入不同浓度氯美昔布继续培养 24 h,采用Western blot 法检测ERK2、p-ERK及Bcl-2表达水平。氯美昔布体外处理A549、NCI-H460后,采用Western blot法检测Bcl-2、Bax表达水平。结果: 氯美昔布作用后肺癌细胞中ERK2及p-ERK的磷酸化水平均下降,并伴有Bcl-2水平的下降,差异有统计学意义(P<0.01)。并且随着氯美昔布浓度的增大, Bcl-2蛋白表达量逐渐下降,而Bax蛋白表达在A549细胞中增强,在NCI-H460细胞中不变,Bcl-2/Bax的比值下降。结论: 氯美昔布诱导肺癌细胞凋亡的机制可能与通过ERK信号转导途径调节肺癌细胞产生Bcl-2,进而诱导Bcl-2/Bax的比值下降有关。     

灯盏乙素抑制过氧化氢诱导PC12 细胞凋亡及机制

目的 观察灯盏乙素对过氧化氢(H2O2) 诱导PC12 细胞凋亡的抑制作用及其作用机制。 方法 采用H2O2 诱导PC12 细胞凋亡模型, 用碘化丙啶(PI) 单染和PI Annexin V 双染检测细胞凋亡, 用DNA 琼脂糖凝胶电泳观察DNA 断裂, 并采用RTPCR检测Bcl-2 mRNA 表达、荧光光度法检测caspase-3 活性。 结果 灯盏乙素可以抑制H2O2 诱导的膜磷脂酰丝氨酸外翻, 增加Bcl-2 mRNA 表达, 减小caspase-3 活性, 并降低DNA 片段化和细胞凋亡率。 结论 灯盏乙素显著抑制H2O2 诱导的细胞凋亡, 其抗细胞凋亡作用可能与其增加Bcl-2表达、抑制caspase-3 活化有关。     

曲格列酮对白血病 NB4 细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的: 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ) 激动剂曲格列酮(troglitazone, TGZ) 对白血病NB4 细胞的增殖抑制作用及其作用机制。方法: 以不同浓度的 TGZ(0~ 80 μmol/L)作用于体外培养的NB4细胞0、24、48、72 h,应用MTT 法检测细胞生长抑制率, Hoechst33258 染色法检测细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡时的 DNA梯状条 带。用免 疫印迹法(Western Blot) 检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖) 聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose) polymerase) ] 表达水平的变化, 并对凋亡调节蛋白 Bax 及 Bcl-2 的表达水平进行检测 。结果: 20 μmol/L 以上的 TGZ 可显著抑制细胞的生长, 在Hoechst 染色后可见典型的细胞凋亡现象, 并呈现出明显的量-效与时-效关系, 药物作用 72 h 后在琼脂糖凝胶电泳上可见明显的DNA 梯 状条 带。Western Blot 检测结 果表 明,Caspase-3 被活化出现 20000 的亚单位, 同时 PARP被裂解出现 89000的亚单位片段。药物作用 48 h后凋亡抑制蛋白 Bcl-2 的表达水平明显降低, 而促凋亡蛋白 Bax 的表达水平显著升高。结论: TGZ能显著抑制 NB4 细胞的生长并诱导细胞发生凋亡, 通过激活 Caspase-3 以及降低 Bcl-2、升高 Bax的表达水平是 TGZ 诱导细胞发生凋亡的重要作用机制 ;这些结果表明 TGZ 是一种潜在的抗白血病药物。     

珠子参总皂苷对H2O2诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用

目的: 观察珠子参总皂苷对H₂O₂诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的抑制作用,并探讨其作用机制。方法: Wistar乳鼠心肌细胞原代培养,用H₂O₂建立氧化应激损伤模型,然后用珠子参总皂苷(100, 200 μg/mL)孵育 24 h后,MTT法检测珠子参总皂苷对细胞活力的影响,流式细胞仪和Hoechst33258染色检测珠子参总皂苷对氧化应激诱导细胞凋亡及胞内ROS含量的影响,比色法测定心肌细胞Caspase-3、Caspase-9的活性,荧光定量PCR测定心肌细胞Bcl-2和Bax mRNA表达,并计算Bcl-2与Bax的比值。结果: 珠子参总皂苷(100, 200 μg/mL)能显著改善心肌细胞活性,有效保护线粒体膜电位的稳定,抑制心肌细胞凋亡和改善细胞形态,降低细胞内活性氧(ROS)含量;下调Bax mRNA表达,上调Bcl-2 mRNA表达及Bcl-2与Bax的比值;降低H₂O₂所致新生大鼠心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的活性。结论: 珠子参总皂苷对H₂O₂诱导心肌细胞凋亡有显著的抑制作用,其机制可能与其稳定心肌细胞膜、清除ROS及调节心肌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3、Caspase-9表达有关。     

硒酸酯多糖诱导白血病多药耐药细胞凋亡的作用机制

目的: 观察硒酸酯多糖(Kappa-selenocarrag-eenan, KSC) 对 K562/ADM 耐药细胞的诱导凋亡效应, 并探讨其作用机制。方法: 应用噻唑蓝(MTT) 比色法、Wright-Giemsa 染色、DNA 琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术(Flow cytometry, FCM) 观察K562/ADM 细胞凋亡;FCM 测定 K562/ADM 细胞 Fas、P53 和 Bcl-2 蛋白表达水平;RT-PCR 检测 Caspase-3 mRNA 的表达。结果: 50 ~ 500 mg°L^-1KSC 抑制 K562/ADM 细胞增殖, 并诱导 K562/ADM 细胞凋亡, 细胞出现呈典型凋亡形态改变, DNA 电泳可见 DNA 梯状条带(DNAladder);FCM 分析出现亚 G 1 期细胞群, S 期细胞比例增高。Fas 蛋白表达上调, Bcl-2 蛋白表达下调,Caspase-3 mRNA 表达显著增强, 但 P53 蛋白表达无明显改变。结论: KSC 通过 Fas 依赖性 Caspase-3 激活途径诱导K562/ADM 细胞凋亡。     

枸杞多糖对顺铂诱导小鼠睾丸支持细胞凋亡的影响

目的：研究枸杞多糖（lycium barbarum polysaccharides, LBP）对顺铂（cis-dichlorodiamineplatinum, CDDP）诱导小鼠睾丸支持细胞（TM4）凋亡的影响并探讨其可能机制。方法：体外培养TM4细胞,四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法检测LBP对CDDP诱导TM4细胞生存率的影响,Western blot检测LBP对CDDP诱导TM4细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果：与Control组相比,CDDP组TM4细胞凋亡显著增加,细胞内抑凋亡基因Bcl-2表达量显著降低,促凋亡基因Bax表达量及Caspase-3表达量显著升高;与CDDP组相比,CDDP+LBP组TM4细胞凋亡显著减少,细胞内抑凋亡基因Bcl-2表达量显著升高,促凋亡基因Bax表达量及Caspase-3表达量显著降低。 结论：LBP作用于CDDP诱导的TM4细胞,能够通过增强细胞内Bcl-2的表达,抑制Bax及Caspase-3的表达来阻抑因CDDP诱导的TM4细胞凋亡,进而减轻CDDP对TM4细胞造成的损伤。     

同源盒基因2在黑色素瘤细胞对于曲美替尼耐药中的作用

目的:研究同源盒基因2（MSX2）在黑色素瘤细胞A375对于曲美替尼耐药中的作用机制。方法:构建曲美替尼耐药的A375细胞株（A375-AR）,曲美替尼干预A375和A375-AR后采用CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。采用小干扰RNA（siRNA）沉默A375-AR中MSX2基因,设计A375、A375-AR、A375-AR-MSX2,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。构建MSX2过表达的A375细胞系（A375-OE）,设置A375、A375-OE和A375-AR组,曲美替尼干预后,CCK-8检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达以及MSX2的表达。结果:A375-AR对1.8 nmol/L的曲美替尼耐药,采用1.8 nmol/L曲美替尼干预后,A375细胞活力和细胞凋亡率显著高于A375-AR,A375细胞中Bcl-2基因表达水平低于A375-AR,而Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达水平高于A375-AR。A375-AR沉默MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著增高,且细胞活力下调,凋亡率上调,细胞中Bcl-2表达下调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达上调。A375过表达MSX2后,细胞对于曲美替尼敏感性显著下调,细胞活力上调,凋亡率下调,细胞中Bcl-2表达上调,Bax、Caspase-3、Caspase-9的表达下调。结论:MSX2基因可以诱导黑色素瘤细胞对于曲美替尼的耐药,是治疗黑色素瘤耐药的潜在靶点。     

顺铂对人肺腺癌细胞作用与ERCC1、Bcl-2表达的相关性研究

目的: 探讨ERCC1、Bcl-2表达与顺铂作用的关系,进而推测ERCC1、Bcl-2在顺铂耐药中的作用。方法: 选择人肺腺癌细胞A549及其耐DDP细胞株A549/DDP作为研究对象,采用MTT法检测A549/DDP细胞耐药指数;免疫细胞化学方法、RT-PCR方法检测不同浓度、不同作用时间干预后细胞中ERCC1、Bcl-2的表达。结果: 10 μg/mL DDP作用 12 h,A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA表达开始增高,随着作用时间的延长,ERCC1、Bcl-2 mRNA的表达逐渐增高,在 72 h 表达最强。浓度为 5 μg/mL 的DDP即可刺激A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA表达水平上升,随着DDP浓度的增加,其表达水平逐渐上升,ERCC1民mRNA表达水平在 20 μg/mL 组达到高峰。与亲本细胞相比,A549/DDP中ERCC1、Bcl-2表达明显增高。结论: 随着顺铂作用时间的延长和浓度的增加,A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达量增加,推测ERCC1、Bcl-2 可能参与了顺铂继发耐药的形成。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell, HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法: 培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10^-6、10^-7、10^-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达。结果: 在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成; 西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达。结论: 西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

肉桂油活性成分(E)-肉桂醛对结肠癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨肉桂油主要活性成分(E)-肉桂醛对人结肠癌LOVO细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。方法:采用CCK-8法测定(E)-肉桂醛对LOVO细胞增殖活性的影响。平板克隆形成实验检测(E)-肉桂醛对LOVO细胞克隆形成能力的影响。AnnexinV-PE/7-AAD双染色法测定(E)-肉桂醛对细胞凋亡的影响。Western blot分析细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平。结果:(E)-肉桂醛能显著抑制结肠癌细胞LOVO的增殖活力和克隆形成能力(P<0.05)，且细胞增殖抑制作用随时间的延长和剂量的增加而增强。与对照组相比(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后，细胞凋亡率升高(P<0.05)。Western blot检测结果显示(E)-肉桂醛作用LOVO细胞48 h后Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.05)，Bax、Caspase-3表达水平明显增高(P<0.05)。结论:(E)-肉桂醛能抑制结肠癌细胞增殖并诱导凋亡，其机制可能是通过增加Bax、Caspase-3的活性及抑制Bcl-2的表达来实现的，(E)-肉桂醛是一种具有发展潜力的抗结肠癌药物。     

苦瓜蛋白对A549 肺癌细胞的抑制作用及其对MAPK 信号通路的影响

目的 观察苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A₅₄₉细胞的生长抑制及促凋亡作用;探讨苦瓜蛋白对A₅₄₉ 细胞p42/44-MAPK 及其磷酸化p42/44-MAPK蛋白表达水平的影响及其作用分子机制。方法 以不同浓度梯度的苦瓜蛋白处理A₅₄₉ 细胞, 分别作用不同时间,CCK-8 检测其对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡。提取苦瓜蛋白不同作用时间点的全细胞蛋白, western blot 检测p42/44-MAPK 及p-p42/44-MAPK 信号分子的变化。结果 苦瓜蛋白对A₅₄₉ 细胞生长具有明显抑制作用, 可显著地诱导A₅₄₉ 细胞凋亡。与阴性对照比较, 苦瓜蛋白可以不同程度下调p42/44-MAPK 及p-p42/44-MAPK 信号分子的表达(P <0.05)。结论 苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A₅₄₉ 细胞具有明显地抑制作用及抗肿瘤作用, 其作用可能通过诱导A₅₄₉ 细胞凋亡来实现;苦瓜蛋白可以不同程度地下调p42/44-MAPK 和磷酸化p42/44-MAPK 的表达;MAPK 信号通路可能部分参与了苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制, 驱使肿瘤细胞发生凋亡。     

青蒿琥酯诱导肿瘤细胞凋亡与抑制存活蛋白表达有关

目的 探讨青蒿琥酯(artesunate, Art)诱导肿瘤细胞凋亡与存活蛋白(survivin protein)表达的关系。 方法 采用细胞荧光染色、流式细胞术、琼脂糖凝胶电泳法和测定细胞浆Caspase-3 的活性等手段检测肿瘤细胞暴露于不同浓度的Art 时, 对肿瘤细胞凋亡的诱导作用;用RT-PCR、Western Blotting 法,检测不同浓度的Art 作用于肿瘤细胞时, 对survivinmRNA 和survivin 蛋白表达的影响。 结果 HL60 细胞暴露于Art 时, 呈现典型细胞凋亡特征, 如:胞核固缩、形成凋亡小体;凋亡细胞的比例呈浓度依赖性增高;琼脂糖电泳出现明显的“ 梯状” 条带;细胞浆Caspase-3 的活性呈浓度依赖性增高等。RT-PCR 检测表明, A549 细胞暴露于Art 10 和50 g·L^-1 72 h后, survivin mRNA 的表达呈浓度依赖性降低, 对照组、10 和50 mg·L^-1 处理组的survivin 条带和内标GAPDH 条带灰度的比值分别为1.745、0.390 和0.023;Western Blotting 法也检测到Art 抑制Survivin蛋白的表达。 结论 Art诱导肿瘤细胞发生凋亡, 激活Caspase-3 途径, 可能与抑制survivin 基因表达有关。     

华蟾素对肺癌NCI-A549移植瘤裸鼠的抑制作用及机制研究

目的: 研究华蟾素抗肺癌细胞NCI-A549的抗肿瘤活性及机制。方法: 40只小鼠被随机分为4组：正常组、模型组、华蟾素组和顺铂组,检测各组小鼠的体质量变化、抑瘤率、血液和肝肾功能,应用Western blot分析凋亡相关蛋白表达情况。结果: 华蟾素可显著抑制A549移植瘤的生长,对小鼠血液及肝肾功能无明显影响,各组抑瘤率分别为58.0%和82.3%,Western blot结果显示华蟾素可以显著上调Bax/Bcl-2的表达,促进cleaved-Casp3和cleaved-PARP的表达并抑制p-AKT(ser473)的表达。结论: 华蟾素可以显著抑制肺癌A549移植瘤的生长,其分子机制可能与抑制PI3K/AKT通路的活化,从而促进肿瘤细胞凋亡相关。