食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌分离鉴定方法研究进展

小肠结肠炎耶尔森氏菌是一种具有嗜冷特性的食源性致病菌,广泛存在于食品中,对人们健康构成较大威胁。建立高效的分离鉴定技术对该菌进行监控是相关食品安全的重要保障。本文对小肠结肠炎耶尔森氏菌的分离过程,包括分离前增菌、分离前碱处理和平板分离,以及传统生化和血清型鉴定、分子生物学鉴定、免疫学鉴定和谱学鉴定方法等方面的研究进展进行了阐述。小肠结肠炎耶尔森氏菌的深入检测研究不仅有赖于现有分离鉴定方法的不断优化,还需要开发更多新型检测技术应用于菌株溯源分析、流行病学和耐药性等方面的研究,以期为该类菌株资源数据库的建立和整理,预防相关耶尔森氏菌疾病的爆发提供良好的保障。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌分子生物学检测技术研究进展

小肠结肠炎耶尔森氏菌（Yersinia enterocolitica,Y. enterocolitica）是一种重要的食源性致病菌,可以引起人类的耶尔森氏菌病,该病的典型症状为腹泻、回肠炎和肠系膜淋巴结炎等。由于该菌在特定食品（如肉与肉制品）中的检出率较高,因此对食品安全构成一定的威胁。就现有的检测方法而言,分离纯化和生理生化鉴定方法耗时且难以检测出复杂食品基质中低浓度的小肠结肠炎耶尔森氏菌。所以,研发能够快速、准确地检测食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的鉴别方法迫在眉睫。该研究将小肠结肠炎耶尔森氏菌现有的分子生物学检测方法分为两大类：变温扩增技术和等温扩增技术进行相关研究最新进展的总结,并对其优缺点和发展方向进行讨论,以期为小肠结肠炎耶尔森氏菌快速检测方法研究提供参考。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌PCR反应体系的快速优化

影响PCR反应结果的因素较为复杂．为了快速、准确地得到PCR反应的最适条件,避免假阴性或假阳性结果的发生,在研究小肠结肠炎耶尔森氏菌PCR反应体系优化中,采用了正交试验法．通过设计两组正交试验,准确地找出了检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的最佳扩增条件,结果表明该方法高效快速,是PCR反应体系优化中值得推广使用的方法。     

食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌污染调查和ERIC-PCR分型研究

通过调查全国17个城市中,七大类食品的小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yesinia enterocolitica)污染情况,了解其分布规律与遗传多样性,从而为我国食品中Y.enterocolitica污染的溯源和控制供相应的数据支持。本研究采用了稍作修改的《食品微生物学检验-小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(GB/T 4789.8-2008)》和GB/T4789.8-2003两种方法对食品中Y.enterocolitica进行检测,同时运用ERIC-PCR技术对分离菌株进行分型研究。研究显示在946份食品样品中检出共50份Y.enterocolitica阳性样品,总污染率为5.29%。在检出的阳性样品中包括肉与肉制品24份、速冻食品25份和食用菌1份,污染率分别为12.06%、16.89%和0.74%,速冻食品和肉与肉制品是目前我国Y.enterocolitica污染的主要食品类型。采用GB/T4789.8-2008检出阳性样品25份,检出率为2.64%;采用GB/T4789.8-2003检出34份,检出率为3.59%明显高于GB/T4789.8-2008法。ERIC-PCR指纹图谱进行聚类分析,结果显示72个分离株可分为四簇,主要污染基因型在C簇,初步建立了Y.enterocolitica的ERIC-PCR指纹图谱数据库。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌生物膜和浮游态的蛋白质组学对比分析

小肠结肠炎耶尔森氏菌是革兰氏阴性食源性致病菌,能够在食物以及食品加工设备表面形成生物膜。生物膜可以增强菌株的生存能力并危害食品安全。该文以分离自速冻食品且具有强生物膜形成能力的小肠结肠炎耶尔森氏菌C1967-1作为出发菌株。通过蛋白质组分析生物膜与浮游态细菌中的蛋白表达差异。GO富集分析表明富集程度最大的前9个GO条目中,7个条目在生物膜中呈现下调趋势。仅GO:0046873（金属离子跨膜转运蛋白活性）条目在生物膜中未呈现明显上下调趋势。KEGG富集结果表明富集程度最大的前20个KEGG通路主要涉及碳水化合物、氨基酸和脂质的代谢过程。亚细胞定位分析结果表明,45.65%的差异蛋白位于细胞质内。为进一步验证蛋白质组数据,从GO:0046873条目中筛选出生物膜上调蛋白MgtA并敲除基因mgtA。结果表明,mgtA的敲除没有抑制菌株的生长,但ΔmgtA的生物膜量下降约80%且生物膜结构松散。综上所述,研究结果为小肠结肠炎耶尔森氏菌生物膜形成机制以及其在食品行业生物膜防控提供重要理论依据。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌在冷鲜鸡肉上的生长

将小肠结肠炎耶尔森氏菌接种到无该菌污染的冷鲜鸡肉上,测定接种前后于4℃贮藏的冷鲜鸡肉在第0、2、4、6、8、10天时的理化指标和微生物指标,包括p H值、挥发性盐基氮值(Total Volalite Base Nitrogen,TVBN)、菌落总数、嗜冷菌总数以及耶氏菌总数,并综合感官评价结果分析各指标间的相关性。最后通过结合16S r DNA基因序列分析及PCR扩增方法鉴定冷鲜鸡肉在贮藏过程中的菌相组成变化。实验结果表明:接种前后,冷鲜鸡肉的TVB-N值、菌落总数、嗜冷菌总数、耶氏菌总数都随贮藏时间延长而增大;p H值呈波动上升再下降趋势;感官评定分数一直下降;货架期由8 d缩短到6 d。从菌相鉴定结果中发现,假单胞菌属、希瓦氏菌属在贮藏过程中一直处于优势地位,且在贮藏后期检出了罕见的哈夫尼亚菌属。     

环介导等温扩增技术检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的研究

采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)。以小肠结肠炎耶尔森氏菌(AY004311.1)Ail基因序列作为靶序列,设计内、外引物,通过肉眼观察沉淀判断检测结果。结果表明:LAMP检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的灵敏度为6.3cfu/mL,人工污染鸡肉的检出限为340cfu/g。PCR检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的灵敏度为630cfu/mL,人工污染鸡肉的检出限为3.4×104cfu/g。采用试剂盒法提取DNA,从样品处理到报告结果,LAMP方法耗时2h,PCR方法耗时3h。因此,LAMP检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的灵敏度高,耗时短,特异性好,操作简便,无需特殊的仪器设备,适合在我国广大基层实验室开展应用,为快速检测食源性致病菌构建了一个新的技术平台。     

致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌分离鉴定及三重PCR检测方法的建立

为鉴定导致患病鲫鱼肛门红肿、腹部有出血点症状的病原菌,并建立一种快速检测该病原菌的方法.本研究从患病鲫鱼中分离了病原菌,采用形态学、理化特性分析及16SrDNA序列分析方法鉴定菌株.采用PCR扩增法检测该菌毒力基因,琼脂纸片扩散法检测该菌株的耐药性,致病性能验证试验检测其致病性.针对该菌ail基因、inv基因和intB...     

3种微量化试剂对沙门氏菌及近源菌的生化鉴定结果比较

评价本实验室研制的沙门氏菌微量生化鉴定试剂盒（简称EasyID）的使用性能。用49株菌（包括沙门氏菌12株标准株,16株分离株;志贺氏菌8株标准株;柠檬酸杆菌1株标准菌和8株分离株;变形杆菌1株标准株和2株分离株;产气肠杆菌1株标准株）,测试EasyID,传统液态生化管（简称HKM）以及国内其他品牌（简称GSA和GSB）的四种鉴定试剂盒。结果表明：49株测试菌株的鉴定结果,EasyID、GSA和GSB三种试剂与HKM传统液态鉴定试剂盒鉴定结果相比总体符合率分别为100%、94.46%、95.10%,EasyID相比GSA和GSB,与HKM的符合率更高;EasyID、HKM、GSA和GSB四种鉴定试剂盒与伯杰氏手册相比总体符合率分别为97.96%、97.96%、93.00%、94.70%,EasyID和HKM符合率最高,其次为GSB,GSA稍低。结论：EasyID沙门氏菌微量生化鉴定试剂盒在可靠性上与传统生化管完全一致,在使用方便性上,采用一步加样技术的EasyID优于HKM、GSA和GSB。     

2018~2019年南昌市市售生鲜肉中小肠结肠炎耶尔森氏菌污染情况分析

目的 了解南昌市生鲜肉品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的污染现状。方法 以市售的生鲜肉品(猪肉、牛肉和鸡肉)为研究对象,2018年8月～2019年7月期间每月从南昌地区当地超市和农贸市场累进行采样。样品经4 ℃冷增菌,划线CIN平板分离后,对可疑菌进行了生化鉴定。比较分析了不同采样场所、不同类型肉品以及不同采样时间小肠结肠炎耶尔森氏菌的检出情况。结果 采集的480份样品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的平均检出率为14.8%,来自超市的样品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检出率高于农贸市场中的样品;猪肉、牛肉和鸡肉样品的阳性检出率分别为7.0%、18.8%和22.5%,其中猪肉和牛肉样品中污染率最高的均为调理肉;2018年12月～2019年4月采集的样品阳性检出率处在较高水平。结论 生鲜肉品中应重点关注整鸡、调理肉品中小肠结肠炎耶尔森氏菌污染风险,气温较低或低温贮藏的肉品中小肠结肠炎耶尔森氏菌污染风险较高。     

Incidence ofYersinia enterocoliticaand Related Species in Some Fish,Meat and Meat Products in India

A total of 38 samples, including 15 fish products, 11 meat products from retail shops and 12 pork products from a factory place, was examined for the presence of Yersinia species. Six well-known isolation protocols were used. A two-stage enrichment procedure including 48 h incubation of sample homogenates in brain heart infusion at 8–10°C followed by incubation in sorbitol bile broth at 22–28°C for 48 h recovered the highest number of Yersinia spp on cefsulodin–irgasan–Novobiocin agar. A total of 302 isolates, consisting mainly of Y intermedia (74, 41, 25), Y pestis (4, 8, 23), Y enterocolitica (5, 6, 5) and Y pseudotuberculosis (0, 5, 1) was obtained from retail fish and meat products and from factory oriented pork products, respectively. Many of the isolates were not identified to species level because of their unusual biochemical reactions. None of the Y enterocolitica isolates contained the virulence plasmid as evidenced by their biotype (5 and 1) and inability to bind crystal violet.     

Survival of Yersinia enterocolitica During Fermentation and Storage of Yogurt

The fate of Yersinia enterocolitica was investigated during the manufacture and storage of yogurt produced using commercial starter cultures YC470 (rapid acid-producer), YC180 (slow acid-producer), both containing Streptococcus thermophilus and Lactobacillus bulgaricus , and a "home-use" culture that contained these bacteria as well as Lactobacillus acidophilus. Preparations were fermented at 44°C and stored at 4°C. During the first few hours of fermentation, Y. enterocolitica populations increased in all preparations. Y. enterocolitica populations were reduced to undetectable levels after 72 and 96h in YC470 and YC180 yogurt, respectively, but survived up to 144h in "home-use" yogurt. The home-use starter produced lactic acid in greater amounts and more rapidly (p<0.05) than YC470 or YC180 starters, but enabled longer survival. Y. enterocolitica survival was least (p<0.05) in yogurt produced using the YC470 starter culture.