甘草提取物对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞纤维化的影响

目的：考察甘草提取物对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞（CFs）纤维化干预作用。方法：10 ng/mL TGF-β1诱导CFs建立心肌纤维化细胞模型。用甘草提取物处理纤维化细胞,MTT法检测不同浓度甘草提取物对细胞增殖的影响;CCK-8检测TGF-β1诱导后,甘草提取物对CFs细胞增殖的影响;免疫荧光检测平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达;Western blot检测TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白及p-Smad2、p-Smad3蛋白表达水平;RT-PCR检测Smad2、Smad3、Smad4 mRNA表达水平。结果：各浓度甘草提取物处理细胞后细胞活性与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。甘草提取物各浓度组细胞增殖率显著低于TGF-β1组（P<0.05）;100 μg/mL甘草提取物对α-SMA、TGF-β1/Smad信号通路相关蛋白表达水平显著低于TGF-β1组（P<0.05）。 结论：甘草提取物对TGF-β1诱导的心肌纤维细胞纤维化的发生发展具有一定改善作用,其作用机制与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。     

中药玉夏胶囊对自发性高血压大鼠肾纤维化的改善作用及TGF-β1 /Smads信号通路的影响

目的: 观察中药玉夏胶囊对自发性高血压大鼠（SHR）肾损伤的改善作用,并探讨其可能存在的机制。方法: 14周龄雄性SHR大鼠随机分为SHR模型组（0.5%羧甲基纤维素钠,CMC-Na 5 mL/ kg）、玉夏胶囊高、中、低（0.6、0.3、0.15 g/kg）剂量组,每组7只。另设WKY（0.5%CMC-Na 5 mL/kg）正常对照组7只,每日灌胃给药一次,连续10周。于给药前及给药后每两周尾袖法测血压;末次给药后收集大鼠24 h尿液并检测尿微量白蛋白（U-mAlb）含量;腹主动脉取血测定血清β2-微球蛋白（β2-MG）、血浆及肾组织血管紧张素II(AngII)含量;HE及Masson染色观察肾脏病理组织学和胶原纤维变化;Western blot法测定肾组织TGF-β1、Smad4、Smad7蛋白含量及Smad2/3蛋白磷酸化水平表达。结果: 玉夏胶囊能明显降低SHR大鼠血压(P<0.05或P<0.01),降低U-mALb、血β2-MG含量、血浆及肾组织AngII水平(P<0.01),明显减轻肾脏病理组织损伤和胶原纤维沉积,上调肾组织Smad7蛋白表达,下调TGF-β1、Smad4蛋白表达及Smad2/3蛋白磷酸化水平(P<0.01)。结论: 中药玉夏胶囊能有效改善SHR大鼠肾纤维化,在一定范围内呈剂量依赖性,其机制可能与降低血压,下调AngII水平,抑制过度激活的TGF-β1/Smads 信号通路有关。     

PI3K/AKT/GSK3β信号通路参与腺苷A1R介导异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用

目的：探讨PI3K/AKT/GSK-3β信号通路参与异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及机制。方法：健康雄性SD大鼠72只,所有大鼠参照Zea Longa法建立局灶性脑缺血再灌注损伤的模型。随机分成6组（n=12）,A-假手术组,B-模型组（MCAO）,C-异丙酚组,D-异丙酚+腺苷A1R拮抗剂组（DPCPX）,E-异丙酚组+PI3K特异性抑制剂（LY294002）,F-异丙酚+GSK-3β抑制剂组（SB216763）,观察大鼠术后24 h神经功能评分情况;LDF监测插栓前后脑血流变化;采用TTC染色法检测各组大鼠的脑梗死体积;用HE染色方法观察大鼠脑组织形态学改变;免疫组织化学法检测Bcl-2阳性细胞表达;采用TUNEL检测各组大脑脑皮质缺血周围神经元凋亡细胞的百分率。结果：与A组比较,B、C、D、E及F组大鼠行为学、脑梗死体积、细胞凋亡率、Bcl-2蛋白表达量均增加（P<0.05）;与C组比较,B、D、E组大鼠行为学评分,脑梗死体积及细胞凋亡率均明显增加,Bcl-2蛋白表达量均明显减少（P<0.01）,F组Bcl-2蛋白表达量却增加,细胞凋亡率降低（P<0.05）,行为学评分减少、梗死体积减少（P<0.05）。 结论：腺苷A1R介导的异丙酚对缺血再灌注损伤大鼠的神经保护作用可能与PI3K/AKT/GSK-3β信号转导通路有关。     

丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡的信号通路及对AQP3基因表达影响的研究

目的:探讨丁酸钠诱导结肠癌HT-29细胞凋亡过程的分子机理及其对水通道蛋白AQP3基因表达的影响。方法:MTT 法检测不同浓度的丁酸钠对结肠癌HT-29细胞生长的影响;RT-PCR 检测不同浓度的丁酸钠对细胞周期蛋白Cyclin D1、CDK4、p16和AQP3的基因表达水平, 同时使用流式细胞仪检测细胞周期。结果:加入浓度超过2.5 mmol/L 的丁酸钠后, 结肠癌HT-29细胞生长受到抑制,Cyclin D1、CDK4和AQP3的表达水平下降, p16的表达水平上调, 细胞阻滞于G₁/S 期。结论:浓度超过2.5 mmol/L 的丁酸钠可以诱导结肠癌HT-29细胞凋亡, 使其细胞周期阻滞于G₁/S期, 且这种诱导作用是剂量依赖型的, 其分子通路可能是通过p16-Cyclin D1/CDK4这条信号途径,在此过程中, 伴随着AQP3的基因表达水平降低。     

联用芝麻素和维生素E抑制PI3K/AKT信号通路改善自发性高血压大鼠的左室纤维化

目的：观察芝麻素（Ses）和维生素E（VitE）联用对自发性高血压大鼠（SHRs）左心室纤维化的影响,并探讨其可能机制。方法：14周龄雄性SHRs随机分为Ses和VitE联用组（160+10 mg·kg-1·d-1、Ses组（160 mg·kg-1·d-1）、VitE组（10 mg·kg-1·d-1）及SHRs组,另设正常对照WKY组,每组7只,1次/d持续灌胃给药10周。采用尾袖法测定大鼠给药前和给药10周后的收缩压。末次给药后取左心室,计算脏器指数,Masson染色观察胶原沉积,分析心肌胶原容积分数（CVF）,Western blot 观察Ⅰ型胶原（collagenⅠ）、Ⅲ型胶原（collagen Ⅲ）、转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、基质金属蛋白酶抑制剂-1（TIMP-1）、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）、蛋白激酶B（AKT）和磷酸肌醇3激酶（PI3K）蛋白的表达。结果：SHRs+Ses+VitE组的收缩压、HW/BW、LVW/HW、CVF明显下降,且下降幅度分别高于SHRs+Ses和SHRs+VitE组（P<0.01或P<0.05）。SHRs+Ses+VitE组的collagenⅠ、collagen Ⅲ、TGF-β1、CTGF、MMP-9、TIMP-1、p-AKT和PI3K蛋白表达明显下降,且下降幅度分别高于SHRs+Ses和SHRs+VitE组（P<0.01或P<0.05）。 结论：联用芝麻素和维生素E通过抑制AKT/PI3K信号通路的激活,减少TGF-β1、CTGF、MMP-9及TIMP-1表达,从而发挥降压和改善左心室纤维化的作用。     

发酵虫草菌粉对DEN致大鼠肝损伤的保护作用及TGF-β1/Smads通路的影响

目的: 探讨发酵虫草菌粉（fermented cordyceps sinensis powder,CS）对二乙基亚硝胺（DEN）诱导大鼠肝损伤的保护作用及对TGF-β1/Smads通路的影响。方法: 无特定病原体（SPF级）健康雄性Sprague Dawley（SD）大鼠48只,体质量（180±20） g,随机分为4组：对照组、模型组、CS治疗组与CS溶媒组,每组12只。模型组：灌胃给予10 mg/kg DEN每周5次共8周,构建慢性肝损伤模型;对照组：灌胃给予与模型组相同体积的生理盐水;CS治疗组：在建模4周后灌胃给予80 mg/kg CS每周5次共8周;CS溶媒组：灌胃给予与CS组相同体积的5%甲基纤维素钠（CMC-Na）溶液。实验结束后,麻醉,脊椎脱臼法处死大鼠,收集血液,紫外分光光度法检测各组大鼠血清中AST、ALT以反映肝功能;H&E染色观察肝组织形态变化,Masson染色观察胶原沉积情况;改良Nycodenz法分离各组大鼠原代肝星状细胞（HSC）,RT-qPCR检测肝组织与HSC中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子（TGF）-β1、Smad3、Smad7 mRNA的表达水平;Western blot检测肝组织Smad3与Smad7蛋白表达水平。结果: 与对照组相比,模型组大鼠血清中AST、ALT含量显著升高,H&E染色结果显示肝脏组织形态显著改变,Masson染色结果显示胶原沉积增多;与模型组相比,CS治疗四周能显著降低肝损伤大鼠血清中升高的AST、ALT水平,改善其肝脏病理损伤程度,减少肝脏中胶原沉积。RT-qPCR结果显示,CS可减少肝损伤大鼠组织及HSC中α-SMA、TGF-β1 mRNA表达水平,增加Smad7 mRNA表达水平;CS溶媒组各项检测指标均与模型组无差异;此外,Western blot结果显示,CS可下调肝损伤大鼠肝组织Smad3蛋白的表达,上调Smad7。结论: CS可显著改善DEN诱导的大鼠肝损伤,该作用可能与CS上调Smad7,并抑制TGF-β1/Smads通路有关。     

地塞米松对小鼠急性胰腺炎胰腺组织中Notch信号及凋亡相关基因表达的影响

目的: 探讨地塞米松对急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）小鼠胰腺组织中Notch1,Hes1及凋亡因子Bax、Bcl-2表达的影响。方法: 利用蛙皮素建立小鼠急性胰腺炎动物模型,实验分组为生理盐水组（对照组）,模型组（AP组）,地塞米松（dexamethasone,DEX）组,利用ELISA法检测各组动物血清中TNF-α, IL-6的含量;利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测各组动物胰腺组织中Notch1,Hes1,Bax及Bcl-2 mRNA的表达情况;利用Western blot检测各组胰腺组织中Notch1,Hes1,Bax及Bcl-2蛋白的表达情况。结果: ELISA检测结果显示,与模型组相比较,DEX组动物血清中TNF-α与IL-6的含量显著降低;RT-qPCR与Western blot结果显示,与模型组相比较,DEX组胰腺组织中Notch1,Hes1,Bcl-2 mRNA的表达与蛋白的表达均显著降低,而Bax mRNA的表达与蛋白的表达显著升高。结论: DEX可能通过抑制Notch信号的激活,抑制Notch1与Hes1的表达,进一步抑制抗凋亡的Bcl-2蛋白的作用,促进促凋亡蛋白Bax的表达,促进胰腺腺泡细胞的凋亡,减少胰腺腺泡细胞的坏死,减少炎症因子,如TNF-α与IL-6等的合成与释放。     

染料木素调控JAK2/STAT3信号通路改善骨性关节炎大鼠软骨代谢的作用研究

目的:在大鼠骨性关节炎（OA）模型中观察染料木素通过酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3(JAK2/STAT3)信号通路对骨性关节炎软骨代谢的作用。方法:SD大鼠随机分为3组,相应处理6周后取材,采用组织学染色的方法观察软骨标本的组织学形态、ELISA检测大鼠关节液中TNF-α表达水平、Western blot检测关节软骨细胞中p-JAK2、p-STAT3、MMP-13、Bax、Bcl-2相关蛋白的表达。结果:染料木素能有效增加OA关节软骨的胶原及蛋白多糖含量,使软骨组织结构接近正常软骨。与OA组相比,染料木素+OA组的TNF-α表达显著下调（P<0.01）,与正常组相近（P>0.05）。与OA组相比,染料木素+OA组的p-JAK2、p-STAT3及Bcl-2蛋白表达水平明显上升、MMP-13、Bax蛋白表达水平明显下降（均P<0.05）。结论:JAK2/STAT3信号通路与骨性关节炎软骨退变的病理过程密切相关,染料木素可激活JAK2/STAT3信号通路,抑制骨性关节炎炎症反应,抑制软骨细胞的凋亡,明显缓解关节软骨的退变,降低OA进展水平。     

原花青素对急性痛风性关节炎大鼠TLR4/NF-κB信号通路的影响

目的: 观察原花青素（proanthocyanidins, PC）对急性痛风性关节炎SD大鼠的作用,并探讨其可能机制。方法: 将SD大鼠随机分为6个组（12只/组）,分别是：正常组、模型组、低剂量给药组（30 mg/kg）、中剂量给药组（60 mg/kg）、高剂量给药组（90 mg/kg）以及秋水仙碱阳性对照组（0.3 mg/kg）。给药组和对照组给予对应剂量的药物灌胃给药,正常组和模型组则给予相同体积的生理盐水灌胃,连续5 d。于第6天,通过采用向踝关节腔内注射尿酸钠的方法来制作急性痛风性关节炎（AGA）的模型。在造模前、后的固定时间点,测定各组大鼠的关节肿胀度和机械痛阈值,观察其步态、并进行分级;在造模24 h后,用酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）测定血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平,用蛋白质免疫印迹法（Western blot）测定滑膜组织中Toll样受体-4（TLR4）和NF-κB的蛋白表达。结果: 原花青素的3个剂量组均能缓解急性痛风性关节炎所导致的大鼠踝关节肿胀、改善模型大鼠的步态变化和造模造成的痛觉改变。同时,原花青素可抑制急性痛风性关节炎SD大鼠TLR4、NF-κB蛋白的表达,下调血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的水平。结论: 原花青素对SD大鼠急性痛风性关节炎具有一定的改善作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路,从而抑制IL-1β等炎症因子有关。     

蝮蛇毒蛋白C激活物改善急性心肌梗死大鼠心功能的机制研究

目的: 探讨皖南产蝮蛇毒(AHV)蛋白C激活物(protein C activator,PCA)改善急性心肌梗死大鼠心功能作用与机制。方法: Sprague-Dawly大鼠60只,随机分为假手术(SH)组、心肌梗死模型(MI)组、PCA低、中、高剂量组(0.5、2、8 mg/kg)、阳性对照组(阿司匹林 5 mg/kg),每组10只。通过结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死(AMI)模型,采用Medlab生物信号处理系统监测大鼠心脏血流动力学变化。Western blot检测心肌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达;光镜观察心肌组织学改变。结果: 与心肌梗死组比较,PCA高、中剂量大鼠左室内压最低值(LVDP)、左心室舒张末期压(LVEDP)、左心室压力最大上升速率(+dp/dt_max) 、左心室压力最大下降速率(-dp/dt_max)明显升高(P＜0.05),MMP-9的蛋白表达下降(P＜0.05)。病理观察显示PCA干预组较梗死模型组炎症细胞浸润显著减轻,梗死面积缩小。结论: 蝮蛇毒PCA组分可以限制急性心肌梗死早期心肌梗死扩大,有效改善心脏血液动力学,抑制MMP-9表达,对急性心肌梗死后心室重构有一定的干预作用。     

肿瘤细胞和耐药肿瘤细胞中FoxO3/Keap1/Nrf2通路的表达差异

目的: 检测FoxO3/Keap1/Nrf2信号通路在肿瘤细胞和耐药肿瘤细胞中的表达差异,探讨FoxO3/Keap1/Nrf2信号在肿瘤细胞耐药中的作用。方法: 构建肺癌A549耐药（A549/DDP）和结肠癌HCT-8耐药（HCT-8/5-FU）两种细胞株,耐药细胞对药物的敏感性用MTT法检测;分别用qRT-PCR、Western blot检测FoxO3/Keap1/Nrf2信号通路成员在非耐药和耐药肿瘤细胞中mRNA和蛋白的表达情况并进行比较。结果: A549/DDP的耐药性明显高于A549细胞（P<0.05),耐药倍数为5.25倍;HCT-8/5-FU耐药性显著高于HCT-8细胞（P<0.05）,耐药倍数为31.67倍;两种耐药细胞A549/DDP和HCT-8/5-FU中的FoxO3、Keap1和Akt基因的mRNA表达水平降低而Nrf2和Nqo1基因的mRNA表达水平升高;A549/DDP和HCT-8/5-FU细胞中的Keap1和FoxO3蛋白表达水平降低而p-Akt、Nrf2、Nqo1的蛋白表达水平升高。结论: FoxO3/Keap1/Nrf2信号通路与肿瘤耐药性有一定相关性,为深入研究该通路并探索降低肿瘤耐药性的治疗策略提供参考。     

阿托伐他汀钙经STAT1-caspase-3信号轴抑制膝骨关节炎大鼠关节软骨退变的研究

目的: 探讨阿托伐他汀钙在膝骨关节炎（KOA）大鼠体内通过调节信号转导和转录激活因子1（STAT1）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的表达,从而对关节软骨退变的影响。方法: 将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、阿托伐他汀钙治疗组,采用Hulth法建立KOA大鼠模型,实验8周后采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测大鼠血清中TNF-α及IL-1β的表达水平,膝关节X线影像学检查,关节软骨HE染色行病理学观察,检测软骨组织内p-STAT1和cleaved caspase-3蛋白表达水平。结果: 模型组大鼠血清中TNF-α及IL-1β含量明显高于正常组（P<0.01）,而阿托伐他汀钙治疗组低于模型组（P<0.01）。阿托伐他汀钙治疗组X线表现与模型组相比,膝关节关节间隙、关节软骨破坏和骨赘形成等均有改善。阿托伐他汀钙能明显减轻膝关节病理变化,与模型组相比,阿托伐他汀钙治疗组关节软骨Mankin's评分显著降低（P<0.01）。模型组大鼠关节软骨p-STAT1和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显高于正常组（P<0.01）,而阿托伐他汀钙治疗组低于模型组（P<0.01）,且相关分析表明,p-STAT1和cleaved caspase-3之间呈直线正相关（r=0.986, P<0.01）。结论: 阿托伐他汀钙经STAT1-caspase-3信号轴抑制膝关节炎症反应,从而改善KOA关节软骨的退变。     

盐酸氨溴索治疗大鼠肺纤维化的作用研究及其对TGF-β/Smad/ERK信号转导通路和Th17/Treg细胞失衡的影响

目的: 分析盐酸氨溴索治疗大鼠肺纤维化的作用研究及其对TGF-β/Smad/ERK信号转导通路和Th17/Treg细胞失衡的影响。方法: 选取由温州康宁医院实验动物中心提供SPF级Wistar雄性大鼠30只,随机数字表法分成5组：正常组,模型组,氨溴索低、中、高剂量组,每组各10只。采用5 mg/kg博来霉素0.2 mL气管内灌注成功制备肺纤维化模型,术后第2天起氨溴索低、中、高剂量组大鼠腹腔内注射剂量为10、20、40 mg/kg盐酸氨溴索,正常组和模型组大鼠腹腔注射剂量为3.33 mL/kg生理盐水,连续注射14 d。HE染色和Masson染色观察各组大鼠组织病理变化,ELISA法检测大鼠成纤维细胞内转化生长因子β1（TGF-β1）含量,实时荧光定量PCR检测TGF-β1蛋白表达状况,Western blot检测成纤维细胞内ERK1/2、p-ERK和Smad3、Smad4、Smad7蛋白表达状况,流式细胞术法检测各组大鼠肺组织内Treg、Th17细胞表达状况。结果: 与正常组相比,模型组大鼠成纤维细胞内TGF-β1含量、TGF-β1基因表达量、ERK1/2、p-ERK和Smad3、Smad4蛋白表达、肺组织内Th17、Th17/Treg均升高（均P＜0.05）;与模型组相比,氨溴索中、高剂量组大鼠均降低（均P＜0.05）。而模型组大鼠成纤维细胞Smad7蛋白表达、肺组织内Treg表达比率较正常组均降低（均P＜0.05）,氨溴索中、高剂量组大鼠较模型组升高（均P＜0.05）。结论: 盐酸氨溴索可维持肺纤维化大鼠肺组织Th17/Treg平衡,抑制大鼠TGF-β/Smad/ERK信号转导通路内主要细胞因子信号传递,进而起到抗肺纤维化的作用。     

疏肝健脾方调控TLR4/MyD88/NLRP3信号轴抑制肝纤维化小鼠细胞焦亡的机制研究

目的：基于TLR4/MyD88/NLRP3信号轴探究疏肝健脾方对肝纤维化小鼠的治疗作用及机制。方法：采用四氯化碳（CCl4）与橄榄油混合液背部皮下注射的方法,复制化学性肝纤维化小鼠模型。造模首日,灌胃给予疏肝健脾方,每天1次,连续12周;HE、Masson和天狼猩红染色观察小鼠肝组织病理学损伤程度,透射电镜观察肝组织超微结构的变化及焦亡小体情况;RT-qPCR、Western blot和免疫组织化学染色检测肝组织中α-SMA、Collagen Ⅰ、Caspase-1、IL-1β、IL-18以及TLR4/MyD88/NLRP3信号轴表达的变化情况。结果：病理分析显示模型组小鼠肝脏肝小叶结构模糊,肝细胞索排列紊乱,胶原沉积增加,焦亡小体数量明显增加,肝组织中α-SMA、Collagen Ⅰ、Caspase-1、IL-1β、IL-18以及TLR4、MyD88和NLRP3的mRNA和蛋白表达水平相较于正常组肝脏均显著升高。与模型组相比,疏肝健脾方给药后可改善肝脏病理组织学损伤程度,抑制细胞焦亡,显著下调α-SMA、Collagen Ⅰ、Caspase-1、IL-1β、IL-18以及TLR4、MyD88和NLRP3 mRNA与蛋白表达水平。 结论：疏肝健脾方抗肝纤维化作用可能与调控TLR4/MyD88/NLRP3信号轴,减少细胞焦亡,抑制肝星状细胞活化有关。