Bay117802 抑制羟基喜树碱诱导的人乳腺癌Bcap37 细胞凋亡

目的: 探讨IκB-α磷酸化抑制剂Bay117082 特异性阻断NFκB 信号转导途径对羟基喜树碱(HCPT)诱导Bcap37 细胞凋亡的影响。方法: 采用MTT 法测定细胞的增殖活力;琼脂糖凝胶电泳观察细胞调亡;Western blot 研究细胞调亡所涉及的蛋白表达;DIGEMSA研究NFκB /DNA 结合状况。结果: 5 μmol·L^-1 Bay117082 可以抑制HCPT 对IκB-α的磷酸化, 阻断NFκB 信号转导途径, 阻滞HCPT 诱导的细胞凋亡,同时也抑制HCPT 诱导pro-Caspase3 和Bcl-2 的降解。结论: Bay117082 对HCPT 诱导的乳腺癌细胞凋亡有明显的抑制作用, 其作用机制与NFκB 信号转导途径有关, NFκB 起促进凋亡的作用。     

TNF-α对人肺癌A549 细胞凋亡的影响

目的: 探讨TNF-α对人肺癌A549 细胞凋亡的影响;方法:培养人肺癌A549 细胞,与TNF-α(10 、100U·ml^-1)共孵育,通过Western blot 分析P53 蛋白表达的变化,同时利用Annexin V/PI 双染色流式细胞仪,检测人肺癌A549 细胞凋亡率的变化。结果: 与空白组相比,TNF-α组的P53 蛋白表达明显升高,且细胞凋亡率也明显升高,分别为1.22±0.62 和1.65±0.38(P<0.01)。结论: TNF-α可以诱导人肺癌A549 细胞凋亡,从而可能起到抗肿瘤的疗效。     

生长相关癌基因α在大鼠哮喘中的表达意义及地塞米松对其的影响

目的: 观察大鼠哮喘生长相关癌基因α(GROα)蛋白的表达水平及地塞米松对其的影响,探讨GROα和中性粒细胞(PMN)的相关性。方法: 采用大鼠哮喘模型,随机分成哮喘组、正常对照组、地塞米松治疗组,分离纯化血PMN,免疫组化法测定支气管腔和血PMN中GROα蛋白的表达水平,计数肺组织PMN数目。结果: 哮喘组(0.138±0.009,OD值)和地塞米松治疗组(0.105±0.012,OD值)支气管腔的GROa蛋白的平均吸光度值均显著高于正常对照组(0.077±0.010,OD值)(P<0.01),地塞米松治疗组GROa蛋白的平均吸光度值显著低于哮喘组(P<0.01)。哮喘组(0.211±0.017,OD值)和地塞米松治疗组(0.128±0.012,OD值)血PMN的GROα蛋白的平均吸光度值均显著高于正常对照组(0.081±0.008,OD值)(P<0.01),地塞米松治疗组GROα蛋白的平均吸光度值显著低于哮喘组(P<0.01)。三组PMN计数两两比较差异均存在显著统计学意义,正常对照组(7±2)<哮喘组(26士6)<地塞米松治疗组(202±30)(P<0.05或P<0.01)。GROα蛋白的表达水平与肺组织PMN计数在哮喘组和正常对照组中呈显著正相关(n=19,r=0.865,K0.01)。结论: 哮喘时支气管腔和PMN的GROa蛋白的表达水平及肺组织PMN计数增加,它们参与了哮喘发病的炎症过程;地塞米松部分通过抑制GROa蛋白的表达从而减轻气道炎症,但能加剧PMN在肺组织中聚集;GROa蛋白可能与PMN在肺组织中聚集密切相关。     

miR-142-5p通过DNA甲基转移酶1抑制胃癌细胞增殖迁移的机制研究

目的:探究miR-142-5p在胃癌（GC）细胞中的作用并研究其机制。方法:qRT-PCR检测miR-142-5p表达;CCK-8和Transwell实验研究miR-142-5p对细胞增殖及迁移的影响;双荧光素酶报告基因和Western blot验证miR-142-5p的作用靶点。结果:miR-142-5p在GC组织及细胞系中的表达分别低于人正常胃组织及胃正常上皮黏膜细胞系GES-1,且其表达水平与胃癌肿瘤大小及淋巴结转移密切相关。在MKN28细胞中过表达miR-142-5p及在BGC-823细胞中沉默miR-142-5p能够分别抑制及促进胃癌细胞的增殖和迁移。DNA甲基转移酶1（DNMT1）是miR-142-5p直接作用靶点,miR-142-5p能够直接调节DNMT1的表达,并通过DNMT1调控胃癌细胞增殖及迁移。结论:miR-142-5p在GC中的表达降低,并在胃癌细胞中发挥抑癌基因的作用,能够通过抑制DNMT1来抑制胃癌细胞的增殖和迁移。     

低温时蛙皮素对 IL-1β致热大鼠下丘脑和血浆 cAMP含量的影响

目的: 以大鼠为实验对象建立发热动物模型,研究 4 ℃时蛙皮素的降温作用及其与 cAMP的关系。方法: 选择 SD雄性大鼠,4 ℃下侧脑室微量注射蛙皮素、白细胞介素-1β,观察大鼠体温变化情况,并测定下丘脑和血浆中 cAMP含量。结果: 在 IL-1β诱导发热大鼠中,下丘脑及血浆中 cAMP含量与对照组相比升高(P<0.01);蛙皮素可以降低大鼠正常体温,下丘脑 cAMP含量与对照组相比亦随之降低(P<0.01);预先侧脑室注射蛙皮素能翻转大鼠IL-1β性发热,且下丘脑 cAMP含量与 IL-1β组相比明显下降(P<0.01) 。结论: 4 ℃时蛙皮素能抑制IL-1β发热,其机制有可能是通过抑制 cAMP合成或释放实现的。     

miR-423-5p靶向水通道蛋白1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎AR42J细胞损伤的影响

目的:研究miR-423-5p对雨蛙肽诱导的胰腺AR42J细胞损伤的影响及其分子作用机制。方法:通过雨蛙肽处理AR42J细胞建立胰腺炎损伤模型,qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-423-5p的表达,Western blot检测水通道蛋白1（aquaporin 1,AQP1）、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达,ELISA法检测培养上清中IL-6和TNF-α的分泌水平,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-423-5p与AQP1间的调控关系。结果:在雨蛙肽诱导的AR42J细胞中miR-423-5p表达上调,AQP1表达下调;抑制miR-423-5p和过表达AQP1均可减轻雨蛙肽诱导的AR42J细胞损伤,抑制细胞凋亡;双荧光素酶报告系统结果显示miR-423-5p靶向负调控AQP1的表达;抑制AQP1逆转了抑制miR-423-5p对雨蛙肽诱导的胰腺AR42J细胞损伤的作用。结论:miR-423-5p通过靶向AQP1减轻雨蛙肽诱导的胰腺AR42J细胞损伤,抑制细胞凋亡。     

靶向作用TIMP-2调控人卵巢颗粒细胞的增殖能力

目的:探讨miR-106a对人卵巢颗粒细胞(KGN)增殖能力的调节作用,并初步探讨其可能的作用靶点。方法:采用细胞转染法调控miR-106a在颗粒细胞中的表达,RT-PCR法检测其表达水平。采用MTT法检测细胞的增殖活性,生物信息学预测miR-106a可能的靶基因并采用双荧光素酶实验验证,Western blot法检测靶蛋白的表达。结果:miR-106a在KGN细胞中表达显著高于正常卵巢上皮细胞(IOSE80),差异有统计学意义(P<0.05),抑制miR-106a表达后KGN细胞的增殖活性显著降低(P<0.05),双荧光素酶实验结果证实miR-106a可直接靶向作用于TIMP-2基因,Western blot结果显示过表达miR-106a后TIMP-2蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。结论:miR-106a可促进KGN细胞的增殖,与靶向降低TIMP-2表达水平有关。     

黄芪总提物对肝癌细胞生长、甲胎蛋白分泌及γ-GT 活性的影响1

目的 研究黄芪总提物(TEA) 对肝癌细胞生长、甲胎蛋白(AFP) 分泌及γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)活性的影响。方法 以两种人肝癌细胞株HepG2 细胞和Bel-7404 细胞分别与TEA(5 ~ 160 mg · L^-1)共培养6 d, 利用MTT 比色、ELISA 及细胞分化检测等方法。结果 TEA(5 ~ 160 mg ·L^-1)可抑制两种人肝癌细胞增殖, 并且明显降低HepG2 细胞高水平分泌AFP 。T EA(20、40 和80 mg ·L^-1)可抑制肝癌HepG2 细胞的γ-GT 活性, 升高白蛋白(ALB) 含量。TEA(40 和80 mg · L^-1)亦可抑制肝癌Bel-7404 细胞的γ-GT 活性, 并升高ALB 含量。结论 TEA 具有抑制肝癌生长、AFP分泌及γ-GT 活性的作用。     

miR-1-3p/206/613对LXRα和OATP1B1蛋白表达的影响及其机制研究

目的: 探究miR-1-3p、miR-206和miR-613对肝X受体α (LXRα)和有机阴离子转运多肽1B1（OATP1B1）蛋白表达及OATP1B1转运能力的影响及其机制研究。方法:通过生物信息学数据库预测可靶向作用于LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR的miRNAs;采用RT-qPCR、Western blot方法检测miR-1-3p/206/613及LXRα和OATP1B1 蛋白水平;采用LC-MS/MS方法检测HepG2细胞中瑞舒伐他汀（RSV）的含量;应用双荧光素酶报告基因法,研究miR-1-3p/206/613影响LXRα和OATP1B1表达的分子机制。结果: 预测结果表明miR-1-3p/206/613与LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR互补配对,且具有较高的特异性、保守性及结合稳定性。与对照组相比,miR-1-3p/206/613 mimics能明显下调HepG2细胞中LXRα蛋白表达水平16.5%、16.0%、25.1%,OATP1B1蛋白30.4%、30.5%、44.4%;相反,miR-1-3p/206/613 inhibitors明显上调LXRα蛋白表达水平13.3%、13.3%、16.0%,OATP1B1蛋白25.0%、25.6%、30.4%。当RSV浓度为5、60、125 μmol/L时,miR-1-3p/206/613 mimics显著减少HepG2细胞对RSV的摄取至对照组的0.50、0.19、0.30倍,0.49、0.24、0.23倍和0.64、0.48、0.31倍;与之相反,miR-1-3p/206/613 inhibitors上调1.26、1.59、2.07倍,1.97、2.44、2.63倍,2.22、2.86、2.93倍。与对照组相比,miR-1-3p/206/613 mimics或miR-1-3p/206/613 inhibitors,pGL/LXRα-WT报告基因荧光素酶活性分别下降38.5%、32.5%、32.8%或升高137.0%、75.8%、55.7%,而pGL/LXRα-Mut报告基因荧光素酶活性未见明显改变;同上,pGL/OATP1B1-WT报告基因荧光素酶活性下降24.3%、28.9%、32.1%或升高33.5%、48.3%、61.6%,而pGL/OATP1B1-Mut报告基因荧光素酶活性也未见明显改变。结论: miR-1-3p/206/613既可通过直接靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR而调控OATP1B1的蛋白表达和转运功能,也可通过靶向作用于LXRα mRNA 3'-UTR而发挥间接调控作用。     

雌激素对培养大鼠皮质神经元细胞β淀粉样蛋白(25-35)损伤的保护作用

目的: 研究雌激素对β 淀粉样蛋白(β-amyloidprotein, Aβ) 诱导的大鼠神经细胞损伤的影响。方法: 通过相差倒置显微镜、Giemsa 染色及乳酸脱氢酶(lactate dehydrohenase, LDH) 释放率的测定。观察17β-雌二醇(17β-estradiol, 17β-E2) 对Aβ(25-35) 诱导的大鼠皮质神经元细胞损伤的影响。结果: Aβ(25-35) 可以诱导大鼠皮质神经元细胞损伤, 17β-E2 预处理48 h 显著抑制Aβ(25-35) 诱导的大鼠皮质神经元细胞损伤。结论: Aβ 对大鼠皮质神经元细胞有毒性作用, 雌激素可以抑制Aβ 诱导的大鼠皮质神经元细胞损伤, 雌激素具有神经保护作用。     

下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响

目的：研究下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响及机制。方法：qRT-PCR方法测定正常支气管上皮16HBE细胞和肺癌A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176的表达。将A549/DDP细胞分成对照组、si-NC组、si-LINC00176组、si-LINC00176+Anti-miR-NC组、si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组。MTT实验检测顺铂对A549/DDP的半数抑制浓度（IC50）。流式细胞术测定细胞凋亡。Western blot测定LC3-I、LC3-II、Beclin 1、C-Caspase-3蛋白表达。利用荧光素酶报告系统鉴定LINC00176和miR-138-5p的靶向关系。结果：与16HBE细胞比较，A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176表达水平显著升高（P<0.01）。与A549细胞比较，A549/DDP细胞中LINC00176表达水平显著升高（P<0.01）。与对照组、si-NC组比较，si-LINC00176组A549/DDP细胞IC50显著降低（P<0.01），LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著降低（P<0.01），凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达、miR-138-5p表达水平显著升高（P<0.01）。LINC00176与miR-138-5p直接结合。与si-LINC00176+Anti-miR-NC组比较，si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组A549/DDP细胞IC50显著升高（P<0.01），LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著升高（P<0.01），凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达显著降低（P<0.01）。 结论：下调lncRNA LINC00176通过靶向上调miR-138-5p能够抑制肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药，抑制细胞自噬，诱导细胞凋亡。     

益气活血汤通过miR-21/PTEN信号通路抑制肺癌细胞恶性生物学行为

目的:探讨益气活血汤(Yiqi Huoxue decoction)对肺癌细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制。方法:以不同浓度益气活血汤含药血清(5%、10%、15%)处理人肺癌A549细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法、Transwell小室实验、流式细胞术、Western blot法和定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法研究益气活血汤含药血清对细胞增殖、迁移和侵袭能力、细胞凋亡、第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)蛋白和miR-21表达的影响。结果:与无药血清组相比较,不同剂量的益气活血汤含药血清处理后,A549细胞存活率降低、迁移和侵袭能力下降;细胞凋亡率上升、细胞内PTEN mRNA及其蛋白表达增加、miR-21表达下降,且10%含药血清组的效果最佳。转染miR-21 mimics后,A549细胞中miR-21表达上调,PTEN蛋白表达下调;10%含药血清处理后PTEN蛋白表达上调。结论:益气活血汤可有效抑制人肺癌A549细胞恶性细胞生物学行为,且可能与miR-21/PTEN信号通路的调控有关。     

miR-195-5p通过靶向调控FBXW7基因对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞损伤的影响研究

目的：探讨miR-195-5p对氧化型低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）损伤的影响及其作用机制。方法：RT-PCR检测miR-195-5p在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中的表达;CCK-8、ELISA和流式细胞仪分别检测细胞增殖、氧化应激和凋亡;双荧光酶素报告分析实验检测miR-195-5p的潜在作用靶点;Western blot检测靶蛋白在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中的表达及其与miR-195-5p表达之间的关系。结果：miR-195-5p在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中的表达显著高于正常HUVECs细胞。随后,在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中沉默miR-195-5p能有效促进HUVECs细胞增殖,并抑制氧化应激因子［丙二醛（malondialdehyde, MDA）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）］表达和凋亡水平。双荧光酶素实验和Western blot结果分别显示miR-195-5p可以直接靶向FBXW7蛋白基因并负调控FBXW7的表达。最后,miR-195-5p能通过调节FBXW7的表达影响ox-LDL诱导的HUVECs细胞增殖、氧化应激和凋亡。 结论：miR-195-5p在ox-LDL诱导的HUVECs细胞中高表达。此外,miR-195-5p能通过抑制FBXW7的表达来加剧ox-LDL诱导的HUVECs细胞毒性、氧化应激和凋亡损伤。     

结肠癌患者血清中miR-186-5p表达的研究

目的：探讨miR-186-5p在结肠癌中的表达及其对于结肠癌的影响,为结肠癌的治疗和预后治疗提供新的治疗靶点。方法：收集本院符合条件的病人血清样本,分为健康组、临床I、II、III、IV期5个组别（n=20）,利用miRVana microRNA分离试剂盒提取病人血清中的miRNA,利用荧光实时定量PCR检测miR-186-5p在不同阶段结肠癌病人血清中表达的差异。将miR-186-5p的全长基因克隆到pENTR/D-Topo载体,构建miR-186-5p高表达的细胞系,利用miR-186-5p抑制剂,降低miR-186-5p表达。利用细胞增殖ELISA试剂盒,将5×103/孔的细胞接种到96孔板中,孵育24 h后加入BrdU标记24 h,在370和492 nm测定吸光度,测定miR-186-5p对肿瘤细胞增殖的影响。用MTT法检测miR-186-5p对结肠癌细胞系对化疗药物敏感性的影响。结果：结肠癌病人血清中miR-186-5p呈低表达状态,与正常组相比,临床I、II、III、IV期病人血清中miR-186-5p表达明显减少（P<0.01）。利用质粒构建miR-186-5p高表达的细胞系,利用miR-186-5p抑制剂（hsa-miR-186-5p inhibitor）降低SW480、HCT116两种细胞内miR-186-5p的表达。与对照组相比,过表达miR-186-5p的HCT116细胞和SW480细胞增殖能力减弱,说明miR-186-5p表达增多抑制了HCT116细胞和SW480细胞的增殖。miR-186-5p抑制剂处理后,与对照组相比,HCT116细胞和SW480细胞的增殖能力均升高,说明miR-186-5p表达降低可以增加HCT116细胞和SW480细胞的增殖。不同浓度顺铂处理24 h后,高表达miR-186-5p的HCT116和SW480细胞死亡率均高于对照组（P<0.01）,miR-186-5p表达降低后,死亡率低于对照组（P<0.01）。在miR-186-5p高表达的结肠癌细胞系中,PLK1蛋白表达降低,而抑制miR-186-5p表达后,PLK1蛋白表达升高。 结论：结肠癌患者中miR-186-5p表达降低,过表达miR-186-5p可以抑制结肠癌细胞增殖生长,并降低结肠癌细胞的耐药性,抑制miR-186-5p表达可以增加结肠癌细胞增殖,并增强细胞的耐药性。     

超声-微泡介导的microRNA-449a通过调节Notch1对肺癌细胞的生长抑制作用

目的:基因加载的微泡（MBs）与超声结合可以提高递送效率，是一种较好的基因传递方法。本实验旨在研究超声-微泡介导的microRNA（miR）-449a通过靶向Notch1对肺癌细胞的影响。方法:检测miR-449a在肺癌组织，癌旁组织，肺癌细胞系和肺上皮细胞中的表达，并分析其与肺癌患者临床特征的关系。进行功能研究以探测miR-449a和超声-微泡介导的miR-449a在肺癌中的作用。应用RT-qPCR、Western blot分析来验证miR-449a，Notch1，增殖和凋亡相关蛋白的水平。结果:在肺癌中观察到miR-449a表达下降。miR-449a的过表达抑制了肺癌细胞增殖，促进了G2/M期阻滞和细胞凋亡。超声-微泡介导的miR-449a增强了miR-449a对细胞生长和抗凋亡的抑制作用。miR-449a通过靶向Notch1抑制肺癌细胞活性。结论:miR-449a过表达抑制肺癌细胞生长，超声-微泡介导的miR-449a增强了miR-449a对肺癌的抑制作用。该研究可能为肺癌治疗提供新的方向。     

生存素反义寡核苷酸诱导HL-60 细胞凋亡的实验研究

目的: 探讨特异性靶向生存素的反义寡核苷酸(ASODN) 对急性早幼粒细胞系HL-60 细胞凋亡的影响。方法: 应用四唑盐(MTT) 比色法分析细胞增殖;倒置显微镜观察细胞形态学变化;原位末端标记(TUNEL) 法检测细胞凋亡指数(AI);流式细胞术(FCM) 定量检测细胞凋亡;RT-PCR 半定量检测生存素mRNA 的表达。结果: 5～20 μmol·L^-1生存素ASODN 对HL-60 细胞增殖均有抑制作用, 且呈时间和剂量依赖性。ASODN 组凋亡率和生存素基因表达抑制率明显高于对照组。结论: 生存素ASODN 能有效抑制HL-60 细胞生存素mRNA 的表达并诱导细胞凋亡, 表明生存素对维持肿瘤细胞的增殖具有非常重要的作用。     

白藜芦醇通过miR-937/FOXQ1信号通路抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖

目的:研究白藜芦醇（RES）对视网膜母细胞瘤Y79细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法:CCK-8方法和流式细胞术分析细胞增殖和凋亡情况;TargetScan软件预测miR-937与叉头框蛋白Q1（FOXQ1）之间的关系,并采用双荧光素酶报告基因系统检测它们之间的相互作用;miR-937和FOXQ1 mRNA和蛋白表达水平分别采用逆转录-定量聚合酶链反应法（RT-qPCR）和Western blot法检测。结果:RES抑制Y79细胞增殖,诱导其凋亡;视网膜母细胞瘤细胞系中miR-937表达水平较正常组织明显降低,而RES可明显诱导Y79细胞中miR-937表达;FOXQ1可以与miR-937直接相互作用,且其表达水平与miR-937呈负相关性;视网膜母细胞瘤细胞系中FOXQ1表达水平较正常细胞明显增高,而RES可明显抑制Y79细胞中FOXQ1表达;与RES单纯处理组相比,RES+miR-937 inhibitor组明显降低miR-937表达,促使了FOXQ1表达,诱导Y79细胞增殖,并降低其凋亡。结论:RES通过上调miR-937水平降低FOXQ1表达,进而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖、诱导其凋亡,提示miR-937/FOXQ1信号通路可能是视网膜母细胞瘤治疗的新靶标。