体外沉默血管内皮生长因子对D-(-)-MTX/A549耐药细胞株迁移侵袭能力的影响

目的: 研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因沉默对D-(-)-MTX /A549耐药细胞株迁移和侵袭的影响及可能的分子机制。方法: 采用siRNA技术沉默D-(-)-MTX/A549耐药细胞株VEGF基因, 细胞划痕试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR检测VEGF、MMP-2 mRNA,Western blot检测p-ERK1/2蛋白的表达。结果: VEGF siRNA序列及阴性对照成功转染至D-(-)-MTX/A549后,VEGF mRNA表达水平明显下降, 与阴性对照相比下降了2.29倍,差异具有统计学意义（P=0.002）,表明转染成功。阴性对照组与空白组差异无统计学意义（P>0.05）。转染后,D-(-)-MTX/A549迁移和侵袭能力明显下降（P值均<0.05）,D-(-)-MTX/A549耐药细胞 MMP-2 mRNA、p-ERK1/2的蛋白达也较阴性对照水平明显下降（P值均<0.05）。结论: 抑制VEGF基因表达可以抑制D-(-)-MTX/A549细胞的迁移和侵袭能力,这一过程可能涉及到MMP-2和p-ERK1/2信号通路。     

circZNF124通过靶向miR-4262调控结直肠癌SW620细胞增殖、迁移及侵袭的机制研究

目的：探讨circZNF124对结直肠癌SW620细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其机制。方法：体外培养人结直肠癌细胞SW620,随机分组：si-NC组、si-circZNF124组、miR-NC组、miR-4262组、si-circZNF124+anti-miR-NC组、si-circZNF124+anti-miR-4262组;CCK-8法、平板克隆形成实验、划痕实验与Transwell实验分别检测SW620细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验分析circZNF124与miR-4262的靶向结合;Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达量。结果：与si-NC组比较,si-circZNF124组细胞活力、划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）;circZNF124可负向调控miR-4262的表达;与miR-NC组比较,miR-4262组细胞活力、划痕愈合率和N-cadherin蛋白水平降低（P<0.05）,细胞克隆形成数和侵袭细胞数减少（P<0.05）,E-cadherin蛋白水平升高（P<0.05）;抑制miR-4262表达逆转了干扰circZNF124表达对SW620细胞增殖、迁移侵袭的作用。 结论：干扰circZNF124表达通过靶向miR-4262,减弱结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

沉默YAP基因提高伊马替尼耐药的人髓性白血病细胞K562药物敏感性的研究

目的: 探究沉默YAP基因后,提高伊马替尼耐药的K562细胞（K562/IMA）对于伊马替尼敏感性的作用及相关机制,为伊马替尼耐药的人髓性白血病治疗提供参考。方法: 采用小干扰RNA技术（siRNA）转染YAP的siRNA-YAP沉默K562/IMA的YAP基因。设置对照组（Control）、siRNA阴性对照组（siRNA-NC）和YAP siRNA组（siRNA-YAP）。采用RT-qPCR和Western blot法鉴定沉默后各组细胞YAP蛋白和mRNA的表达水平。CCK-8法检测各组细胞对于伊马替尼的敏感性,并计算半数抑制浓度IC50。流式细胞术检测各组细胞的凋亡率。Western blot法检测YAP、Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3、caspase-3、细胞色素C（Cyto-C）的表达水平,Transwell小室检测细胞转移侵袭能力。结果: YAP基因沉默后,siRNA-YAP组细胞中YAP的蛋白和mRNA表达水平显著低于Control组和siRNA-NC组,沉默效果较好。siRNA-YAP的IC50值显著低于Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）,而流式细胞术结果显示,siRNA-YAP组细胞在相同药物剂量下,凋亡率显著高于Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）。YAP沉默的K562/IMA细胞迁移侵袭能力显著下降。伊马替尼干预后,siRNA-YAP细胞中Bcl-2/Bax的水平下调,cleaved-caspase-3、caspase-3和Cyto-C的水平上调,相比Control组和siRNA-NC组,具有统计学意义（P<0.05）。结论: 沉默伊马替尼耐药的K562/IMA细胞中YAP基因,可以恢复肿瘤细胞对于伊马替尼的敏感性,可以促进线粒体凋亡途径的激活,导致耐药肿瘤细胞的凋亡。     

下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响

目的：研究下调lncRNA LINC00176对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药和自噬的影响及机制。方法：qRT-PCR方法测定正常支气管上皮16HBE细胞和肺癌A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176的表达。将A549/DDP细胞分成对照组、si-NC组、si-LINC00176组、si-LINC00176+Anti-miR-NC组、si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组。MTT实验检测顺铂对A549/DDP的半数抑制浓度（IC50）。流式细胞术测定细胞凋亡。Western blot测定LC3-I、LC3-II、Beclin 1、C-Caspase-3蛋白表达。利用荧光素酶报告系统鉴定LINC00176和miR-138-5p的靶向关系。结果：与16HBE细胞比较，A549、A549/DDP、NCI-H1299、SK-MES-1细胞中LINC00176表达水平显著升高（P<0.01）。与A549细胞比较，A549/DDP细胞中LINC00176表达水平显著升高（P<0.01）。与对照组、si-NC组比较，si-LINC00176组A549/DDP细胞IC50显著降低（P<0.01），LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著降低（P<0.01），凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达、miR-138-5p表达水平显著升高（P<0.01）。LINC00176与miR-138-5p直接结合。与si-LINC00176+Anti-miR-NC组比较，si-LINC00176+Anti-miR-138-5p组A549/DDP细胞IC50显著升高（P<0.01），LC3-II/LC3-I、Beclin 1蛋白表达显著升高（P<0.01），凋亡率、C-Caspase-3蛋白表达显著降低（P<0.01）。 结论：下调lncRNA LINC00176通过靶向上调miR-138-5p能够抑制肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药，抑制细胞自噬，诱导细胞凋亡。     

益气活血汤通过miR-21/PTEN信号通路抑制肺癌细胞恶性生物学行为

目的:探讨益气活血汤(Yiqi Huoxue decoction)对肺癌细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制。方法:以不同浓度益气活血汤含药血清(5%、10%、15%)处理人肺癌A549细胞,CCK-8(Cell Counting Kit-8)法、Transwell小室实验、流式细胞术、Western blot法和定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)法研究益气活血汤含药血清对细胞增殖、迁移和侵袭能力、细胞凋亡、第10染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)蛋白和miR-21表达的影响。结果:与无药血清组相比较,不同剂量的益气活血汤含药血清处理后,A549细胞存活率降低、迁移和侵袭能力下降;细胞凋亡率上升、细胞内PTEN mRNA及其蛋白表达增加、miR-21表达下降,且10%含药血清组的效果最佳。转染miR-21 mimics后,A549细胞中miR-21表达上调,PTEN蛋白表达下调;10%含药血清处理后PTEN蛋白表达上调。结论:益气活血汤可有效抑制人肺癌A549细胞恶性细胞生物学行为,且可能与miR-21/PTEN信号通路的调控有关。     

小分子干扰RNA抑制HLX1表达对急性髓系白血病细胞侵袭的影响及机制探讨

目的: 探讨小分子干扰RNA（siRNA）抑制人同源异型盒基因（H2.0-like homeobox,HLX1）表达对急性髓系白血病细胞系U937细胞增殖与侵袭能力的影响。方法: 利用HLX1特异的siRNA瞬时转染U937细胞,通过实时定量（RT-PCR）与蛋白印迹法（Western blot）分别测定HLX1的mRNA及蛋白质的表达水平,应用细胞体外增殖实验法（MTT）与体外侵袭实验观察siRNA抑制HLX1表达后的U937细胞增殖与侵袭变化。 结果: 相对于空白对照组,HLX1特异的siRNA转染24 h后可抑制U937细胞HLX1 mRNA表达,抑制率为（70.0±2.7）%（P<0.01）;转染48 h后可有效抑制HLX1蛋白质表达,抑制率为（81.0±3.1）%（P<0.01）;转染组U937细胞增殖能力显著下降（P<0.01）,转染组穿过基质胶的U937细胞数（22.0±2.3）显著低于空白对照组（66.0±5.0）(P<0.01), p-21活化激酶1（PAK1）蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。结论: siRNA下调HLX1表达水平可显著抑制急性髓系白血病细胞的增殖与侵袭能力。     

地塞米松对人胎盘葡萄糖转运功能的作用及机制

目的: 探讨地塞米松对人胎盘葡萄糖转运功能的作用及机制。方法: 取本院治疗并分娩的早产孕妇160例,随机分为对照组和地塞米松组,各80例。随机选取两组各10例胎盘组织样品,采用免疫组织化学检测胎盘生乳素（human placental lactogen,HPL）蛋白。选取人绒毛膜癌细胞系JEG-3细胞株纳入机制研究,根据转染载体的不同分为4组,pcDNA3.1组：JEG-3细胞转染对照载体pcDNA3.1;pcDNA3.1-GRα组：JEG-3细胞转染GRα过表达载体pcDNA3.1-GRα;Control siRNA组：JEG-3细胞转染Control siRNA;GRα siRNA组：JEG-3细胞转染GRα siRNA。分别利用CCK-8法检测胎盘细胞增殖、TUNEL法检测细胞凋亡程度、检测线粒体膜电位、检测胎盘细胞葡萄糖摄取量、荧光分子探针测定胎盘细胞活性氧（reactive oxygen species, ROS）的含量及实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction）检测糖皮质激素受体α（glucocorticoid receptor-α,GRα）、葡萄糖转运蛋白（glucose transporter,GLUT）的相对表达量。结果: 对照组的HPL强阳性细胞多于地塞米松组。与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-GRα组的细胞增殖能力、线粒体膜电位水平、葡萄糖摄取量显著升高（P<0.05,P<0.01）;细胞凋亡、ROS含量明显降低（P<0.01）;GRα、GLUT1、GLUT3的相对表达量显著上调（P<0.01）。与Control siRNA组比较,GRα siRNA组细胞的增殖能力、线粒体膜电位水平、葡萄糖摄取量明显下降（P<0.05, P<0.01）;细胞凋亡、ROS含量明显升高（P<0.01）;GRα、GLUT1、GLUT3的相对表达量均显著下调（P<0.05）。 结论: 地塞米松能够抑制胎盘对葡萄糖的转运功能,并且极有可能通过ROS/AMPK路径实现这一调控。     

竹节香附素通过抑制JAK/STAT3信号转导通路抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移

目的:探讨竹节香附素对人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭转移影响,以及JAK/STAT3信号转导通路在此过程中发挥的作用。方法:选取正常贴壁生长的对数期人子宫内膜癌HEC-1-B细胞,分成两组,一组用竹节香附素处理,为观察组;另一组用生理盐水处理,作为对照组。划痕实验比较两组的细胞在不同时间点的迁移情况;Transwell实验比较两组细胞的侵袭能力;CCK-8检测两组细胞的增殖能力;荧光定量PCR和Western blot检测细胞中Janus激酶（JAK）、信号转导子和转录激活子（STAT3）基因的表达情况。结果:48 h后,观察组的迁移距离小于对照组（P<0.05）,Transwell实验观察组侵入下方小室的细胞数量低于对照组（P<0.05）。两组细胞在48 h内的细胞增殖结果差异并无统计学意义（P>0.05）。相比较对照组,荧光定量PCR和Western blot的结果均显示观察组的JAK和STAT3基因表达量下降（P<0.05）。结论:竹节香附素可显著抑制人子宫内膜癌HEC-1-B细胞的侵袭和转移能力,其机制可能通过调控JAK/STAT3信号通路而发挥作用。     

microRNA-1304通过靶向血红素氧合酶-1对人肺癌细胞的抑制作用

目的:探讨miR-1304对肺癌细胞增殖和侵袭的作用及机制。方法:应用实时定量PCR检测miR-1304在不同转移能力肺癌A549和NCI-H1975细胞中的表达水平;脂质体2000介导分别转染miR-1304类似物和抑制物入A549 和 NCI-H1975细胞;应用MTT法和细胞集落形成实验分别检测miR-1304对肺癌细胞增殖活性的作用及生长抑制作用;细胞凋亡和细胞周期分别采用膜联蛋白V-PE/7-AAD和PI染色分析进行检测。双荧光素酶报告基因验证miR-1304是否作用于血红素氧合酶（heme oxygenase-1,HO-1） mRNA的3'UTR区预测靶位;Western blot检测HO-1蛋白水平。结果:miR-1304高表达可显著抑制肺癌细胞形成的数量和生存能力,以及诱导细胞凋亡和G0/G1期细胞周期阻滞。体外侵袭实验及细胞增殖实验结果显示,miR-1304可抑制肺癌细胞侵袭和增殖;经双荧光素酶报告基因验证HO-1是miR-1304的靶基因。结论:miR-1304在肺癌中表达,通过直接作用于HO-1可抑制肺癌细胞的侵袭和增殖,miR-1304是肺癌的一个潜在治疗靶点。     

氧化苦参碱通过调控上皮间质转化抑制三阴性乳腺癌细胞侵袭转移

目的: 探讨氧化苦参碱对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生长增殖及其对迁移能力的影响和机制。方法: CCK-8活细胞计数法分析氧化苦参碱不同浓度（0、1、2、4、6、8、10、20 mg/mL）在不同时间（24、48、72 h）对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231生长增殖的影响，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡，Transwell法观察氧化苦参碱对MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的影响，Q-PCR法检测EMT相关因子Snail-2和E-cadherin表达水平。结果: 与对照组比较，浓度为2、4、6、8、10、20 mg/mL的氧化苦参碱处理MDA-MB-231细胞24、48和72 h后，对细胞的生长呈时间和剂量依赖性的抑制作用。流式细胞实验提示2 mg/mL氧化苦参碱可使G0/G1期细胞数明显增加（P<0.05），S期和G2/M期的细胞数明显减少（P<0.05），细胞生长阻滞于G0/G1期。中、高浓度氧化苦参碱（4 mg/mL、6 mg/mL）处理12 h能明显抑制MDA-MB-231的侵袭能力，抑制Snail 2 mRNA的表达（P<0.01），上调E-cadherin mRNA和蛋白水平的表达（P<0.01）。结论: 氧化苦参碱对三阴性乳腺癌细胞生长和迁移侵袭有抑制作用，具有潜在的抗肿瘤生长和转移作用。     

三叶青总黄酮逆转吉非替尼耐药肺腺癌细胞的耐药性

目的：探讨三叶青总黄酮（FTH）逆转吉非替尼（GEF）耐药肺腺癌细胞的耐药性及其初步机制。方法：采用MTT法,检测FTH对GEF耐药A549/GR细胞增殖的影响;采用流式细胞技术检测FTH对A549/GR细胞凋亡及周期的影响;建立A549/GR细胞荷瘤小鼠模型,观察两药联用后的体内抑瘤效果;采用Western blot法检测瘤组织PI3K/Akt信号通路关键蛋白（PTEN、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT）的表达情况。结果：与单用GEF相比,FTH联合GEF给药可显著抑制A549/GR细胞增殖（P<0.05）,诱导A549/GR细胞凋亡（P<0.05）,使细胞停滞在G0/G1期。体内实验结果表明,两者联合可显著抑制裸鼠A549/GR移植瘤的生长（P<0.05）,并显著降低瘤组织p-PI3K和p-AKT表达（P<0.05）,升高PTEN蛋白表达（P<0.05）。 结论：FTH可逆转A549/GR细胞对GEF的耐药性,其作用机制可能与调控PTEN/PI3K/AKT通路有关。     

三叶青黄酮抑制肺癌A549细胞生长与蛋白酶体活性的关系研究

目的: 探讨三叶青黄酮对非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制作用及其机制。 方法: 采用MTT法检测三叶青黄酮对A549细胞增殖的抑制作用;酶标仪检测细胞蛋白酶体和DUB活性;Real time PCR和Western blot法检测细胞泛素-蛋白酶体途径相关蛋白ub prs、USP14、 UCHL5、POH1等表达变化。 结果: 体外实验MTT法检测三叶青黄酮对非小细胞肺癌A549细胞增殖的抑制作用,显示三叶青黄酮各浓度组的抑制率比较,差异具有统计学意义,并呈剂量依赖性。酶标仪检测结果显示随三叶青黄酮浓度升高,细胞蛋白酶体和DUB活性逐渐降低,呈明显的量-效关系。Real-time PCR和Western blot法检测表明三叶青黄酮可以上调A549细胞中ub-prs蛋白表达,下调USP14、UCHL5、POH1蛋白表达,呈剂量依赖性。 结论: 三叶青黄酮对非小细胞肺癌A549细胞具有明显抑制增殖作用,其机制可能与调节泛素-蛋白酶体途径有关。     

miRNA-101在甲状腺髓样癌中抑癌机制的研究

目的:研究microRNA-101在甲状腺髓样细胞中的抑癌机制。方法:首先用荧光定量PCR技术检测甲状腺髓样癌组织中microRNA-101的表达。接着采用microRNA-101模拟物干预法,并用流式细胞仪技术,Transwell实验等方法,对实验组和对照组细胞的增殖、迁移和凋亡进行比较。此外,还通过Western blot、报告基因检测法、流式细胞仪技术和Transwell实验确定miRNA-101靶基因以及相应的抑癌机制。 结果:miRNA-101在甲状腺髓样癌组织中的表达相比癌旁组织下调（P<0.01）。与阴性对照组相比,miRNA-101模拟物转染组的甲状腺髓样癌细胞的增殖和迁移受到显著抑制,而凋亡率显著提高。Western blot和荧光素酶报告实验证实SOX9基因是miRNA-101下游的靶基因并被其下调。SOX9基因敲除可抑制甲状腺髓样癌细胞增殖,迁移和促进癌细胞凋亡。结论:microRNA-101通过靶向下调SOX9基因的表达抑制甲状腺髓样癌细胞的增殖和迁移,加速甲状腺髓样癌细胞的凋亡。     

苦瓜蛋白对A549 肺癌细胞的抑制作用及其对MAPK 信号通路的影响

目的 观察苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A₅₄₉细胞的生长抑制及促凋亡作用;探讨苦瓜蛋白对A₅₄₉ 细胞p42/44-MAPK 及其磷酸化p42/44-MAPK蛋白表达水平的影响及其作用分子机制。方法 以不同浓度梯度的苦瓜蛋白处理A₅₄₉ 细胞, 分别作用不同时间,CCK-8 检测其对细胞生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡。提取苦瓜蛋白不同作用时间点的全细胞蛋白, western blot 检测p42/44-MAPK 及p-p42/44-MAPK 信号分子的变化。结果 苦瓜蛋白对A₅₄₉ 细胞生长具有明显抑制作用, 可显著地诱导A₅₄₉ 细胞凋亡。与阴性对照比较, 苦瓜蛋白可以不同程度下调p42/44-MAPK 及p-p42/44-MAPK 信号分子的表达(P <0.05)。结论 苦瓜蛋白对非小细胞肺癌A₅₄₉ 细胞具有明显地抑制作用及抗肿瘤作用, 其作用可能通过诱导A₅₄₉ 细胞凋亡来实现;苦瓜蛋白可以不同程度地下调p42/44-MAPK 和磷酸化p42/44-MAPK 的表达;MAPK 信号通路可能部分参与了苦瓜蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制, 驱使肿瘤细胞发生凋亡。     

氟尿嘧啶调控VHL/HIF信号通路抑制肾癌细胞增殖、侵袭与转移的研究

目的:探讨氟尿嘧啶通过调控VHL/HIF信号通路影响肾癌细胞增殖、侵袭与转移。方法:体外培养人肾癌786-0细胞,分别用终浓度为6、60、600 μg/mL的氟尿嘧啶处理肾癌细胞,噻唑蓝（MTT）检测氟尿嘧啶对肾癌细胞增殖的影响,划痕实验检测细胞转移能力的影响,Transwell实验检测细胞体外侵袭能力的影响。Western blot检测细胞中VHL/HIF信号通路相关蛋白HIF-1α、VEGF及活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达。通过细胞转染法转染pcDNA-HIF-1α后Western blot检测转染效率,同样的方法检测对肾癌细胞增殖、侵袭和转移的影响。结果:氟尿嘧啶处理后的肾癌细胞增殖明显受到抑制,侵袭和转移能力明显降低,且呈现出时间和浓度依赖性（P<0.05）,相关蛋白HIF-1α、VEGF、MMP-9表达下调,Cleaved Caspase-3表达上调,转染pcDNA-HIF-1α后,HIF-1α的表达上调,肾癌细胞增殖活性降低,侵袭和转移能力减弱,与对照组相比,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:氟尿嘧啶能抑制肾癌细胞增殖、侵袭与转移,其作用机制与通过阻断VHL/HIF信号通路,调节Cleaved Caspase-3和MMP-9的表达有关。