金雀异黄素通过调控miR-27a及其靶基因对卵巢癌细胞SKOV3生长的影响

目的: 研究金雀异黄素对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用及其可能的机制。方法: 收集卵巢癌组织及良性组织,应用RT-PCR法检测miR-27a的表达。用不同浓度的金雀异黄素处理细胞,通过SRB法检测金雀异黄素单用或加入miR-27a mimics后对细胞株生长的抑制作用;经RT-PCR和Western blot检测miR-27a及靶基因Sprouty2表达的变化。结果: miR-27a在卵巢癌组织中的表达高于良性组织(P<0.05)。金雀异黄素可呈浓度和时间依赖的方式抑制卵巢癌细胞SKOV3生长;金雀异黄素浓度依赖性地下调miR-27a,上调Sprouty2的表达,且miR-27a mimics能够部分拮抗金雀异黄素抑制细胞生长的作用。结论: 金雀异黄素可能通过下调致癌miR-27a的表达,发挥抑制卵巢癌细胞生长的作用。     

妊娠期糖尿病中患者miR-138-5p通过调控缺氧诱导因子1α保护β细胞功能

目的:探讨在妊娠期糖尿病(GDM)患者中miR-138-5p对胰岛β细胞功能的影响及其相关作用机制。方法:通过RT-qPCR对比15例GDM患者与15例的正常健康孕妇外周血中miR-138-5p的表达差异;miR-138-5p mimic及inhibitor分别转染入β细胞系INS-1细胞中,过表达或抑制其在该细胞中的表达水平,并通过RT-qPCR验证转染效率;利用MTT增殖实验、Annexin V-FITC凋亡实验及胰岛素释放实验分别检测miR-138-5p对INS-1细胞的增殖、凋亡和胰岛素释放能力的影响;通过miRNA靶基因预测软件TargetScan筛选miR-138-5p的目标靶基因,并利用双荧光素酶基因报告及Western blot实验进行验证;功能挽救实验证实miR-138-5p是否通过靶向调控其目标基因而发挥对INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力影响;Western blot实验检测miR-138-5p在INS-1细胞中作用的分子信号通路。结果:与正常健康孕妇相比,GDM患者外周血中miR-138-5p的表达显著低表达;在INS-1细胞中转染miR-138-5p mimic及inhibitor后可显著促进或抑制miR-138-5p的表达;过表达miR-138-5p可明显促进INS-1细胞的增殖,抑制其发生凋亡并促进细胞对胰岛素的释放能力;而下调miR-138-5p的表达,可显著抑制INS-1细胞的增殖,促进其发生凋亡及抑制细胞的胰岛素释放能力;通过miRNA靶基因预测软件TargetScan筛选缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)为miR-138-5p的目标靶基因,双荧光素酶基因报告实验及Western blot实验提示miR-138-5p可抑制INS-1细胞中HIF-1α的表达;功能挽救实验证实miR-138-5p通过调控HIF-1α的表达,影响INS-1细胞的增殖、凋亡及胰岛素释放能力;Western blot实验明确miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,影响PI3K/AKT信号通路中PI3K、AKT及其磷酸化后的p-PI3K、p-AKT蛋白而发挥对INS-1细胞的作用。结论:在GDM患者中,miR-138-5p可能通过靶向调控HIF-1α的表达,进而影响PI3K/AKT信号通路,促进β细胞的增殖、抑制其凋亡,并促进其胰岛素释放能力从而保护β细胞的功能。     

胰岛素受体底物1低表达促进头颈部鳞状细胞癌的侵袭转移

目的: 研究胰岛素受体底物1(insulin receptor substrate 1, IRS-1)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)侵袭转移中的作用及其可能的机制。 方法: 应用定量RT-PCR法检测HNSCC患者淋巴结转移灶和原发灶癌组织中IRS-1 mRNA的表达,以及不同转移能力头颈部肿瘤细胞株上IRS-1 mRNA的表达。用Taqman探针法检测miR-9及U6的相对表达量。利用小干扰RNA技术阻抑IRS-1表达,肿瘤细胞侵袭实验检测IRS-1干扰前后对细胞侵袭能力的影响。用定量RT-PCR和Western blot检测上皮-间叶转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的标志物E-cadherin及vimentin mRNA和蛋白的表达;用SRB法检测细胞存活率。 结果: (1)HNSCC患者淋巴结转移灶中IRS-1 mRNA的表达低于原发灶(P<0.05);高转移性HNSCC细胞株中IRS-1 mRNA的表达低于低转移性细胞株(P<0.05)。(2)下调IRS-1表达,肿瘤细胞的侵袭能力增强,上皮-间叶转化标志物E-cadherin表达下降,同时伴有miR-9表达的升高。 结论: IRS-1低表达可能通过上皮-间叶转化和上调miR-9而增强细胞的侵袭能力,促进HNSCC的转移。     

西红花酸对乙醛诱导的肝星状细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 探讨西红花酸(Crocetin)对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞(Hepatic stellate cell, HSC)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法: 培养大鼠肝星状细胞HSC-T6,建立乙醛诱导的HSC纤维化模型;用不同浓度的西红花酸(10^-6、10^-7、10^-8 mol/L)对乙醛刺激的HSC-T6进行处理,MTT法检测细胞增殖;羟脯氨酸测定检测HSC-T6胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞凋亡;Western blot检测细胞ERK1/2、Bax、Bcl-2蛋白的表达;RT-PCR检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的基因表达。结果: 在一定浓度范围里,西红花酸能抑制乙醛引起的HSC增殖和胶原合成; 西红花酸诱导乙醛刺激的HSC细胞凋亡;西红花酸能增加Bax蛋白表达,降低乙醛刺激升高的ERK1/2、Bcl-2蛋白表达;西红花酸能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP-1的表达,提高MMP-2的表达。结论: 西红花酸通过抑制乙醛诱导的HSC增殖和胶原合成以及促进活化的HSC凋亡起到抗肝纤维化作用,其机制可能与ERK信号传导通路和对基质金属蛋白酶的调节有关。     

益气活血汤通过miR-21/PTEN信号通路抑制肺癌细胞恶性生物学行为

目的:探讨益气活血汤(Yiqi Huoxue decoction)对肺癌细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制。方法:以不同浓度益气活血汤含药血清(5%、10%、15%)处理人肺癌A549细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法、Transwell小室实验、流式细胞术、Western blot法和定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法研究益气活血汤含药血清对细胞增殖、迁移和侵袭能力、细胞凋亡、第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)蛋白和miR-21表达的影响。结果:与无药血清组相比较,不同剂量的益气活血汤含药血清处理后,A549细胞存活率降低、迁移和侵袭能力下降;细胞凋亡率上升、细胞内PTEN mRNA及其蛋白表达增加、miR-21表达下降,且10%含药血清组的效果最佳。转染miR-21 mimics后,A549细胞中miR-21表达上调,PTEN蛋白表达下调;10%含药血清处理后PTEN蛋白表达上调。结论:益气活血汤可有效抑制人肺癌A549细胞恶性细胞生物学行为,且可能与miR-21/PTEN信号通路的调控有关。     

Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用

目的: 建立胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株,研究Oct-4基因在胃癌顺铂耐药中的作用。方法: 使用顺铂逐步增加剂量法诱导胃癌BGC-823细胞,以建立其多药耐药细胞株BGC-823/DDP;MTT细胞毒实验检测顺铂对肿瘤细胞的细胞毒作用;半定量RT-PCR检测Oct-4基因的表达;基因转染干扰Oct-4表达;Western blot实验检测Oct-4蛋白的表达改变。结果: 经过30~34周的诱导我们建立了胃癌BGC-823顺铂耐药细胞株;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对BGC-823和BGC-823/DDP细胞的IC₅₀值分别为(2.33±0.12) 和(21.46±0.97) μmol/L(P<0.01),与BGC-823细胞比较,BGC-823/DDP细胞对顺铂耐药是其9.21倍;半定量RT-PCR检测显示胃癌耐药株BGC-823/DDP高表达Oct-4基因;Western blot结果显示化学合成的siRNA可以靶向下调Oct-4蛋白的表达;siRNA干扰BGC-823/DDP细胞Oct-4基因的表达后,BGC-823/DDP细胞对顺铂的的IC₅₀值从(22.04±1.84 ) μmol/L 减小到(6.15±0.53) μmol/L,二者差异具有统计学意义(P<0.01)。结论: 研究结果表明,Oct-4基因的高表达在胃癌顺铂的耐药中起着重要的作用。     

circZNF124通过靶向miR-4262调控结直肠癌SW620细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的：探讨circZNF124对结直肠癌SW620细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制。方法：体外培养人结直肠癌细胞SW620,随机分组：si-NC组、si-circZNF124组、miR-NC组、miR-4262组、si-circZNF124+anti-miR-NC组、si-circZNF124+anti-miR-4262组;CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测SW620细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验分析circZNF124与miR-4262的靶向结合;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果：与si-NC组比较,si-circZNF124组细胞活力、划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）;circZNF124可负向调控miR-4262的表达;与miR-NC组比较,miR-4262组细胞活力、划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）;抑制miR-4262表达逆转了干扰circZNF124表达对SW620细胞增殖、迁移侵袭的作用。 结论：干扰circZNF124表达通过靶向miR-4262,减弱结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

雌激素对卵巢切除后雌性大鼠心肌组织中雌激素受体表达的影响

目的: 探讨雌激素对卵巢切除后雌性大鼠心肌组织中雌激素受体表达的影响。方法: 雌性SD大鼠卵巢切除术(OVX)后1周, 随机分成3组:OVX+雌激素(0.15mg/kg,s.c.)、OVX+生理盐水、对照组。4 周后,Western blotting检测α和β两种雌激素受体在心肌组织中表达。结果: 卵巢切除后,血清雌激素水平与对照组[(88±22 vs 403±59)pmol/L,P<0.05]相比明显下降,左心室肌中两种雌激素受体表达均下降( P<0.05)。给予雌激素后,血清雌激素水平上升为(3864±105)pmol/L,雌激素β受体表达增多(P<0.05),α受体表达下降(P<0.05)。结论: 雌激素改变卵巢切除后雌性大鼠心肌组织中雌激素受体的表达。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂在小白菊内酯抑制胃癌细胞转移中的作用

目的:探讨小白菊内酯(Par)抑制人胃癌SGC7901 细胞转移活性及对尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)的调控作用。方法:MTT 法检测SGC7901 细胞增殖能力的变化;倒置显微镜下观察细胞形态;transwell 小室法检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot 法检测细胞uPA蛋白表达;RT-PCR 法检测uPA的RNA表达。结果:在100～200 μmol/L 浓度范围内, Par以浓度和时间依赖方式抑制胃癌细胞增殖, 倒置显微镜下见到细胞生长明显受到抑制, 细胞的迁移能力和侵袭力均显著下降, 穿过人工基底膜的细胞数逐渐减少。随着Par作用时间的延长, SGC7901 细胞表达uPA水平逐渐下降。结论:Par可以抑制SGC7901 的增殖和转移, uPA在Par降低胃癌细胞转移活性中起重要作用。     

熊果酸抑制HepG2中C-反应蛋白的异常表达及其对HUVECs的损伤

目的: 研究不同剂量的熊果酸(UA)对IL-6诱导的HepG2细胞中C-反应蛋白(CRP)异常表达的抑制作用以及对CRP所致人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用。方法: IL-6(30 ng/mL)、UA(6.5、12.5、25 μmol/L)与IL-6(30 ng/mL)共同作用于HepG2细胞48 h,分别用MTT法、Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞活力、CRP蛋白及mRNA表达情况。CRP(25 μg/mL)、UA(5,10,20 μmol/L)与CRP(25 μg/mL)共同作用于HUVECs 24 h,分别用MTT法、Western blot法及RT-PCR法检测各组细胞增殖、VCAM-1和LOX-1的蛋白及mRNA表达。结果: UA能显著抑制IL-6诱导的HUVECs细胞活力下降及细胞中CRP蛋白与mRNA的表达升高;UA显著抑制CRP引起的内皮细胞增殖,并且在mRNA及蛋白水平均能显著抑制CRP诱导的HUVECs异常高表达VCAM-1及LOX-1。结论: UA可通过抑制肝脏合成炎症因子CRP而降低血液中CRP浓度,并降低CRP等炎症因子对内皮细胞的损伤等途径从而发挥抗心肌缺血及动脉粥样硬化等心血管疾病的作用。     

miR-222、MBD2在胃癌患者中的表达及对铂类化疗敏感性的影响

目的:研究miRNA-222与甲基化CpG结合结构蛋白2（MBD2）水平在胃癌组织中的表达水平及其对铂类化疗敏感性的影响。方法:选择2016年2月至2017年5月在本院就诊的75例原发性胃癌患者作为研究对象。检测患者癌组织及癌旁组织中miR-222、MBD2表达水平；分析miR-222、MBD2水平与胃癌临床病理参数的相关性。将miR-222 inhibitor转染至胃癌SGC-7901细胞中，RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞中miR-222和MBD2的表达水平，MTT法、流式细胞术分别检测转染对细胞增殖、凋亡的影响。结果:胃癌组织中miR-222的阳性表达率显著高于癌旁组织（P<0.05）。胃癌组织中miR-222相对表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。胃癌组织中MBD2的阳性表达率显著低于癌旁组织（P<0.05）。miR-222及MBD2表达水平与分化程度、TNM分期有明显相关性（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组SGC-7901细胞中miR-222表达水平均显著低于空白对照组（Control组）和miR-NC组（NC组）（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组细胞中MBD2 mRNA和蛋白表达水平显著高于Control组和NC组（P<0.05）。转染miR-222 inhibitor的各组细胞的增殖率显著低于Control组和NC组（P<0.05），且miR-222 inhibitor+顺铂（Cisplatin，CDDP ）组的细胞增殖率显著低于miR-222 inhibitor组及CDDP 组，细胞凋亡率显著高于miR-222 inhibitor组及CDDP 组（P<0.05），且与CDDP联合运用能够更明显地抑制肿瘤细胞的增殖率，促进细胞的凋亡。结论:miR-222在胃癌组织中表达明显上调，MBD2显著下调，其表达高低与胃癌分化程度、TNM分期有明显相关性。miR-222可增强 CDDP 对胃癌的化疗敏感性，其可能通过抑制胃癌中的靶基因MBD2发挥作用。     

利多卡因对骨肉瘤细胞MG-63恶性增殖、侵袭及线粒体呼吸作用的调节

目的:探讨利多卡因对骨肉瘤细胞MG-63恶性增殖、侵袭及线粒体呼吸作用的影响。方法:采用25、50、100 μmol/L剂量利多卡因处理MG-63细胞,将细胞随机分为四组:Lidocaine 0 μmol/L组、Lidocaine 25 μmol/L组、Lidocaine 50 μmol/L组和Lidocaine 100 μmol/L组进行后续实验。BrdU染色检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测Ki67、Survivin、血管表皮生长因子(VEGF)、Vimentin蛋白表达水平;流式分选仪检测线粒体膜电位;Clark氧电极法检测线粒体呼吸复合物活性;试剂盒检测三磷酸腺苷(ATP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量。结果:结果表明,与Lidocaine 0 μmol/L组相比较,Lidocaine 50、100 μmol/L组BrdU阳性细胞数显著降低(P<0.05),侵袭细胞数显著降低(P<0.05),Ki67、Survivin、VEGF、Vimentin蛋白水平显著降低(P<0.05),线粒体膜电位明显降低,复合物I、II、IV活性显著降低(P<0.05),ATP、SOD含量显著降低(P<0.05),MDA含量显著升高(P<0.05)。结论:利多卡因具有抑制骨肉瘤细胞MG-63恶性增殖、侵袭和改善线粒体功能的作用。     

枸杞多糖调控Shh信号影响骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡

目的:研究枸杞多糖(LBP)调控Sonic Hedgehog(Shh)信号通路对骨肉瘤HOS细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法:骨肉瘤HOS细胞分成Control(空白对照)、LBP-I(110 μg/mL枸杞多糖)、LBP-II(220 μg/mL枸杞多糖)、LBP-III(440 μg/mL枸杞多糖)共4组,MTT测定细胞增殖,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染法测定凋亡,Western blot测定Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Shh、Gli1蛋白表达。Shh信号激活剂和枸杞多糖共同处理骨肉瘤HOS细胞,利用上述方法测定细胞增殖、周期和凋亡变化。结果:与Control组比较,LBP-I、LBP-II、LBP-III组细胞增殖能力依次降低,细胞G0/G1期细胞比例依次升高[(51.2±4.1)% vs. (59.1±3.2)%,(66.8±2.0)%,(72.3±3.2)%,F=72.76,P<0.001],细胞凋亡水平依次升高[(3.9±0.3)% vs. (13.2±1.2)%,(17.6±1.3)%,(24.8±2.1)%,F=364.50,P<0.001],细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达水平依次升高,CDK4、cyclin D1、Shh、Gli1蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。与未经Shh信号激活剂处理的细胞比较,经过Shh信号激活剂处理的细胞可以逆转枸杞多糖对骨肉瘤HOS细胞增殖抑制、周期阻滞和凋亡促进作用。结论:枸杞多糖通过抑制Shh信号通路阻滞骨肉瘤HOS细胞周期、抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。     

人参皂苷通过Aldolase/AMPK/PINK1信号通路减轻油酸诱导的HL-7702细胞损伤

目的: 研究人参皂苷对油酸(OA)诱导人肝HL-7702细胞损伤的保护作用,及其对Aldolase/AMPK/PINK1信号通路的影响。方法: 体外培养HL-7702细胞,并将其分为对照组(C)、油酸刺激组(OA)、OA+人参皂苷组(OA+Rg1)、OA+Compound C组(OA+CC)、OA+Compound C+人参皂苷组(OA+CC+Rg1)。CCK8法和Hoechst染色法检测HL-7702细胞增殖活性,流式细胞术检测HL-7702细胞凋亡率和线粒体膜电位,ATP测定分析HL-7702细胞中ATP含量,Western blot分析HL-7702细胞中Cleaved caspase-3、PINK1、MFN2、Aldolase和p-AMPK蛋白表达水平。结果: 与C组比较,OA组细胞增殖活力明显降低(P<0.05),细胞凋亡率和促凋亡蛋白Cleaved caspase-3表达水平明显升高(P<0.05),ATP含量、线粒体膜电位(TMRE)和线粒体自噬蛋白PINK1表达水平明显降低(P<0.05);与OA组比较,OA+Rg1组细胞增殖活力明显升高(P<0.05),细胞凋亡率和Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),ATP含量、TMRE值、Aldolase、PINK1和p-AMPK蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与OA+Rg1组比较,OA+CC+Rg1组HL-7702细胞增殖活力及AMPK磷酸化水平明显降低(P<0.05);Aldolase基因沉默后,Rg1不能增高细胞中PINK1和p-AMPK蛋白表达及细胞的增殖活性。结论: 人参皂苷可通过调节Aldolase/AMPK/PINK1信号通路活性改善油酸诱导的人肝HL-7702细胞损伤。     

西红花酸对心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的: 探讨西红花酸(crocetin)对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ, AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts, CFB)增殖和胶原合成的影响及其作用机制。方法: 体外培养新生SD大鼠CFB,建立AngⅡ诱导新生大鼠CFB纤维化模型;MTT法检测CFB的增殖;羟脯氨酸测定检测CFB胶原含量;流式细胞分析仪测定细胞周期;实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白、间质胶原酶(MMP-2)、组织金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)、转化生长因子β₁(TGF-β₁)的基因表达;蛋白免疫印迹(Western Blot)检测细胞P27^kip1 (P27)蛋白的表达。结果: (1)在一定浓度范围里,crocetin能抑制AngⅡ引起的CFB增殖和胶原合成,并呈剂量依赖;(2)CFB G₀/G₁期百分率随crocetin浓度增加而增加,S期、G₂/M期百分率和增殖指数随crocetin浓度增加而减少,与AngⅡ组相比差异有统计学意义(P<0.05 或P<0.01);(3)Crocetin能明显降低Ⅰ型、Ⅲ型胶原、TIMP1、TGF-β₁的表达,提高MMP-2的表达;(4)Crocetin能增加P27蛋白表达。结论: Crocetin通过抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原合成起到抗心肌纤维化作用,其机制可能与细胞因子分泌和对基质金属蛋白酶的调节有关。