肉桂腈抑制酪氨酸酶活性的动力学研究

在30℃、pH6.8的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲体系中,采用酶动力学方法研究了肉桂腈对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的抑制动力学。实验结果表明,肉桂腈对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有良好抑制作用,对单酚酶和二酚酶活力的相对抑制率达到50%的肉桂腈浓度(IC50)分别为0.13mmol/L和0.62mmol/L。肉桂腈能延长单酚酶的迟滞时间,0.2mmol/L肉桂腈能使迟滞时间由2min延长至2.7min。Lineweaver-Burk图显示肉桂腈对二酚酶的抑制作用表现为非竞争性可逆抑制,表观米氏常数(Km)为0.90mmol/L,抑制常数(KI)为0.64mmol/L。     

对香豆酸、阿魏酸和低聚糖阿魏酸酯对酪氨酸酶的抑制效果

通过测定酶的稳态活力、迟滞时间和动力学参数,研究对香豆酸、阿魏酸及低聚糖阿魏酸酯对酪氨酸酶的抑制效果。结果表明,3种物质对酪氨酸酶单酚酶活性均有抑制作用,其中对香豆酸的抑制作用最强,其次为低聚糖阿魏酸酯和阿魏酸。对香豆酸、低聚糖阿魏酸酯和阿魏酸对单酚酶的IC_(50)值分别为0.75,3.20,9.30 mmol/L。对香豆酸和阿魏酸抑制二酚酶活性,IC_(50)值分别为4.3,12.7mmol/L;但低聚糖阿魏酸酯对二酚酶活力没有影响。对香豆酸能明显延长单酚酶反应的迟滞时间,阿魏酸影响很小,而低聚糖阿魏酸酯则缩短迟滞时间。动力学研究结果显示,阿魏酸和低聚糖阿魏酸酯对单酚酶的抑制作用表现为混合性抑制,而对香豆酸为竞争性抑制。     

3-羟基-4-甲氧基肉桂酸抑制酪氨酸酶催化反应的动力学研究

在30℃,p H=6.8的Na2HPO4-Na H2PO4缓冲体系中,采用酶动力学方法研究了3-羟基-4-甲氧基肉桂酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的影响和抑制动力学。实验结果表明,3-羟基-4-甲氧基肉桂酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有良好的抑制作用。对单酚酶和二酚酶活力的相对抑制率达到50%的3-羟基-4-甲氧基肉桂酸浓度(IC50)约分别为0.13 mmol/L和0.39 mmol/L,比熊果苷抑制二酚酶活性的IC50值5.3 mmol/L小得多。3-羟基-4-甲氧基肉桂酸能明显延长单酚酶的迟滞时间,0.2 mmol/L3-羟基-4-甲氧基肉桂酸能使迟滞时间由1.1 min延长至4.3 min。对二酚酶的抑制作用表现为可逆效应,说明其是通过抑制酶活力而导致催化效率的降低,而不是通过减少有效的酶量导致酶活力的下降。Lineweaver-Burk图显示3-羟基-4-甲氧基肉桂酸对二酚酶的抑制作用表现为竞争性抑制,最大反应速率(vm)为64.5μmol/min,抑制常数(KI)为0.11 mmol/L。     

咖啡酸激活酪氨酸酶催化反应的动力学研究

在30℃,pH6.8的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲体系中,采用酶动力学方法研究了咖啡酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活力的激活效应.实验结果表明,咖啡酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有激活作用,对单酚酶和二酚酶活力的相对激活率达到50%的咖啡酸浓度(IC50)分别为0.27mmol/L和1.35mmol/L.咖啡酸能消除单酚酶催化反应的迟滞时间,对二酚酶的激活作用表现为混合性激活,当咖啡酸浓度为0、0.50、1.0、1.50mmol/L时,米氏常数Km分别为0.31、0.25、0.20、0.15mmol/L.     

菊苣酸抗氧化性及对抑制酪氨酸酶催化反应的动力学研究

以DPPH、·OH的清除效果和铁还原力为指标,采用酶动力学方法研究菊苣酸的抗氧化活性和对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的影响及抑制作用。结果表明:菊苣酸对DPPH、·OH自由基的清除率和铁还原力与菊苣酸浓度呈线性量效关系,IC_(50)值分别为13.63,14.26和13.78 mg/L。菊苣酸对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶均具有较好的抑制作用,对单酚酶和二酚酶活性抑制的IC_(50)值分别为0.26 mmol/L和0.71 mmol/L,显著小于熊果苷对二酚酶活性抑制的IC_(50)值(5.3 mmol/L)。菊苣酸能明显延长单酚酶的迟滞时间。在浓度为0.40 mmol/L时,菊苣酸可使迟滞时间由134 s延长至383 s,延长2.87倍。Lineweaver-Burk菊苣酸对二酚酶的抑制表现为可逆竞争型抑制,最大反应速率(vm)为83.30μmol/L,抑制常数(KI)为0.14 mmol/L。     

白藜芦醇对酪氨酸酶体外抑制活性的动力学研究

在30℃,pH 6.8的Na2HPO4-NaH2PO4的缓冲体系中,采用酶促动力学方法,研究了白藜芦醇对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶的抑制作用。结果表明,白藜芦醇对酪氨酸酶、单酚酶和二酚酶均有抑制作用,对单酚酶抑制活性的IC50值(抑制率达到50%时的白藜芦醇质量浓度)约为5.1mg/mL,对二酚酶抑制活性的IC50值约为5.6 mg/mL。此外,白藜芦醇可延长单酚酶的迟滞效应,8 mg/mL的白藜芦醇能使迟滞时间从22 s延长至62 s,而对二酚酶则无此迟滞作用。Lineweav-er-Burk图分析表明,白藜芦醇对酪氨酸酶的抑制作用为混合型抑制,对游离酶的抑制常数(KI)和对酶-底物络合物的抑制常数(KIS)分别为3.4 mg/mL和35.98 mg/mL。     

异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理

异鼠李素是沙棘果实和美白类中草药白蒺藜、白鲜皮的主要黄酮类活性成分,具有广泛的药理活性。酪氨酸酶是人体细胞产生黑色素和果蔬褐变的关键酶。本文研究了异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的抑制机理。以L-多巴为底物,测定异鼠李素对酪氨酸酶二酚酶活性的IC50、抑制类型和抑制常数。抑制类型由Lineweaver-Burk双倒数作图法来判断,并计算相应的抑制常数(KI和KIS)。实验结果显示,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力抑制效果显著,IC50为25μmol/L,是混合型可逆抑制,抑制常数KI为20.1μmol/L,KIS为108.6 mol/L。总之,异鼠李素对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力有很好的抑制作用,是值得进一步研究的美白类候选药物和防止果蔬褐变的食品添加剂。     

庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶抑制效应

目的:通过研究庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力的影响,探讨其抑制机制和动力学,为其开发和利用奠定基础.方法:运用酶动力学研究方法,探讨效应物对蘑菇酪氨酸酶的抑制效应、抑制机理和抑制类型,并测定抑制常数.结果:庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶具有可逆抑制作用,庚酸-3,4-二羟基苯酯的抑制效应显著大于3,4-二羟基苯甲酸己酯,前者IC50为305 μmol/L,而后者测不到IC50.庚酸-3,4-二羟基苯酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶具有竞争抑制作用,其抑制常数KI为171.4μmol/L,而3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活力具有反竞争抑制作用,抑制常数KIS为389μmol/L.结论:庚酸-3,4-二羟基苯酯和3,4-二羟基苯甲酸己酯对蘑菇酪氨酸酶二酚酶的作用效应截然不同,显示了酶抑制剂的构象关系.     

紫娟茶提取物对酪氨酸酶活性的抑制作用

首先对从蘑菇中提取的酪氨酸酶的反应条件进行了探讨。采用单因素和正交实验确定了酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性的最适反应条件。结果显示单酚酶最适反应条件为:底物L-酪氨酸为10.0mmol/L,酪氨酸酶为0.30g/mL,反应时间为15min,反应温度为30℃;二酚酶最适反应条件为:底物邻苯二酚为7.5mmol/L,酪氨酸酶为0.035g/mL,反应时间为15min,反应温度为15℃。然后对紫娟茶的3种提取物的酪氨酸酶活性的抑制作用进行了探讨。结果表明,3种提取物对酪氨酸酶单酚酶和二酚酶活性均有较好的抑制作用,特别是含有花青素和茶多酚混合物的提取物I的抑制作用最强;3种提取物对单酚酶和二酚酶的半抑制浓度IC50分别为6.85×10-4、8.21×10-4、16.29×10-4g/mL和6.37×10-4、7.62×10-4、13.53×10-4g/mL。     

2种食品添加剂对酪氨酸酶的抑制作用

通过酶动力学研究探索2种食品添加剂(没食子酸丙酯和L-抗坏血酸棕榈酸酯)对酪氨酸酶的抑制作用,并借助分子对接技术探究二者与酪氨酸酶间的结合方式。结果表明:没食子酸丙酯对酪氨酸酶是可逆混合型抑制,其IC50=(18.036±0.823)mmol/L;L-抗坏血酸棕榈酸酯为可逆反竞争性抑制,其IC50=(2.806±0.082)mmol/L。分子对接结果表明,2种食品添加剂与酪氨酸酶间主要以氢键、范德华力相互作用。本试验拓展了酪氨酸酶抑制剂的研究方向,并为食品添加剂在酶抑制剂领域的应用提供参考。