基因工程重组酵母植酸酶性质研究

对基因工程重组酵母所产的植酸酶进行分离和纯化 ,并考察纯化酶的酶学性质。该植酸酶酶蛋白分子量为 85 .2kD ;有 2个pH活力峰 :pH 2 .0和 pH 5 .0 ;最适温度为 5 0℃ ;在 3 7℃下以植酸钠为底物的反应初速度为 3 3 .5 μmol/(min·mL) ,米氏常数Km 为 0 .71mmol/L ;Ca2 +对此酶有较强的激活作用 ,Zn2 +、Fe2 +、Cu2 +、Al3+和Fe2 +对其有较强的抑制作用 ,而K+、Na+和Mg2 +对酶活性影响不大。     

黑曲霉植酸酶的纯化及性质研究

对黑曲霉液态发酵植酸酶的纯化及其性质进行了初步探讨.采用葡聚糖凝胶过滤及纤维素离子交换层析对粗酶液进行纯化,电泳显示为单一谱带,该酶的相对分子质量为63000.研究显示其性质为:37℃的条件下以植酸钠为底物的米氏常数为0 31mmol/L,该酶最适pH为5 5,最适作用温度为55℃.研究了金属离子对植酸酶活力的影响.     

黑曲霉植酸酶的纯化及性质研究

对黑曲霉液态发酵植酸酶的纯化及其性质进行了初步探讨．采用葡聚糖凝胶过滤及纤维素离子交换层析对粗酶液进行纯化，电泳显示为单一谱带，该酶的相对分子质量为63000，研究显示其性质为：37℃的条件下以植酸钠为底物的米氏常数为0．31mmol／L，该酶最适pH为5．5，最适作用温度为55℃，研究了金属离子对植酸酶活力的影响．     

白头翁皂苷H3糖苷酶的分离纯化及酶性质

对Absidiasp.P39r所产白头翁皂苷H3糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯的酶蛋白,并对其性质做了进一步研究。结果表明,该酶分子质量约为40ku;最适反应温度为40℃,最适反应pH为5.0;在pH 4.0~7.0,温度低于40℃条件下具有相对稳定的酶活力;金属离子Na+、K+、Mg2+对酶反应无显著影响,而Fe3+、Cu2+、Zn2+对其有较强的抑制作用;米氏常数为17.01mmol/L,最大反应速度为0.38mmol/(L·min)。     

储粮主要危害性霉菌过氧化氢酶特性研究

从不同来源的储粮样品中分离了4株灰绿曲霉、3株白曲霉,将培养后菌体破碎得到的粗酶液分别经硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析纯化得到过氧化氢酶.对分离酶的主要特性研究结果表明,这些过氧化氢酶的最适温度均为35℃左右,在水溶液中对热不稳定.酶催化适宜的pH范围为4～9,最适pH均在7 0左右,酶的Km值在33.3～41.7mmol/L范围,金属离子及化合物对酶活力的影响基本相同;1mmol/L浓度的Cu2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+对酶活力有激活作用,1mmol/L浓度的巯基乙醇、Fe3+、Ca2+对酶活力有抑制作用,1mmol/L的NaN3、Hg2+可使酶完全失活.该特性研究为酶学方法测定储粮霉菌的应用奠定了基础.     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

麦冬多糖糖苷酶的分离纯化及其酶性质

分离纯化了Absidia sp.O84s菌产的麦冬多糖糖苷酶,并对其酶性质进行了研究。结果表明,酶蛋白的分子质量为72 ku,最适pH为5.0,在pH 4.0~8.0范围内稳定。最适反应温度为40℃,在20~55℃范围内稳定。Ca+、K+、Na+、Fe3+、Mg2+Zn2+对该酶活性没有影响,Cu2+对酶活力具有抑制作用。酶反应动力学参数Vmax=0.131 5 mmol/(h.L),Km=2.375 mmol/L。     

克鲁斯假丝酵母植酸酶的筛选及其发酵条件

筛选出了一株高植酸酶活性的酵母菌株 ,鉴定为克鲁斯假丝酵母C .KruseiWZ 0 0 1。该植酸酶定位于细胞壁上 ,为PHYA型植酸酶。最适作用条件 :pH分别为 3.2和 4 .72 ,温度为 5 5℃ ,保持 6 0 %的酶活性 10min。C .KruseiWZ 0 0 1植酸酶有广泛的底物特异性 ,一定浓度的无机磷对其植酸酶活性有抑制作用。在优化的发酵培养基上 ,最高发酵液酶活性为 1.6 μmol/mL ,干细胞植酸酶活性为 2 80 μmol/ g。     

白头翁皂苷糖苷酶的纯化及其酶学性质

本实验对由Absidiasp.B00菌产的白头翁皂苷糖苷酶进行了分离纯化,得到了电泳纯酶蛋白,并对该酶的酶学性质进行了研究。结果表明,该酶的分子质量约为79 ku,酶反应的最适pH和温度分别为5.0和40℃,在40℃以下,pH 3.0~7.0条件下稳定性较好;金属离子Na+、K+、Mg2+、Ca2+对酶反应的影响不大,而Fe3+、Zn2+、Cu2+对其有很明显的抑制作用;酶反应动力学研究表明,vmax=0.16 mmol/(L.h),km=7.17 mmol/L。     

黑曲霉496-1菌株植酸酶的分离纯化及酶学性质

黑曲霉(A.niger)496-1菌株所产胞外植酸酶，经透析浓缩、DEAE-cellulose离子交换层析及Sephadex G-75，Sephacryl 100凝胶过滤，获得了2个植酸酶，其相对分子质量分别为64200及41100该2个植酸酶的最适pH分别为6．0和3．0，最适温度分别为55℃和40℃．初步确定一个是中性植酸酶，另一个为酸性植酸酶．     

两种菌产皂苷糖苷酶的性质比较

对微生物Absidiasp.D0d菌产的薯蓣皂苷糖苷酶(RhaD)和微生物Absidiasp.A3r菌产的黄芪皂苷糖苷酶(RhaA)进行了分离纯化,并对它们的酶性质做了比较。RhaD的分子质量是59 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~8.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定。金属离子Na+、K+对酶反应基本没有影响,Mg2+、Zn2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+对酶反应有抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.26 mmol/L,Vmax为1.23 mmol/(L.h)。RhaA的分子质量是54 ku,最适反应pH是5.0,pH稳定范围是3.0~6.0;最适反应温度是40℃,在60℃以下稳定,Mg2+和Ca2+对RhaA的酶反应没有影响,Fe3+、Cu2+的抑制作用较为明显。酶反应动力学参数Km为17.86 mmol/L,Vmax为1.18 mmol/(L.h)。RhaD只能水解与穿山龙薯蓣皂苷母环结构相似的异螺甾烷醇型的皂苷上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。RhaA仅水解四环三萜环阿屯烷型的黄芪皂苷16上的α-鼠李糖,不能水解pNP--αL-Rha。     

绞股蓝皂苷糖苷酶的分离纯化及酶性质的研究

为得到纯的绞股蓝皂苷糖苷酶,对Absidiasp.GYP4r菌所产的酶进行了分离提纯,并对其酶反应条件进行优化。该酶经75%饱和度的硫酸铵沉淀、DEAE-cellulose DE52阴离子交换柱分离、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳提纯,得到纯酶,分子质量约为68ku。酶学性质研究表明,酶反应的最适温度为40℃,在20～60℃稳定,最适pH为5.0,在pH 2.2～8.0稳定。Cu2+对该酶的活性有一定的抑制作用,Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Fe3+、Ca2+对酶的活性没有影响。该酶的米氏常数为14.20mmol/L,最大反应速率为0.46mmol/(L.h)。     

一株高产细胞表面植酸酶酵母的产酶性质

对一株高产细胞表面植酸酶酵母突变株WZ 4菌的细胞植酸酶性质进行了研究,结果表明:该酶的最适pH为5,最适温度为50℃,Km为0.666mmol/L。此外,WZ 4菌产植酸酶受控于培养基中的磷的质量浓度,最大产酶磷的质量浓度为50mg/L,当磷的质量浓度大于0.1g/L时产酶被完全阻遏。     

海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及其酶学性质

对海参肠道β-1,3-葡聚糖酶的提取条件及酶学性质进行了研究.结果表明,最佳提取条件为:pH6.0的磷酸盐浸提液0.05 mol/L,NaCl浓度为0.05 mol/L,缓冲液体积与海参肠质量之比为4∶1,硫酸铵饱和度为80%;该酶最适反应条件为:温度40℃,pH6.0;该酶在10~40℃,pH5.0~6.5酶活力稳定.Mn2+对酶具有一定的激活作用,Cu2+、Ca2+、Mg2+、Fe2+、Zn2+、Ba2+、K+、Ag+对酶存在不同程度的抑制,其中Cu2+对酶的抑制作用最强.     

G8r菌产人参皂苷糖苷酶的酶性质及酶水解作用

对由Absidia sp.G8r菌产的人参皂苷糖苷酶(Glc8)进行了分离纯化,并对其酶性质和酶水解作用进行了研究.结果表明,该酶的分子质量约为72 ku,酶反应的最适温度和pH分别为30 ℃和5.0,在20～60 ℃、pH 3.0～7.0条件下稳定性较好.该酶水解人参皂苷Rb1生成人参皂苷C-K,水解过程是分步进行的...     

高产植酸酶酵母Candida Krusei WZ-001的等离子束诱变选育

从土壤中筛选得到的 1株高产植酸酶酵母菌CandidaKruseiWZ 0 0 1 ,利用等离子诱变方法对这一菌株进行诱变 ,获得 1株植酸酶高产突变株 ,其酶活性比出发菌株提高了 98%。比较了N+、H+、Zn2 +3种离子注入菌体的诱变效果 ,实验结果表明N+离子注入效果最佳 ,注入最佳剂量为 5 0× 1 0 13N+/cm2 。     

海参肠碱性磷酸酶的提取及粗酶的特性研究

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)是最重要的磷酸酶之一,在生物体内直接参与磷酸基团的转移和代谢过程。本文研究了海参肠碱性磷酸酶粗酶的提取,并分析了其酶学特性。经含有0.2%Triton X-100的Tris-HCl缓冲液(pH 8.9)浸提、正丁醇处理、70%硫酸铵沉淀和超滤等步骤获得海参肠ALP粗酶,纯化倍数达到2.74倍,得率为63.32%。ALP粗酶的最适反应pH为11.0,在pH 10.0～12.0稳定性较好;最适反应温度为45℃,在20～45℃具有很高的稳定性。金属离子Mg2+(1～30mmol/L)、Zn2+(<10mmol/L)对海参肠ALP粗酶具有显著的激活作用;Fe3+、Fe2+、Cu2+和Mn2+(10mmol/L)可明显抑制该酶活力。EDTA-Na2、DTT、Na2WO4及Na2HPO4对海参肠ALP粗酶有明显的抑制作用,抑制程度依次为:EDTA-Na2>DTT>Na2WO4>Na2HPO4。