干酪乳杆菌对数生长期与稳定期蛋白质组比较分析

研究建立干酪乳杆菌Lactobacillus casei XM2-1的蛋白质组双向电泳表达图谱,比较其在对数生长中期与稳定期初期的图谱差异。结果表明：有16个蛋白质点表达发生明显变化,经过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱鉴定,其中有7个蛋白质点鉴定为应激蛋白质,分别为GroEL、DnaK、Hsp 20-1、Hsp 20-2和UspA蛋白质。可见,应激蛋白质可能在L.casei XM2-1稳定期对外界环境的抵御能力增强起到重要作用。     

双向电泳技术在副干酪乳杆菌盐胁迫应激反应研究中的应用

对耐盐副干酪乳杆菌在盐胁迫下的应激反应进行研究,比较其在含有6g/dL NaCl和未含有NaCl的培养基中生长至对数生长中期的蛋白质组双向电泳图谱差异。结果表明:有20个蛋白质点表达发生明显变化,经过基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱鉴定,其中热休克蛋白质GroEL和DnaK在盐胁迫下表达上调,参与脂肪酸合成的3-氧酰基-(酰载体蛋白)合酶FabG表达下调,可能与该菌应对盐胁迫密切相关。     

酿酒酵母蛋白质双向电泳条件优化及图谱建立

利用双向电泳技术分离酿酒酵母全蛋白质,并比较了不同样品制备方法、不同凝胶参数,以及不同染色方法对电泳结果的影响。经过各个环节的条件优化,最终获得了无明显横纵条纹,背景清晰,分辨率较高,重复性较好的酿酒酵母全蛋白质双向电泳图谱。经PD-Quest软件分析,所得图谱约分离到1 000个蛋白质点,该双向电泳图谱的构建为后续氮代谢研究奠定了基础。     

干酪乳杆菌6033蛋白酶降解肌肉蛋白质的作用研究

本试验将干酪乳杆菌(Lactobacillus casei，Lc)6033蛋白酶液按5％的比例分别加入肌浆蛋白和肌原纤维蛋白提取液，然后设定不同的pH值，于15℃培养7d，定时取样，测定反应后的pH值、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白质的变化。结果发现：不同设定的肌浆蛋白和肌原纤维蛋白试验组在反应初期pH值均稍稍降低，随着反应进程，各试验组的pH值呈现出逐步升高的趋势；其中，肌浆蛋白以pH5．0、4．5组的变化较为明显，肌原纤维蛋白则以pH6．0、5．0、4．5组的变化较为明显。经7d振荡培养后，电泳检测发现，各试验组肌浆蛋白均表现出分解现象，尤其以pH5．0组和pH4．5组更为明显；而肌原纤维蛋白也都表现出了明显的分解现象，尤以pH5．0组肌原纤维蛋白分解最明显。     

一种植物乳杆菌对干酪模型成熟中微生物及蛋白质水解的影响

采用无菌条件下生产的新鲜干酪凝块制作干酪模型,以WSN,12%TCASN和氨基酸含量等为指标测定植物乳杆菌SP-3对其的促熟作用。微生物测定表明SP-3在干酪模型的成熟过程中(12d)能保持较高的浓度;WSN结果表明SP-3对干酪中蛋白质的初级水解无显著影响;12%TCASN的结果表明SP-3影响了干酪中小肽的形成;5%PTA-SN和总游离氨基酸浓度测定结果表明植物乳杆菌SP-3促进了体系中游离氨基酸的产生;游离氨基酸的分析显示谷氨酸、亮氨酸、组氨酸的含量明显高于对照组,而丝氨酸、赖氨酸、脯氨酸的含量低于对照组。以上结果表明,植物乳杆菌SP-3能加快干酪体系中蛋白质的水解进程,具有促进干酪成熟的作用。     

添加干酪乳杆菌的益生菌酸乳生产工艺条件的优化

以添加干酪乳杆菌的益生菌酸乳代替传统的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌发酵的酸乳,采用单因素和正交实验设计,对影响酸乳生产工艺的菌种配比、接种量、发酵温度及发酵时间等主要因素进行了优化组合实验,以发酵过程中及后熟24h后的pH、酸度变化,并结合后熟酸乳的质构测定、感官评分和活菌数为综合指标,通过极差分析和方差分析,确定最佳生产工艺条件.本实验最终确定的最佳生产工艺条件为:乳酸菌(嗜热链球菌:保加利亚乳杆菌=1∶1)∶干酪乳杆菌=2∶1,接种量3％,发酵温度40℃,发酵时间为9h,在此生产条件下得到酸乳的感官评分为93.65分,硬度、稠度、凝聚性和粘度分别为138.975g、3448.022g·s、99.018g和299.117g·s,后熟24h后的酸度和活菌数也分别达到122°T和3.13×1011cfu/mL.该实验方法所得到的最佳生产工艺参数真实可靠,具有实际意义.     

干酪乳杆菌粉末发酵剂的研制

研究了干酪乳杆菌粉末发酵剂的制备及活化的条件.将高浓度培养后的干酪乳杆菌离心浓缩,以10%脱脂乳加2.7%甘油作保护剂制成悬浮液后冷冻干燥,采用4%脱脂乳粉作为活化液,活化时间150min,在此条件下粉末发酵剂活化完全,活力恢复较好.     

干酪乳杆菌产酸培养基的优化

为了提高干酪乳杆菌发酵产酸量,本研究以MRS培养基为基础培养基,通过单因素实验和4因素3水平正交试验确立了干酪乳杆菌HJB-006的最佳氮源、碳源、生长盐类等成分配比及培养基初始pH值.结果表明,葡萄糖2.2％、酪蛋白胨1.35％、MgSO4· 7H2O 0.2％,MnSO4·7H2O0.7％,牛肉膏1.0％,酵母膏0.5％,柠檬酸三铵0.2％,乙酸钠0.8％,吐温-80 1 mL/L,培养基初始pH值为6.0,用此培养基在37℃恒温下发酵24 h,其乳酸产量较优化前提高45.45％.     

阪崎克罗诺杆菌全菌蛋白质双向电泳技术和图谱的建立

建立阪崎克罗诺杆菌全菌蛋白双向电泳技术。采用2种不同的尿素-3-[3-(胆酰氨丙基)二甲氨基]-1-丙磺酸(CHAPS)-二硫苏糖醇(DTT)裂解法兼反复冻融提取阪崎克罗诺杆菌ATCC 29544全菌蛋白,在2种pH范围的固相pH梯度等电聚焦对全菌蛋白进行双向电泳,胶体考染后获得的双向电泳图谱进行Image Master 2DPlatinum软件分析。结果表明,获得全菌的蛋白浓度为5.32μg/μL;裂解液成分:尿素7 mol/L,硫脲2 mol/L,CHAPS 4%(m/V),DTT 1%(m/V),PMSF 45mg/L,pH 3～10IPG缓冲液2%(V/V)。该技术成功构建了阪崎克罗诺杆菌全菌蛋白质双向电泳图谱。     

干酪乳杆菌LZ183E高密度培养条件优化

为提高干酪乳杆菌LZ183E在发酵培养液中的菌体密度,首先通过在不同温度下培养菌株,测定48 h内菌液的OD600 nm值并作出生长曲线,得到菌株最适培养温度为37 ℃、接种时间为16 h及收获时间30 h。随后通过单因素试验和正交试验优化,探究不同碳源、氮源、生长因子、初始pH值以及接种量对菌株LZ183E活菌数和OD600 nm值的影响。结果表明,菌株LZ183E的最佳培养条件为葡萄糖25 g/L、酵母膏20 g/L、南瓜汁24 g/L、初始pH 6.5以及接种量2%。此优化条件下,干酪乳杆菌LZ183E的活菌数对数值达到了9.20±0.04,满足高密度培养要求,并且比原始MRS培养基活菌数对数值（8.12±0.06）高出一个数量级,为干酪乳杆菌LZ183E的冻干保护提供了足够的活菌数。     

干酪乳杆菌纯种发酵大豆乳培养基的优化调配

从益生菌乳制品中自行分离选育出的生长繁殖力强、发酵活力高的干酪乳杆菌(05-20)为试验菌株,研究了牛乳和蔗糖在大豆乳中的添加量对干酪乳杆菌在大豆乳中发酵的凝乳时间、凝乳时活菌数、pH值、滴定酸度及产品感官风味的影响,通过方差分析确定了发酵培养基中牛乳和蔗糖的最适添加量分别为20%和7%,完成了以大豆乳作为干酪乳杆菌最佳载体的初步探索,为进一步研制开发益生菌发酵大豆乳制品奠定了基础.     

干酪乳杆菌发酵番茄酸汤的工艺优化

本试验探究应用干酪乳杆菌H1作为发酵剂接种西红柿优化制作酸汤发酵工艺。研究发酵温度、发酵时间、接种量和加盐量四个因素对番茄酸汤的品质的影响并对其发酵条件进行优化。在单因素实验的基础上,进行四因素三水平的响应面实验设计,基于模糊数学法得到的感官评定和总酸两个响应值,对人工接种干酪乳杆菌的番茄酸汤的发酵工艺进行优化,以确定其最佳发酵工艺。结果表明:在发酵温度25℃、发酵时间5 d,接种量2%,加盐量1.45%时,得到的番茄酸汤总酸达到1.23%,感官评分8.48±0.58,与理论值差异均不显著(p0.05),说明响应面的实验值和回归方程预测值基本吻合,响应面法建立的模型所确定的番茄酸汤的发酵条件稳定可靠,能为番茄酸汤工业化生产提供理论依据。     

响应面法对干酪乳杆菌冻干保护剂的优化

采用响应面方法,以存活率为指标优化了干酪乳杆菌冻干保护剂的配方。Plackett-Burman实验表明,脱脂乳、乳糖和谷氨酸钠对存活率具有显著的影响,通过中心复合实验进一步优化保护剂的比例,当脱脂乳、乳糖和谷氨酸钠的质量浓度分别为15.8 g/100 mL,5.73 g/100 mL和0.42 g/100 mL时细胞存活率为92.4%,明显高于不添加保护剂时细胞的存活率(5.25%)。     

Proteomic analysis of responses of a new probiotic bacterium Lactobacillus casei Zhang to low acid stress

Tolerance to acid is an important feature for probiotic bacteria during transition through the gastrointestinal tract. Proteomics analysis of a new probiotic bacterium, Lactobacillus casei Zhang, was performed upon 30-min exposure to low acid stress (pH 2.5 vs. pH 6.4) using two-dimensional electrophoresis. Out of 33 protein spots that showed changes of expression between the two pHs, 22 showed 1.5-fold higher expression at pH 2.5 than at pH 6.4, whereas five spots had expression decreased by 1.5-fold at pH 2.5. There were also six protein spots that were exclusively present on different pH maps. Further analysis showed that eight of the enhanced proteins, NagA, NagB, PGM, GlmM, LacC, TDP, GALM and PtsI, were involved in carbohydrate catabolism. Moreover, quantitative RT-PCR showed that the mRNA expression levels of dnaK, nagB, galm, estC, tuf and luxS were consistent with changes in protein expression. We postulate that there might be some relationship between differentially expressed proteins and acid tolerance in L. casei Zhang.     

干酪乳杆菌(HN-2)固态发酵培养基的优化

该研究选择一株具有水质净化能力的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei HN-2),以麸皮及米糠为主要基质对其开展了固态发酵研究。通过部分因子析因试验设计及响应面分析,获得了最佳的固体培养基组合,包括:麸皮6.87g、米糠9.84g、葡萄糖0.26g、大豆蛋白胨0.10g、MgSO4.7H2O 0.05g、CaCO30.25g、K2HPO4.3H2O 0.10g。当初始湿度为65%、初始pH值为6.0时,在37℃经过48h的固态发酵,干酪乳杆菌HN-2的菌体密度最大可达2.47×1010cfu/g。     

干酪乳杆菌浓缩发酵剂乳清增菌培养基的优化

利用乳清为基本培养基原料培养干酪乳杆菌(Lactobacillus caseiSTL3102),用于生产浓缩发酵剂.采用Plackett-Burman设计对影响L.casei STL3102菌体生长的培养基成分进行了评价,从7个相关的培养基营养因子中筛选,确定了乳清、牛肉膏和酵母粉为关键影响因子.采用响应曲面法对影响菌体增殖的关键因子最佳水平进行了优化.通过建立的二次模型方程得到最优培养基组成为,乳清59.43g/L、牛肉膏8.44g/L、酵母粉8.85g/L,初始pH值为7.0.通过验证试验证实了模型的预测值与实际值之间吻合较好.不同缓冲盐对菌体增殖影响的实验结果表明,磷酸氢二钾对菌体的增殖较好,确立了培养基缓冲盐成分为磷酸氢二钾3.48g/L.采用优化后的乳清培养基,3%接种量,35℃培养16h,活菌数达3.31×109cfu/mL.