耳蜗透射电镜超薄切片样品的制备技术改进

针对耳蜗组织透射电镜样品制备难度大,不易获得质量较好的超薄切片的问题,作者通过延长锇酸后固定时间和增加树脂渗透的浓度,改善了树脂包埋组织的切割性能.电镜图片显示,明显地提高了超微切片样品制备质量.     

生物样品的冷冻超薄切片术

当生物材料在样品制备过程中需减少化学固定剂对样品中蛋白活性的影响或减少可溶性元素流失时,可采用快速冷冻固定法和冷冻超薄切片。切片在含水状态下或经冷冻干燥后,用电镜观察,这样既能显示生物细胞在体内的形态,又使细胞内各种活性得以保存,是一种值得推广的电镜技术。我们采用新鲜活组织快速冷冻固定和冷冻超薄切片,经冷冻干燥后在透射电镜下对亚细胞结构进行形态观察和微小区域内的元素定性、定量分析,本文总结了初步结果和经验。     

微型振荡器在超薄切片样品制备技术中的应用

在实验工作中,我们引用微型振荡器对生物样品的固定与浸透作了一些研究和技术改进,收到较好效果。具体操作方法如图所示:将放有冰水的圆形容器B先固定在微型振荡器的振台(北京海淀电子医疗仪器厂生产)上,再将放有样品和试剂的样品杯A插入B盘的孔中,即可开启微型振荡器C,振荡频率可视样品而定。我们先后用植物材料(叶)、动物材料(肺)和游离细胞(精子)为实验材料,整个固定脱水和浸透的时间可缩短     

高分子材料的冷冻超薄切片技术

本文使用冷冻超薄切片装置对高聚物材料包括共混物的切片获得了较好结果,並介绍了作者在高分子材料的冷冻超薄切片技术方面的一些经验。     

冷冻超薄切片技术用于高分子材料的透射电镜研究

高分子材料一般质地较软,有很大韧性,常规的冲击断裂断口观察主要用于扫描电镜,而透射电镜(TEM)观察要求样品厚度在100 nm以下,因而对高分子材料需经过前处理,而冷冻超薄切片适用于高分子材料的前处理,是一种有效的透射电镜制样方法.不同的高分子材料其厚度、强度、韧性、玻璃化转变温度以及吸水性都有所差别,因此材料的前处理...     

骨髓活检组织超薄切片及细胞化学技术的研究

本文对骨髓异常增生综合症患者的骨髓活检组织,作了环氧树酯包埋前染色的电镜观察,现将此技术方法的初步体会报导如下:取材用骨髓活检针钻取髂后上嵴骨髓组织(5mm×1mm)一块,迅速投入1％戊二醛内(用0.1M二甲胂酸缓冲液pH7.2～7.4配制)。固定将活检组织切成1mm×1mm小块,再放入1.0％戊二醛内固定15分钟,同上的缓冲液清洗3次,每次10分钟。标本分作2份,1份用2.5％的戊二醛继续固定2小时,同上的缓冲液清洗3次后,再用1％O_sO_4(0.2M二甲胂酸缓冲液配制)固定1小时,留作常规超微结构标本制备用。另一份放入0.1M二甲胂酸缓冲液内留作     

电子显微镜在树脂包埋之超薄切片上原位杂交病毒核酸

原位杂交已成为细胞生物学、生长分化学及遗传学上有效之工具,来标定组织切片之核酸。近年来,非放射性标定之使用已使此项技术用在电子显微镜层次之机会大为提高。所以,此项技术可以用来标定有兴趣之核酸在光学显微镜上所不能观察之细胞部位。在本研究里,原位杂交技术已发展成熟,可在Lowicryl包埋之植物组织超薄切片上标定病毒核酸,竹嵌纹病毒(Bamboomosaic virus,BaMV)含有单链正股之RNA基因组,用为模式病毒。     

超薄切片防污染电子染色法

由Huxley&Zubay在1961年创建的利用铀和铅的盐进行双重电子染色法,现已成为电镜生物样品制备的常规操作之一。而这一方法往往会产生染色污染会影响观察及拍照。虽然不少学者在染色器具内放置NaOH或充满氮气等方法来避免这一缺点,但这些没能完全隔离二氧化碳和防止铀染液的蒸发。我们为了消除染色污染原因作了如下实验并取得了满意结果。材料与方法:1制备脱CO_2水:把双蒸水置于三角烧瓶内煮沸5～10min。用碳石灰盖(在胶栓上穿有玻璃管,管中装有硷石灰,其两端用脱脂棉栓住)盖上三角烧瓶,进行自然冷却。用该水来配制铅染液。     

电镜超薄切片真空染色法

介绍一种简便易行的超薄切片真空染色法。使用简单易得的工具及自制装置-真空保鲜盒、染色硅胶板和染色硅胶板架,能够得到较好的染色效果。结果显示,与目前现有的传统方法相比较,超薄切片真空染色法省时、省试剂,染色效果好,一次可进行大批量切片染色(一次可达200张超薄切片)。     

超薄切片玻璃刀制作技术及使用方法的探讨

我们在长期的超薄切片实践中发现,在刀根小于1mm的条件下,玻璃6刀口的最佳切割位置与传统概念不相符合,甚至相反,即右侧刀口(通常认为不能用来切片)不但不是切片“禁区”,而且比左侧刀口(传统认为是最佳刀口)锋利、耐用。为此,我们利用光学显微镜(LM)、扫描电镜(SEM)及透射电镜(TEM)对刀口的不同部位及其切片进行了观察研究,为如何正确使用和改进玻璃刀口提供了有价值的资料。     

超薄切片法研究多相催化剂孔结构

对多相催化反应,分子在催化剂中的扩散是需要研究的基本问题之一。这就涉及到催化剂孔结构(孔大小及其分布、孔形和孔容等)的测定。现有催化剂孔结构测定方法,如压汞法、气体吸附法等都乃是简接法,况且在应用时一般都须借助于假设孔模型来进行。事实上,实用催化剂的孔结构是十分复杂的。因此,至今对它的了解还是不够充分的。本文采用金钢石刀超薄切片制样(文内详细作了介绍)揭示了催化剂孔结构。根据实验结果进行了三方面的讨论:1.电镜制样方法的比较,说明超薄切片法使得能在显微图上完整地呈现试样的孔结构。若实现连续切片,则孔道在催化剂中的空间构型(三维分布)也可获得。2.关于催化剂孔的构成,可分成三种类型:①粒间孔(由带有微孔的粒子聚结可能构成双型孔)、②晶内孔、③腐蚀孔。3.关于孔度的测定问题。     

植物花粉管超薄切片中的细胞定位─—薄层包埋法

植物花粉管超薄切片中的细胞定位─—薄层包埋法罗玉英（首都师范大学，北京１０００３７）在植物生殖生物学研究中，常常需要观察某几个或某一个细胞的结构特点。如花粉管中的生殖细胞，营养核或精细胞在发育过程中超微结构的变化，它们之间的联系等。要保证超薄切片中准...     

聚焦离子束技术制备超薄TEM样品-X2样品台的应用

聚焦离子束技术在制备TEM样品方面得到了广泛的应用。普通传统的制样减薄方法存在远端薄区极易弯曲和薄区厚度不均匀的问题。针对存在的这些问题本文使用Zeiss公司的X2样品台采取交叉减薄的方法制备一个具有均匀的极薄的TEM样品。本文主要介绍X2样品台的工作原理和交叉减薄的实验过程,并分析了该方法在制备TEM样品时存在的优缺点以及其独特的适用性。     

微波辐射超薄切片快速染色法

本文介绍一个微波辐射超薄切片快速染色法。该方法与常规染色方法相比具有以下突出优点:染色速度快且操作简便,整个染色过程可在数分钟内完成;经微波辐射染色处理的动植物组织切片染色均匀,污染少,反差比常规染色法稍强。动植物组织切片微波辐射染色的最佳辐射时间有所不同,铀染色动植物组织切片最佳辐射时间均为30秒;铅染色动物组织切片最佳辐射时间为30秒,而植物组织切片为20秒。染色液经微波辐射后的温度应控制在20～40℃。     

温度对制备超薄切片的影响

保存生物样品的生活状态和制备出完整而清晰的超微结构，是保证电镜观察效果的前提，而近几年的样品制备中，同批样品常伴有结构模糊、反差弱的现象发生，究其原因，只有前固定不是本实验室所为，是否与固定温度有关，香港大学徐是雄博士认为：过低温度会造成细胞内微管的消失。但传统的固定温度是0℃～4℃，有关动、植物样品的常规固定最佳温度及如何利用冰箱固定保存样品，-18℃冷藏样品怎样处理才能得到接近生活状态的超微结构，到目前为止，研究报道的甚少。本文仅就作者多年来，常规制样中发现的值得同仁注意的现象设计了不同的实验方案，探讨温度在样品制备中的作用，以增加优质超薄切片高重复率。     

电镜超薄切片批量染色的新方法

超薄切片染色是透射电镜生物样本制备中的关键环节。本文介绍了一种透射电镜超薄切片染色的新方法,利用简单自制的染色液防污存储与批量染色装置,可对超薄切片载网进行批量化染色,不但极大提高染色效率,而且减少了染色过程中染色液、样品的污染,达到染色液的重复利用,同时减少重金属对操作者的伤害和对环境的污染。     

一种高效的超薄切片染色法

本文介绍使用“连通式”玻管染色装置(如图)的超薄切片染色法及在染色中应注意的事项。经多次使用证明,用该法染出的超薄切片电子着色均匀,结构清晰,有良好的反差。该法能保证切片染色条件的一致,有效地防止切片染色污染,提高染色质量。用该法染色,染液用量省,染20张载网只需1ml染液,降低了铀、铅污染环境的可能性。染色和冲洗时间大大缩短,染30张载网前后共只需30分钟,大大提高了工作效率。该染色装置由三部分组成,制作如下:A.染色管取一根长130mm、内径6mm的玻管,用酒精喷灯加热玻管的一端至内径缩为1mm。在距另一端20mm处,用喷射火焰打一个