β-桐酸诱导膀胱癌T24细胞凋亡机理

应用Hoechst33342染色对T24细胞进行染色,荧光显微镜下观察T24细胞经β-桐酸处理后的细胞形态学变化;应用流式细胞术分析β-桐酸对T24细胞凋亡率的影响,结果发现,β-桐酸能够诱导膀胱癌T24细胞凋亡。利用蛋白免疫印迹法分析凋亡的相关蛋白表达,发现β-桐酸能上调Bax/Bcl-2比例,并使Caspase-3表达水平上升,这为β-桐酸诱导T24细胞凋亡提供了进一步依据。β-桐酸还能够促进PPARγ的活化,且PPARγ抑制剂能够拮抗β-桐酸对JEG-3细胞生长的抑制作用和凋亡蛋白的表达影响,提示β-桐酸诱导膀胱癌T24细胞的凋亡作用与PPARγ的活化有关。     

反8,反10,顺12-十八碳三烯酸和反8,反10,反12-十八碳三烯酸诱导膀胱癌细胞凋亡

反8,反10,顺12十八碳三烯酸(t8,t10,c12-18:3)和反8,反10,反12十八碳三烯酸(t8,t10,t12-18:3)是来源于金盏花属植物的共轭亚麻酸异构体,其对膀胱癌细胞的影响及作用机理尚未阐明。本实验以膀胱癌T24细胞为体外细胞模型,分别对细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)活性检测,分析了t8,t10,c12-18:3和t8,t10,t12-18:3对相对细胞活力的影响;利用AV/PI双染流式细胞术、蛋白免疫印迹技术对谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)进行检测;通过测定活性氧清除剂(NAC)、抗氧化剂α-生育酚和PPARγ抑制剂T0070907的抑制作用,初步探讨了t8,t10,c12-18:3和t8,t10,t12-18:3诱导膀胱癌细胞凋亡的作用机理。结果表明,t8,t10,c12-18:3和t8,t10,t12-18:3能够显著抑制T24细胞的细胞活力,增加LDH的释放,并呈时间和剂量依赖性。两种脂肪酸都能够明显诱导细胞凋亡,引起Caspase-3/Caspase-9表达增加和Bax/Bcl-2表达比例的升高,并导致ROS和MDA的积累以及GS...     

石榴酸对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

利用MTT法检测石榴酸对T24细胞增殖的影响,利用Hoechst33342染色后观察细胞形态学的变化,并用流式细胞仪检测细胞凋亡率。MTT分析结果显示,石榴酸的半致死浓度(IC50)为30μmol/L。应用荧光显微镜观察Hoechst荧光染色后细胞核形态变化,石榴酸处理T24细胞后,细胞核体积明显变小,并呈现皱缩致密的颗粒状的强荧光。应用流式细胞仪分析石榴酸对细胞凋亡的影响,发现石榴酸能够诱导膀胱癌T24细胞的凋亡,30μmol/L石榴酸处理细胞24h,凋亡率为49.4%。说明石榴酸能够显著抑制膀胱癌T24细胞的活力,有效诱导T24细胞凋亡。     

石榴酸诱导子宫内膜样腺癌细胞凋亡的作用机理

研究了石榴酸诱导子宫内膜样腺癌RL-952细胞凋亡的作用机理.以α-亚麻酸和α-桐酸为对照,通过MTT法检测石榴酸对细胞相对活力的影响,并通过荧光显微镜观察细胞核的形态学变化,应用流式细胞术分析细胞的凋亡率.应用蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白的表达,分析石榴酸对PPARγ和p53蛋白表达的影响.应用荧光染料DCFH-DA...     

人参皂苷Compound K对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响

对人膀胱癌T24细胞进行体外培养,采用MTT方法观察不同浓度人参皂苷Compound K处理细胞24、48、72h后对细胞增殖的抑制作用,利用Hoechst33342对细胞进行染色,荧光显微镜观察细胞形态学变化,应用流式细胞术观察人参皂苷Compound K对T24细胞凋亡的诱导作用,并应用WesternBlotting检测不同浓度人参皂苷Compound K处理后T24细胞中caspase-3及相关蛋白的表达情况。结果显示,人参皂苷Compound K对膀胱癌T24细胞的增殖具有较强的抑制作用,呈浓度和时间依赖关系,并诱导肿瘤细胞凋亡,同时caspase-3活化型表达量增加。说明人参皂苷Compound K能够显著抑制膀胱癌T24细胞的活力,有效地诱导T24细胞凋亡。     

顺铂增强携带IL-24基因的双调控溶瘤腺病毒对结肠癌细胞株的杀伤作用

研究端粒酶逆转录酶启动子hTERT启动子和缺氧反应元件HRE双调控的溶瘤腺病毒SG500-IL24联合化疗药物时人结肠癌细胞株的体外杀伤作用.采用MTT法检测病毒联合化疗对结肠癌细胞株HCT-116、SW620以及人正常细胞株L02增殖的抑制作用;利用Hoechst 33342染色对病毒一化疗疗法诱导的HTT-116细胞凋亡进行形态学观察;通过Western blot检测病毒-化疗疗法诱导的HCT-116细胞凋亡信号通路的变化.结果表明SG500-IL24或不携带外源基因的SG500联合低剂量的顺铂后,其对结肠癌细胞株HCT-116、SW620的杀伤作用显著提高(p<0.05);相同条件下对人正常细胞株L02无明显抑制作用.通过Western blot对联合疗法作用机制的初步探索表明,联合疗法增强caspase依赖性细胞凋亡通路的信号.     

微波辐射损伤大鼠神经胶质细胞的初步研究

旨在揭示特定频率及强度微波辐射对周围神经胶质细胞的影响。对周围神经系统神经胶质细胞系雪旺细胞进行微波辐射后,通过检测细胞活性、细胞凋亡率,蛋白质水平的超级氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性以及胞内物质活性氧簇(ROS)和谷胱甘肽(GSH)的含量,探讨微波辐射对神经胶质细胞的影响。经频率为2.45GHz,功率密度为1mW/cm2的微波辐射后,雪旺细胞的过氧化氢酶和超氧化物歧化酶的活力随时间的延长而升高,其细胞活性随时间的延长而降低,同时细胞凋亡率升高。模拟移动电话微波辐射将诱导大鼠神经胶质细胞出现细胞凋亡,同时细胞抗氧化系统的积极响应说明氧化损伤可能是导致细胞凋亡的原因之一。     

幽门螺杆菌VacA毒素诱导凋亡

研究了天然VacA细胞空泡毒素蛋白诱导细胞空泡和凋亡的生物学活性.培养空泡毒素阳性的Hp菌株,超声碎菌后提取上清,用SDS—PAGE分析上清中目的条带,测定其蛋白含量,用电镜观察VacA致Hela细胞空泡样变,然后用MTT法检测Hela细胞的生长曲线后,分别用MTT法分析VacA对Hela细胞的生长抑制作用,以及用TUNEL法和流式细胞技术检测VacA蛋白致凋亡的细胞毒活性.实验结果表明,在PAGE上可见相应VacA蛋白条带,电镜下天然VacA毒素致Hela细胞空泡化明显,因此VacA毒素可以抑制Hela细胞的生长,并且诱导其凋亡;在倒置显微镜下观察可见细胞空泡、脱落,胞浆浓缩,胞核皱缩、碎裂,呈现圆形固缩状态.MTT法数据示H.pylori Va-cA蛋白具有浓度依赖性地致细胞毒活性,光镜下可见TUNEL法中可显示棕黄色凋亡细胞,因此证明幽门螺杆菌VacA蛋白有明显的诱导Hela细胞凋亡的作用.     

D-半乳糖诱导HepG2细胞氧化应激模型的建立

以D-半乳糖为氧化应激诱导物,用不同浓度(0、37.5、75、150、300 mmol/L)D-半乳糖作用不同时间(24、48、72 h)诱导HepG2细胞氧化损伤,通过检测细胞存活率(MTT法)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,结合细胞周期分析,研究D-半乳糖的最佳诱导浓度。结果表明:同对照组相比,当D-半乳糖浓度为150 mmol/L时,诱导48 h后,细胞中MDA含量显著上升;细胞中SOD、GSH-Px活性显著降低;细胞周期受到影响,G1期的细胞比例上升,S期的细胞比例降低。D-半乳糖浓度为150 mmol/L,作用时间48h,能够建立D-半乳糖诱导Hep G2细胞氧化应激模型。     

增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24体外杀伤肝癌细胞的研究

研究溶瘤腺病毒SG511携带由热激蛋白70(hsp70)启动子调控IL-24构成的增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24对人肝癌细胞株的体外杀伤效果.实验采用ELISA法检测不同MOI值感染肝癌细胞SMMC-7721和Hep3B细胞3 d后IL-24的表达;MTT法检测SG511、Ad11-IL24以及SG511-pHSP70-IL24对肝癌细胞株SMMC-7721、Hep3B以及人正常成纤维细胞株MRC-5及BJ增殖的抑制作用;并通过结晶紫实验检测进一步证明联合用药对肿瘤细胞的杀伤情况.ELISA检测到SG511-pHSP70-IL24感染SMMC-7721和Hep3B细胞后,IL-24有明显表达;MTT实验结果表明SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强.同时结晶紫实验也证明了SG511-pHSP70-IL24对肿瘤细胞的杀伤能力比SG511和Ad-IL24更强.增殖型溶瘤腺病毒SG511-pHSP70-IL24相比腺病毒Ad11-IL24以及SG511,对肝癌细胞有较明显的生长抑制和凋亡诱导作用.     

负载食管癌抗原肽的脐血树突状细胞诱导杀瘤活性研究

为探讨负载酸洗脱食管癌抗原肽的脐血树突状细胞(DCs)对细胞毒T细胞(CTL)杀伤活性的影响,本研究采用密度梯度离心法分离脐血中的单个核细胞(CBMNC),在重组人粒巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组白介素(rhIL-4)及重组肿瘤坏死因子(rhTNF-a)的配伍作用下,以酸洗脱食管癌抗原肽负载获得分化成熟DCs,利用CytoTox 96试剂盒检测其对特异性CTL的诱导和体外杀伤效应的影响。结果:负载食管癌抗原肽的脐血DCs诱导的CTL对酸洗前食管癌细胞株T.Tn的杀伤率达(78.5±9.5)%,显著高于酸洗后组和各对照组(P<0.05),而对无关肿瘤细胞株Hep2无显著杀伤作用(P<0.05)。结论:负载食管癌抗原肽的脐血DCs体外可诱导CTL产生特异性杀伤效应。本研究为食管癌的免疫治疗提供了新的有效途经。     

CDK抑制剂SNS-032联合AD55-Apoptin对肝癌细胞Huh-7的体外抗癌作用

通过CDK抑制剂SNS-032联合AD55-Apoptin处理肝癌Huh-7细胞,以探究两者联合作用的体外抗癌作用。采用MTT法分别检测SNS-032、AD55-Apoptin以及SNS-032与AD55-Apoptin联合对肝癌细胞株Huh-7生长的抑制作用;利用Hoechst33342染色观察所处理细胞的凋亡形态学变化,采用流式细胞术对凋亡进行量化,Western Blot检测凋亡相关蛋白表达情况。结果表明:10MOI的AD55-Apoptin联合100ng/mL的SNS-032处理96h后,Huh-7细胞的存活率仅为4%,而10 MOI的AD55-Apoptin和100ng/mL SNS-032分别单独处理后细胞存活率为60%和8%(P0.05);Hoechst33342染色、流式检测及Western Blot结果表明,联合处理组细胞凋亡现象更明显。实验结果证明SNS-032联合AD55-Apoptin能有效的抑制肝癌细胞Huh-7生长,并诱导其凋亡。     

PEEK-SPEEK-HA复合材料与U2OS细胞相容性研究

体外培养U2OS细胞,通过噻唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltet razolium bromide,MTT)法研究新型聚醚醚酮-羟基磷灰石(polyetheretherketone-hydroxyapatite,PEEK-HA)生物复合材料对细胞增殖的影响.研究发现,聚醚醚酮-磺化聚醚醚酮-羟基磷灰石(polyetheretherketone-sulfnated polyetheretherketone-hydroxyapatite,PEEK-SPEEK-HA)复合材料的细胞增殖作用较PEEK-HA复合材料强,且随着HA含量的增加细胞增殖作用增强,材料浸提液质量浓度为4~8 mg/m L时对细胞有较好的增殖促进作用.复合材料毒性级别为Ⅰ,对细胞无毒性.测定黏附率研究该材料对U2OS细胞的黏附特性,PEEKSPEEK-HA复合材料随着HA含量的增大,细胞黏附率增加,高于PEEK-HA复合材料组,表明加入HA和SPEEK能改善复合材料的黏附性能.采用流式细胞术研究材料对细胞凋亡的影响,发现加入SPEEK的PEEK-HA复合材料能抑制细胞发生早期凋亡,从而降低凋亡率.激光共聚焦和流式细胞仪检测该材料对细胞活性氧的影响发现,SPEEK引入复合材料能够降低细胞活性氧水平,降低细胞毒性.扫描电镜实验表明,U2OS细胞能够在PEEK-SPEEK-HA复合材料表面黏附、伸展和生长.     

梯度低氧及葡萄糖剥夺对脑胶质瘤细胞凋亡及增殖的影响

探讨不同低氧浓度及葡萄糖剥夺对脑胶质瘤细胞(T98G)凋亡及增殖的影响.T98G细胞分别于常糖和无糖下培养,并分别在21%O2,3%O2,0.5 O2%,0.1 O2%下培养24 h,48 h,72 h,流式细胞仪及Hoechst染色检测细胞凋亡,MTT法检测存活及增殖.各常糖组均无明显细胞凋亡(P0.05);而各无糖组均有明显细胞凋亡(P0.01),常氧无糖组凋亡较3%、0.5%低氧无糖组显著,且随时间延长,细胞凋亡率递增(P0.01).常氧无糖组48 h凋亡率比0.1%低氧无糖组高,至72 h时低于0.1%低氧无糖组.MTT示低氧可促进T98G细胞增殖,3%O2常糖组呈现明显增殖趋势,但0.5%及0.1%低氧增殖率减慢,各无糖组细胞增殖均显著受到抑制,但无糖低氧组细胞较无糖常氧组生长好.研究显示葡萄糖存在的条件下,适度低氧促进脑胶质瘤细胞存活及增殖,氧浓度低至0.1%,72 h以内仍无明显凋亡,但较常氧下增殖减慢,提示低氧不能作为独立因素诱导胶质瘤细胞发生凋亡,而葡萄糖剥夺可独立诱导脑胶质瘤细胞发生凋亡;0.5%及以上浓度的适度低氧对无糖逆境中及脑胶质瘤细胞有一定的抑制凋亡和促增殖作用.48 h内极度低氧浓度(0.1%)对无糖逆境中胶质瘤细胞仍具有抑制凋亡作用,但随着时间的延长,这种抗无糖逆境抑制凋亡的能力将消失.     

乳酸菌发酵对绿豆粉功能特性及风味特征的影响

为探究经乳酸菌发酵后绿豆粉的功能特性及风味特征,分别采用植物乳杆菌(LP90)、干酪乳杆菌(LC89)和嗜酸乳杆菌(LA85)对绿豆粉进行不同时间发酵处理,比较不同乳酸菌发酵对绿豆粉的pH值和总酸(TTA)、游离总酚、总黄酮、抗营养因子含量及抗氧化能力的影响,并通过顶空固相微萃取和气相色谱-质谱联用法对风味物质进行分析鉴定。结果表明：与LC89、LA85相比,LP90表现出更好的发酵性能,绿豆粉的总酸含量最高;与未发酵组(LBF)相比,LP90发酵24 h后绿豆粉的游离总酚和总黄酮含量显著升高(P<0.05),抗营养因子缩合单宁和植酸含量显著降低(P<0.05),抗氧化能力显著提升(P<0.05);通过气相色谱-质谱联用法共鉴定出77种挥发物;乳酸菌发酵丰富了挥发性风味化合物的种类,减少了己醇、辛醛、壬醛、庚醛和1-辛烯-3-醇等不良风味,LP90发酵绿豆粉的挥发性风味物质种类比LC89和LA85的更丰富。综上可知,植物乳杆菌LP90发酵可以更好地改善绿豆粉的生物功能和风味特征。     

外源核苷酸对肠上皮细胞增殖和迁移的作用

目的本研究通过对体外培养的大鼠小肠上皮细胞IEC-6添加核苷酸,探讨四种单核苷酸及其按母乳组成模式配制的核苷酸混合物对肠上皮细胞增殖和损伤后迁移的影响.方法采用MTT法测定核苷酸对细胞增殖的浓度-效应和核苷酸之间对细胞增殖效应的相互作用;采用IEC-6单层肠上皮损伤重建立模型测定细胞损伤后迁移;通过免疫组化检测TGFβ的表达.结果嘌呤核苷酸AMP和GMP分别在30(mol/L和150(mol/L及以上能显著抑制IEC-6细胞的增殖并表现浓度依赖,嘧啶核苷酸CMP仅在极高浓度(1440(mol/L)时对细胞增殖有一定的抑制作用, UMP和核苷酸混合物在受试浓度范围内未见明显作用,但是,CMP和UMP能解除嘌呤核苷酸AMP和GMP对细胞增殖的抑制.180(mol/L核苷酸混合物能促进细胞损伤后迁移,但不诱导TGFβ的表达.结论嘌呤核苷酸抑制肠上皮细胞增殖,而嘧啶核苷酸能解除嘌呤核苷酸的抑制作用.核苷酸混合物能通过非TGFβ依赖的途径促进肠上皮细胞的损伤后迁移.     

携带IL-24的溶瘤腺病毒联合5-Fu对NCI-H460肺癌细胞的生长抑制效应

研究利用携带IL-24的溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合化疗药物5-氟尿嘧啶(5-Fu)对肺癌细胞NCI-H460生长的体外抑制效应。利用RT-PCR和Western blot法分别检测了IL-24在转录和翻译水平分析,发现IL-24在经ZD55-IL-24感染的NCI-H460中能有效表达,而未感染ZD55-IL-24的NCI-H460则无表达;用结晶紫染色法定性分析了ZD55-IL-24联合5-FU对NCI-H460的生长抑制和杀伤作用,结果表明联合应用比单用时效果更显著;通过MTT法进行的定量分析也表明ZD55-IL-24与5-FU联合处理48 h后,NCI-H460的增殖抑制率显著高于单用ZD55-IL-24或5-FU(P0.05);最后,用Hoechst33258染色法观察了细胞凋亡,结果也显示联合应用ZD55-IL-24和5-FU组的细胞凋亡现象比单用的显著。本研究初步证实了ZD55-IL-24显著提高了NCI-H460对化疗药物的敏感性,联合疗法对肿瘤细胞的杀伤作用明显增强。     

人肺癌细胞5-氟脲嘧啶耐药株的建立及其生物学特性分析

建立人肺癌5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)的耐药细胞株H460/5-FU,并对其生物学特性进行分析。实验采用浓度梯度递增法诱导肺癌细胞耐药,建立肺癌细胞耐药模型。采用四甲基偶氮唑蓝法(MTT),计算H460和H460/5-FU的半数抑制浓度(IC50)及耐药系数(RI);通过流式细胞仪分析H460和H460/5-FU的细胞周期分布;光镜观察细胞形态变化;通过流式细胞仪进行SP(side population)细胞检测,比较SP细胞所占比例;做细胞生长曲线和集落形成实验观察细胞生长及倍增情况。结果表明5-FU对H460和H460/5-FU的IC50分别为28.7μg/mL和90.44μg/mL,RI为3.15;H460/5-FU细胞倍增时间缓慢,DNA复制时间延长,且含有更多的SP细胞。     

黄连素对恶性胶质瘤C6细胞增殖抑制和诱导凋亡作用

研究黄连素对恶性胶质瘤C6细胞增殖、凋亡的影响.用MTT法分别检测不同浓度的黄连素对恶性胶质瘤C6细胞体外抑制率.通过不同时间、不同浓度的黄连素对胶质瘤C6细胞的作用,于倒置相差显微镜下观察C6细胞的形态变化,以及Western Blot检测PARP的特异性切割.MTT实验结果表明黄连素对恶性胶质瘤C6细胞生长的抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增加(P0.05).除了在48 h,药物浓度63.7μmol/L,191μmol/L之间的抑制率无差异(P0.05),其余不同浓度之间具有统计学意义.黄连素作用下C6细胞变圆、胞质回缩、贴壁细胞悬浮脱落,细胞发生凋亡,进一步Western Blot检测PARP发生特异性切割.黄连素对恶性胶质瘤C6细胞体外增殖有抑制作用,同时诱导细胞凋亡.本研究证明黄连素有一定的抑癌作用,可望成为一种新型的抗胶质瘤药.     

用MTT法检测羊胎盘免疫调节因子对T淋巴细胞增殖活力的影响

目的:建立MTT比色法;用MTT法观察羊胎盘免疫调节因子(GPIF)对T淋巴细胞的调节功能.方法:以正交实验设计四个因素三个水平来筛选MTT实验最佳条件,用3批次GPIF重复实验来证明MTT法的重复性;以MTT比色法为检测手段,通过体外实验及动物实验来观察GPIF对T淋巴细胞增殖活力的影响.结果:MTT法的最佳实验条件为细胞浓度106个/孔、刀豆蛋白浓度5μg/ml、培养结束前4h加入MTT继续孵育,整个细胞培养过程为48h;GPIF可以促进正常T淋巴细胞的增值活力(P＜0.01),显著恢复T淋巴细胞增殖活力的抑制(P＜0.05).结论:MTT法可作为检测GPIF活性的稳定方法;GPIF可促进T淋巴细胞增殖活力,增强T淋巴细胞介导的细胞免疫功能.