真菌毒素适配体筛选技术研究进展

真菌毒素遍布于粮食生产、储藏、运输和加工等各个环节,其污染已经成为全球亟待解决的问题。对真菌毒素进行监测并配合使用各种有效的降毒手段,有助于真菌毒素污染问题的解决。目前,真菌毒素检测、监控和靶向降解所用识别元件多为抗体,但抗体存在价格昂贵、批次间差异性大、热稳定性差等缺点,限制了其应用,而适配体合成简单、热稳定性强、免疫原性小、几乎无批次间差异等优点,有望取代抗体,但目前有关适配体商业化应用仍旧很少。本文概括总结了以真菌毒素为靶标的适配体筛选技术及其所筛适配体情况,并分析了适配体商业化应用仍旧很少的原因,以及各种筛选技术所面临的问题和挑战,以期为真菌毒素适配体的筛选提供参考,促进粮食中真菌毒素污染问题的解决。     

粮油产品真菌毒素抗体制备研究进展

本文简要综述了粮油真菌毒素抗体制备的发展情况,包括真菌毒素免疫原的制备、抗体的制备以及真菌毒素常用免疫学检测方法,同时介绍了我国真菌毒素抗体研究过程中面临的问题,并对未来真菌毒素抗体技术的发展前景进行了展望。     

人工模拟抗体在食品快速检测中的应用及目前存在的问题

人工模拟抗体通过对天然的抗体以仿生学的模仿而人工合成的对目标分子具有特异性的分子识别能力的元件.人工模拟抗体是通过功能单体和交联剂对模板分子进行分子印迹而制备得到.因而,人工模拟抗体也叫分子印迹聚合体.由于分子印迹聚合体的活性的稳定性和低廉的价格,因此,在食品的快速检测上得到了应用,如兽药残留、农药残留、微生物的快速检测.但是,由于它一种新型的分子识别材料,存在的一些问题,如对大分子物质的识别不稳定等,还有待于进一步的改善.     

免疫磁珠亲和纯化-超高效液相色谱串联质谱法 快速检测小麦中多种真菌毒素

目的建立免疫磁珠亲和纯化-超高效液相色谱串联质谱法用于小麦中真菌毒素多组分检测。方法用NaIO_4将抗体Fc段的糖残基氧化生成醛基,与磁珠上的氨基共价偶联,实现抗体在磁珠上的定向固定化。以该方法同时偶联多种抗体,获得定向固定多种真菌毒素抗体的免疫磁珠。进而对其亲和性能及使用条件进行详细表征和优化,建立免疫磁珠亲和纯化—超高效液相色谱串联质谱检测方法,用于小麦中真菌毒素多组分同时检测。结果本研究制备的免疫磁珠对8种真菌毒素有较好的保留效果,建立的免疫磁珠亲和纯化-超高效液相色谱串联质谱方法能够同时测定小麦中8种真菌毒素,对于各毒素的检出限在0.1~2μg/kg之间,方法回收率为78%~113%。结论该方法灵敏度高、特异性强、操作简单、有机试剂使用较少,适用于小麦样品的检测。     

原核表达抗克伦特罗重组单链抗体及其纯化研究

目的:原核表达抗克伦特罗重组单链抗体,对表达的包涵体蛋白进行提取和纯化,并鏊定重组抗体特性.方法:通过温度诱导大肠杆菌表达抗克伦特罗单链抗体,超声破碎菌体细胞,采用不同洗涤溶液提取包涵体.以不同变性剂溶解包涵体,Ni-NTA亲和柱纯化后,经脉冲稀释法将其复性.超滤及透析浓缩蛋白复性液,经Ni-NTA亲和柱二次纯化,得到纯化重组目的蛋白.通过SDS-PAGE电泳分析重组目的蛋白纯度,采用Western bloning和间接竞争EUSA对所制备的抗克伦特罗重组单链抗体特异性进行鉴定.结果:以大肠杆菌Es-cherichia coli BL21(DE3)为宿主菌诱导表达重组单链抗体,产率最高,占菌体蛋白的31%.以1 mol/L尿素洗涤包涵体,6 mol/L盐酸胍为变性剂,经Ni-NTA亲和柱纯化,所得复性重组单链抗体蛋白的纯度达96%.Western blotting分析显示,纯化并复性后的单链抗体可与鼠抗His标签蛋白单克隆抗体发生特异性的结合反应.间接竞争ELSIA结果表明,该重组抗体IC50值为3.35 ng/mL,与沙丁胺醇等结构类似物无交叉反应.结论:原核表达制备的抗克伦特罗重组单链抗体具有较好的抗原结合活性及特异性,为进一步开展克伦特罗的免疫快速检测研究奠定基础.     

免疫亲和柱在真菌毒素检测中的应用

利用真菌毒素的特异性质的抗体制作而成的免疫亲和柱,已经成为一种新型净化技术,也逐渐被广泛地应用于检测真菌毒素实验。免疫亲和柱具备的特异性质,除了可以将样品中的大部分干扰因素清除之外,还可以有效提升检测方法的灵敏性,大大缩短检测时间,减少溶剂的使用量。     

免疫分析技术在检测真菌毒素中的研究进展

真菌毒素是真菌在适宜条件下产生的次级代谢产物。真菌毒素不仅会危害人类和动物的健康，还对农业经济造成无法估量的损失。常见的真菌毒素检测方法以大型仪器检测为主，需要专业的实验人员进行检测，且耗时长。新兴的免疫分析技术具有操作简便、耗时短、成本低、干扰小、能同时处理大量样品等优点。本文综述了近年来几种常见的免疫分析技术中免疫原、抗体的开发，系统地对比了各类免疫分析技术的优缺点，为免疫分析技术在检测真菌毒素中的发展提供了新的思路。     

基于新型标记材料的免疫分析技术在真菌毒素检测中应用的研究进展

食品中真菌毒素污染成为近年来食品安全检测领域的热点和难点。免疫分析技术具有检测快速、操作简便、价格低廉且环境友好等优点,适合应用于食品安全检测领域。本文对基于新型标记材料的免疫分析技术,包括酶联免疫吸附法、免疫层析技术、电化学免疫传感技术、免疫芯片技术、基于免疫分析的流式微球技术和时间分辨荧光免疫分析技术,应用于粮食产品中真菌毒素快速检测的研究现状进行综述,系统分析了各种免疫分析技术的优缺点,为免疫分析技术在真菌毒素检测的应用及发展提供参考,同时也为保障粮食产品的安全提供了新思路。     

人工模拟抗体在食品快速检测中的应斥及目前存在的问题

人工模拟抗体通过对天然的抗体以仿生学的模仿而人工合成的对目标分子具有特异性的分子识别能力的元件。人工模拟抗体是通过功能单体和交联荆对模板分子进行分子印迹而制备得到。因而，人工模拟抗体也叫分子印迹聚合体。由于分子印迹聚合体的活性的稳定性和低廉的价格，因此，在食品的快速检测上得到了应用，如兽药残留、农药残留、微生物的快速检测。但是，由于它一种新型的分子识别材料，存在的一些问题，如对大分子物质的识别不稳定等，还有待于进一步的改善。     

黄曲霉毒素新型抗体制备研究进展

免疫学检测方法具有快捷、灵敏、特异性高的特点,在毒素的定量和定性方面已获得了快速的发展,成为毒素检测方法的研究热点。而高质量抗体的制备是建立特异性强、灵敏度高的免疫分析方法关键。目前主流研究和应用的抗体是单克隆抗体,其性质稳定,特异性强,灵敏度高。随着抗体技术的发展,重组抗体在免疫检测领域也逐渐应用。与多克隆抗体、单克隆抗体相比较而言,重组抗体具有独特的优势,可以在原核表达体系里短时间内大量生产且生产费用低廉,对黄曲霉毒素的低成本、大规模检测有重要的应用价值。本文重点阐述和分析了黄曲霉毒素单克隆抗体、重组抗体制备过程中存在的影响因素及问题,并对未来黄曲霉毒素抗体的发展前景进行了展望。