紫菜无性系特异分子标记的获得

用RAPD技术对我国紫菜生产中广泛应用的15个无性系丝状进行了遗传多样性分析,用120个Operon引物进行了筛选,从中挑选可以扩增出清晰,稳定,重复性好和多态性高的8个引物,并用这8个引物从15个无性系中找到了8个特异的RAPD分子标记,而且分别来自8个不同的无性系,利用这些标记可以有效地对这8个无性系进行特异性鉴定,现已完成了对这些RAPD特异产物的回收和克隆,把它们转换成SCAR标记或STS标记的工作正在进行中,这些特异标记的发现对紫菜无性系种质鉴定,持久合理利用以及产权保护具有重要意义。     

玉米对生性状两个显性基因SCAR分子标记

把与玉米对生叶突变体对生性状两个显性位点紧密连锁的RAPD标记S312377与S360602成功地转化成SCAR标记CBJ1与CBJ2。对RAPD片段的纯化、T－A克隆、SCAR PCR引物的设计等SCAR标记转化进行了探讨，并对CBJ1与CBJ2进行了验证，为对生玉米的分子标记辅助选择与定位克隆奠定了基础。     

松杨栅锈菌小种特异性DNA片段的SCAR标记转换

用SCAR标记技术对松杨栅锈菌生理小种特异性DNA片段进行了转化和检测研究.通过对RAPD随机引物的扩增筛选,发现随机引物BAO118扩增产生的约700bp的DNA片段与松杨栅锈菌小种特异性相关联.将该片段进行回收、TA克隆、双向测序和序列整合后,序列全长685bp,3'端有BAO118随机引物序列.根据整合后序列,用Primerselect软件设计了一对包含随机引物序列的简并引物对.用该引物对对供试菌样进行PCR扩增,成功获得了松杨栅锈菌小种685bp的SCAR标记.用该标记进行田间混合孢子菌样、单孢子接种菌样DNA检测,均得到了685bp的DNA片段,不受寄主DNA和孢子菌系类型的影响,具有较好的稳定性和特异性.     

五个紫菜品系间遗传差异的RAPD分析

应用随机引物扩增片段多态性（RAPD）技术对2种紫菜的5个品系进行遗传多样性分析。共筛选出21条随机引物,PCR反应得到147条扩增片段。根据共享扩增片段计算遗传相似性指数（F）和相对遗传距离,利用NJ法构建系统树。结果表明,条斑紫菜或坛紫菜的养殖品系首先聚类在一起,两个条斑紫菜养殖品系之间的遗传距离是0．32,两个坛紫菜养殖品系之间的遗传距离是0．31。条斑紫菜养殖品系CPY1－08A与坛紫菜养殖品系CPH8－83之间的遗传距离最大,达0．42。本文结果显示RAPD可以作为简便有效的分子工具应用于紫菜的遗传多样性和种质鉴定研究中。     

坛紫菜5.8S rDNA和ITS区片段的序列分析及应用

对坛紫菜(Porphyra haitanensis)野生(GL)和栽培(PXV)品系的5.8S rDNA-ITS兀区进行了PCR扩增和序列分析,扩增的GL和PXV的DNA片段长度分别为1213 bp和1221bp,包含完整的ITS1-5.8S-ITS2区.然后对紫菜7个种9个品系(其中6种7个品系从GenBank数据库中获得)的rDNA相应序列进行了排序和系统进化分析,结果表明:9个紫菜品系rDNA中5.8S区的长度和序列非常保守,而ITS区的长度和序列则变异较大;根据它们的序列差异,计算出这9个紫菜品系的遗传距离在0.010～0.551之间,遗传相似性在44.9%～99%之间;并且采用邻接法构建了这9个紫菜品系的系统发育树,发现可以明显分为4个进化枝,由此讨论了分子分类方法同传统分类方法的分歧.实验结果表明,5.8S rDNA.ITS区序列可以成为紫菜种质鉴定和系统进化研究的强有力工具.     

应用RAMP分子标记探讨仲彬草属的种间关系

对仲彬草属Kengyilia14个种和1个变种进行了RAMP分析。结果表明物种间遗传差异明显。40个引物组合产生的254条DNA扩增片段中，216条(85．0％)具有多态性，每个引物组合可扩增出l一9条多态性带，平均5．4条。遗传相似系数变化范围为0．327—0．886，平均值为0．549。同时，形态相似、地理分布一致的物种有一定的亲缘关系，聚类在一起。这与RAPD、形态学和细胞学等分析结果基本一致。因此，RAMP评分子标记是评价仲彬草属种间关系十分有效的方法。     

龙须菜藻红蛋白亚基基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

用PCR扩增方法得到真核红藻－龙须菜藻红蛋白亚基基因序列,与其它6种已知红藻相应序列比较,显示了很高的保守性。在7株藻中β亚基比α亚基保守,α亚基倾向于小区域保守,而β亚基倾向于大片段的保守。该蛋白必需氨基酸的含量较高。藻红蛋白亚基基因在大肠杆菌中达到较高的表达量,诱导4小时,特异表达产物占菌体可溶性蛋白的44％,表达产物呈溶解状态,而两亚基可能是分别翻译的。     

抗 SMV 栽培大豆种质资源的 SCAR 标记指纹图谱分析

依据与ＳＭＶ（ＳｏｙｂｅａｎＭｏｓａｉｃＶｉｒｕｓ）抗性基因紧密连锁的共显性ＳＣＡＲ标记ＳＣＷ—０５６６０的序列测定结果，合成了两对ＳＣＡＲ（ＳｅｑｕｅｎｃｅＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄＡｍｐｌｉｆｉｅｄＲｅ－ｇｉｏｎｓ）标记特异引物，对３０个栽培大豆品种进行了指纹图谱分析。结果表明，较短的片段Ｓ—５６００和Ｓ—０５６６０是抗病品种的特征性条带；而较长的片段Ｓ—５１０００和Ｓ—５１６００是感病品种的特征性条带。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果表明，这两对引物扩增出的条带具有同源性。     

β-半乳糖苷酶基因(lacZ)在海藻裙带菜中的稳定表达

借鉴海带遗传转化模式，利用基因枪法将β-半乳糖苷酶基因(lacZ)导入裙带菜雄配子体中，一部分诱导形成营养增殖的丝状体，另一部分和雌配子体受精生成孢子体。五个月后组织化学染色结果表明5％的孢子体个体和30％的丝状体细胞表现了lacZ的稳定表达，利用PCR和PCR-Southem检测得到了预期的阳性信号。本文结果提示了利用基因枪转化方法．以雄配子体介导获得外源基因在裙带菜中稳定表达的可行性．     

单向锚定PCR富集扩增在克隆低丰度基因转录本中的应用

利用国际生物信息资源，通过计算机检索寻找与已知功能基因具有高度同源的ＥＳＴｓ，据此设计特异的ＰＣＲ扩增引物，并通过单侧特异引物搭配ｃＤＮＡ分子库载体引物（锚定引物），在低严紧条件下扩增各种组织的ｃＤＮＡ分子库以富集目标片段。继以单向锚定ＰＣＲ扩增产物为模板，用双侧特异引物再次扩增，获得的特异扩增ＰＣＲ产物经测序证实之后，将其用作探针杂交筛选相应的ｃＤＮＡ文库并进而克隆目的基因的全长ｃＤ－ＮＡ。此方法用于三个人类新基因的全长ｃＤＮＡ的分离与克隆，结果全部获得成功。这三个人类新基因分别是Ｈ－ＲａｌＧＤＳ基因、Ｈ－ＣＩＳ基因和Ｈ－Ｓ６ＰＫ基因，它们在ＧｅｎＢａｎｋ数据库的登录号分别是：ＡＦ０２７１６９、ＡＦ０３５９４６及ＡＦ０３７４４７。本文结果提示这一方法对于应用现有的人类基因组生物信息资源，克隆具有重要生物学功能的人类新基因，尤其是克隆呈低丰度的基因转录本全长序列具有较高的实用价值。     

斑马鱼和稀有(鱼句)鲫的SCAR标记建立及其异种克隆胚的检测

以斑马鱼和稀有(鱼句)鲫的基因组DNA进行RAPD分析,获得特异的RAPD标记,经克隆、测序,合成特异性引物并优化SCAR-PCR反应条件,将四个特异的RAPD标记转化成稳定的SCAR标记.SCAR1、SCAR3和SCAR2、SCAR4分别在斑马鱼与稀有(鱼句)鲫基因组DNA扩增中产生单一的条带,可作为区分斑马鱼和稀有(鱼句)鲫的分子标记.此外,SCAR3和SCAR4还可以分别将斑马鱼和稀有(鱼句)鲫从鲫鱼、白鲢、鲤鱼、鳊鱼等其它鱼类中鉴别出来,从而成为良好的种质鉴定分子标记.在此基础上,选用SCAR标记进行了斑马鱼与稀有(鱼句)鲫配合的鱼类异种克隆胚胎鉴定研究,结果发现,克隆胚由供体核支持发育而来.SCAR标记的获得,为鱼类异种间克隆胚胎和克隆鱼的检验,以及细胞核再程序化机制等重大理论问题的探索提供了重要的技术支持.     

与大豆孢囊线虫病抗性相关的RAPD标记

利用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术，对７个抗大豆孢囊线虫的大豆材料和１０个感病大豆品种的基因组ＤＮＡ进行了ＲＡＰＤ分析，供试的２００个随机引物均产生了清晰稳定的ＲＡＰＤ扩增产物，其中有２１个随机引物产生的ＲＡＰＤ扩增产物具有多态性。获得了５个与大豆孢囊线虫病抗性相关的ＤＮＡ片段，这些ＲＡＰＤ标记具有较高的重复性和稳定性，可辅助抗大豆孢囊线虫病大豆新品种的选育。     

水稻种子脂肪酶与储藏特性及相关基因SCAR标记的研究

通过离子束诱变皖鉴2090后代脂肪酶活性检测分析,获得了脂肪酶活性高低的近等基因系.利用人工加速老化实验进行了耐储藏性评价,并从近等基因系中选取一对脂肪酶活性不同的材料进行RAPD标记筛选,在650条随机引物中经过多次重复筛选,引物S1302、S1380在脂肪酶活性低的品种中稳定地显示特异的多态性.其中S1302被转化为SCAR标记.该标记的获得为进一步的分子标记辅助育种和图位克隆打下了坚实的基础.     

大豆灰斑病1号生理小种抗性基因的RAPD标记

以高抗品种东农９６７４为父本,以高感品种东农８７－１０４为母本,杂交得到Ｆ２代群体。该群体经人工接种灰斑病１号生理小种后,分别从抗、感材料中取１５株的叶片提取ＤＮＡ组成抗,感池,用８２０个１０ｍｅｒ随机引物进行ＲＡＰＤ多态性分析,其中３个引物在抗,感池间出现稳定的多态性标记ＯＰＫ０３８４０,ＯＰＭ１７１７００,ＯＰＯ１０９５０,并在Ｆ２代个体中表现出抗性与多态性标记协同分离的趋势,这三个标记与抗性     

Biocompatible porous ceramics for the cultivation of hematopoietic cells

Porous ceramics made of alumina and hydroxyapatite were created using a protein foaming method. Porosity and pore size distribution were successfully varied by means of chemical modification of the foaming protein Bovine serum albumin (BSA). The effectiveness of the BSA and of its chemical modifications as well as the influence of the dispersing agent were investigated using synchrotron tomography. Resulting porous ceramic materials were used as three-dimensional substrates for the cultivation of human peripheral stem cells. The cells proliferated and differentiated in culture. Five cell lines consistent with human blood cell lines were observed.     

天花粉蛋白基因在水稻中转化及抗虫研究

利用基因枪转化法将天花粉蛋白基因导入水稻。经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和Ｎｏｒｔｈ－ｅｒｎ杂交分分析证明外源基因已整合到水稻基因组中并有转录。抗虫试验表明,与对照比较转基因水稻明显地增强了对螟虫、稻飞虱的抗性。     

条斑紫菜锰超氧化物歧化酶基因克隆与序列分析

为研究紫菜抗逆抗病的分子机制,以本实验室建立的条斑紫菜表达序列标签(EST)和全长cDNA富集文库,结合PCR技术,克隆了条斑紫菜编码锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD)的cDNA及基因组DNA全长序列,并进行了序列特性相关分析.研究结果表明:该基因cDNA序列全长为958个核苷酸,包含一个完整Mn-SOD基因的ORF,编码224个氨基酸和终止密码子;该基因在基因组中序列长度为1416bp,包含4个外显子和3个内含子,这既不同于高等植物的6个外显子和5个内含子,也不同于人的5个外显子和4个内含子;该基因编码区密码子的平均GC含量为60.9%,第三位密码子的GC含量高达84.9%;序列中包含4个与Mn2 的结合位点及一个保守的金属结合结构域,预测分子量为24469.09Da,等电点为5.99;条斑紫菜Mn-SOD与人的相关蛋白具有类似的空间结构,都有6个跨膜α螺旋结构域;由cDNA序列推导的氨基酸序列与莱茵衣藻相似性为57.7%,系统发生分析表明条斑紫菜Mn-SOD与绿藻莱茵衣藻和硅藻海链藻的亲缘关系较近.这是该基因在红藻门中的首次报道.