氨基酸分析法对蛋白含量国家标准品定量的初步分析

目的探讨氨基酸分析的方法对蛋白含量国家标准品定量的可行性。方法采用常规酸水解的方法,通过Hitachi L8800型氨基酸分析仪对白蛋白标准品进行分析。先确定最佳水解时间,再按照最佳水解时间对样品进行水解,通过氨基酸分析,采用氨基酸加合法测定其含量。并验证方法的精密性和准确性。结果经7次测定,求得现行蛋白含量国家标准品[(2005)国生标字0009]的蛋白含量值为(95.02±3.99)mg/100 mg,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为4.20%。多次试验中,标准品中各氨基酸的回收率在93.56%~105.12%之间。推算标准品中白蛋白含量值为20.52 mg,是凯氏定氮测定值的103.48%。结论氨基酸分析法测定蛋白含量自动化程度高,重复性好,可用于重组蛋白含量的分析。     

特定蛋白检测仪检测血浆IgG含量方法的验证及其应用

目的对特定蛋白检测仪BN-P检测血浆IgG含量的散射比浊法(nephelometry)进行验证,并用于层析法制备IgG的工艺过程监控。方法使用BN-P和IgG相关试剂对检测IgG含量的散射比浊法进行线性和范围、准确度、精密度、专属性、耐用性验证,并进行样品添加试验,将用该方法检测5批IgG成品的结果与凯氏定氮法比较,同时检测层析法制备的3批IgG工艺过程样品中IgG含量。结果用该方法检测蛋白SL标准品中IgG的线性范围为0.107~0.003 34 g/L;高、中、低浓度的SL/H(高水平)蛋白质控品的批内准确度为87.60%~91.05%,批间准确度为88.5%~90.5%;批内精密度CV值为1.85%~3.65%,批间精密度CV值为2.46%~3.16%;检测方法不受血浆白蛋白的干扰,专属性良好;样品经反复冻融5次以内检测,耐受性良好,5次以上耐受性较差;样品添加试验的回收率在90.2%~93.1%之间。该方法检测5批IgG成品中IgG含量,与凯氏定氮法相比差异无统计学意义(P0.05);该方法检测3批IgG工艺过程中间品重复性较好,步骤回收率一致,工艺稳定。结论特定蛋白检测仪BN-P检测血浆IgG含量的散射比浊法准确可靠,可用于IgG制备工艺的过程监控。     

自动定氮仪测定NR中氮含量

试验研究自动定氮仪测定NR中氨古量。并与凯氏定氨法（国标方法）测定结果进行比较。结果表明，两种方法的测定结果基本相同，两者无显著性差异。自动定氨仪测定NR中氨含量可缩短试验时间近2／3，减少了人为因素的影响，具有自动化程度高、简便、快速的优点。     

凯氏定氮仪测定氮含量的方法讨论

海能K9860全自动凯氏定氮仪测定样品总氮含量时,其结果的稳定性受到很多因素的影响。基于此原因,我们设计了一系列检测阳离子瓜尔胶的氮含量实验,结果表明:样品质量在0.5~0.7 g之间,催化剂硫酸钾、硫酸铜使用量分别为5 g、0.2 g,消化后加15 m L蒸馏水,该结果稳定性好、误差小。     

用自动系统凯氏定氮仪测定生物制品中蛋白质含量

应用自动系统凯氏定氮仪测定人血白蛋白和人血丙种球蛋白的蛋白含量 ,重复性测定X % (n =10 )±SD分别为 2 0 45 %± 0 18%和 10 2 5 %± 0 12 % ;用硫酸铵、氨基乙酸和标准蛋白质控液作回收率试验R % (n =10 )±SD分别为 10 0 .2 4%± 0 5 7% ,99.89%± 0 43%和 10 0 5 0 %± 0 75 % ;用该法测定蛋白质含量与手工定氮法比较有良好相关性 ,总氮 (TN)相关系数r(n =2 6 )为 0 9999;非蛋白氮 (NPN)r(n =19)为 0 9946 ;蛋白氮 (PN)r(n =19)为 0 .9999。测定同批标准人血白蛋白 ,结果X % (n =2 0 )±SD为 5 5 3%± 0 14% ,与其参考标准值 5 5 4%± 0 12 %非常接近。因此 ,用该仪器法测定生物制品中的蛋白质含量准确可靠 ,且快速。     

酵母源金属硫蛋白体外抗氧化能力测定

目的测定酵母源金属硫蛋白(metallothionein,MT)-1、MT-2体外抗氧化能力。方法以动物源金属硫蛋白(Zn-MT)为对照,测定酵母源MT对1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基(DPPH)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐自由基(ABTS~+·)、羟基自由基(OH·)、超氧阴离子自由基(·O_2~-)的清除能力、总还原能力及抑制脂质体过氧化能力大小。结果 3种MT均对自由基有良好的清除能力,在20~100μg/ml范围内,酵母源MT-1、MT-2及Zn-MT随质量浓度的增加,对4种自由基的清除能力均不断增强,且增加趋势几乎一致;3种MT随质量浓度增加,对自由基清除能力的增率趋于平缓。3种MT对ABTS~+·、OH·、·O_2~-的清除能力差异有统计学意义(P0.01),清除能力大小为Zn-MTMT-1MT-2;对DPPH自由基清除能力大小为Zn-MTMT-1MT-2,MT-2与Zn-MT及MT-1之间差异有统计学意义(P0.01)。3种MT总还原能力随质量浓度的增加均不断增强,其中酵母源MT-1与酵母源MT-2及Zn-MT之间的IC_(50)值差异有统计学意义(P0.01),总还原能力大小为Zn-MTMT-1MT-2。3种MT均可有效抑制脂质体过氧化的产生,并随质量浓度的增加对脂质体过氧化的抑制率平缓上升,除酵母源MT-1外,在60~100μg/ml浓度范围内,MT对脂质体过氧化抑制能力的增率小于20~60μg/ml范围,且Zn-MT抑制脂质过氧化的效果优于酵母源MT,其IC_(50)大小为Zn-MTMT-1MT-2,其中酵母源MT-1与酵母源MT-2及Zn-MT之间差异有统计学意义(P0.01)。结论两种酵母源MT对体外自由基均有良好的清除效果及抑制脂质体过氧化的效果,显示出良好的体外抗氧化特性,且其体外抗氧化能力酵母源MT-1MT-2。     

酵母成分中蛋白质含量的测定

对酵母抽提物中蛋白质的快速、简易测定方法的进行了研究。经实验分析,双缩脲法测定蛋白质最小检测含量至1.5 g/L,平行相对偏差较小,此法操作简便,适合实验室快速测定。     

粉剂氯化胆碱中三甲胺含量的测定

探索了分光光度法和凯氏定氮蒸馏法检测粉剂氯化胆碱中三甲胺的含量,并分别进行精密度和回收率的测定,从而证明两种检测方法的可行性及各自的特点。     

凝胶层析法测定蛋白含量的方法

利用蛋白纯化仪建立一种凝胶层析测定蛋白含量的方法,采用HiTrapTMDesalting 5×5 mL色谱柱,流动相为超纯水,以蛋白浓度为横坐标,以蛋白出峰面积为纵坐标,建立标准曲线。与BCA试剂盒法比较,BCA试剂盒法相对误差范围为9.13%～144.00%,此法的相对误差范围为0.78%～44.72%,可见凝胶层析法测定结果准确性高,操作简单,快速,是一种可行的测蛋白含量的方法。     

酵母中表达基因工程重组蛋白药物的研究进展

本文主要从酵母载体系统的选择、酵母表达宿主的选择、多拷贝菌株的构建、高密度发酵培养酵母细胞、应用酵母系统表达外源基因的研究现状、酵母表达系统的缺陷及对策等几个方面综述了近年来酵母表达体系在基因工程重组蛋白药物开发方面的研究进展。     

凯氏定氮法测定蛋白质的氮含量

蛋白质是人体肌肉、血液、内脏、神经、骨骼、韧带、毛发、指甲和皮肤等组织的主要成分,人体许多与生命活动有关的活性物质,如酶、抗体、激素等,都是由蛋白质或蛋白质的衍生物构成。凯氏定氮法用于测定有机物的含氮量,若蛋白质的含氮量已知时,则可用此法测定样品中蛋白质的含量。     

螺旋霉素中蛋白含量的测定方法(Bradford法)及验证

建立螺旋霉素中蛋白含量的测定方法。用0.9%NaCl溶液为溶剂,采用Bradford法,于波长595nm处比色,螺旋霉素中蛋白含量的最小检测限:5μg/mL。     

工业干酪素含量的测定方法研究

用双缩脲法测定奶渣法生产的干酪素含量,与常用的凯氏定氮法结果比较,两种方法所得实验结果无显著性差异。     

应用自动定氮仪测定橡胶中氮含量

凯氏定氮法是测定橡胶中氮含量的常规分析方法。若采用自动定氮仪测定橡胶中氮含量,与凯氏法相比,同样具有准确度和精密度高的优点,而且自动化程度高,样品无须转移,能简便、快速、准确地测定大批量橡胶中的氮含量。     

浅谈三聚氰胺及其假蛋白原理与鉴别

通过查阅有关资料了解了三聚氰胺的有关性质，简单的探究奶粉事件中所涉及的化学原理，并根据其性质探究出在家中即可鉴别三聚氟胺的方法。通过研究，更加深入的认识了三聚氰胺，也了解了生产奶制品的内幕。     

方差随机效应模型分析凯氏定氮法蛋白质含量测定的中间精密度

目的 利用方差随机效应模型分析本实验室凯氏定氮法蛋白质含量检测过程中变异来源及各种来源变异在总变异中所占比例。方法 将凯氏定氮法蛋白质含量检测过程中,检测人员、检测仪器、检测时间3个主要影响因素纳入方差随机效应模型进行方差成分分析,并计算中间精密度(intermediate precision,IP)和组内相关系数(intra-class correlation coefficient,ICC)。结果 本实验室凯氏定氮法蛋白质含量检测过程中,49.20%的变异来源于检测人员因素,其次为检测仪器和检测时间;本实验室凯氏定氮法蛋白质含量检测IP和ICC分别为2.58%和0.59。结论 在本实验室中,检测人员是凯氏定氮法蛋白质含量检测主要的变异来源;本实验室凯氏定氮法蛋白质含量检测的变异度较小,检测结果准确度较高;应用方差随机效应模型能有效分析检测过程中的随机影响因素。     

检测人凝血因子Ⅷ蛋白质含量的BCA法的优化及验证

目的优化检测人凝血因子Ⅷ(FⅧ)蛋白质含量的BCA法,并进行验证。方法对BCA法检测人FⅧ的蛋白质含量进行优化:模拟试管法进行化学反应,微量板法进行读数和计算;对优化后的BCA法的耐用性、标准曲线的线性和范围、准确性、重复性、中间精密性进行验证,并与传统的钨酸沉淀法、免疫散射比浊法和优化的凯氏定氮法的检测结果进行比较。结果 BCA法检测人血白蛋白(human serum albumin,HSA)蛋白质含量的可信区间为100～800μg/ml。甘氨酸和赖氨酸的浓度小于125 mmol/L时,对BCA法检测结果无干扰;以HSA作为标准品绘制的标准曲线的可信区间为62.5～1 000μg/ml,人FⅧ工艺样品在以HAS和BSA作为标准品绘制的两种标准曲线下的检测值差异无统计学意义(P>0.05);BCA法的准确性、重复性、中间精密性均符合验证要求;BCA法检测结果与优化后的凯氏定氮法相关性良好。结论优化了检测人FⅧ蛋白质含量的BCA方法,该法用于人FⅧ生产工艺中间品的质量控制是可行的。     

多目标地球化学调查样品中测定全氮含量的不确定度分析

以凯式法对多目标地球化学调查样品中的全氮进行测定,应用GUM评定方法进行不确定度分析。根据测定的方法原理建立数学模型,对其测量结果产生不确定度的来源进行评估,对影响测定结果的各不确定度进行分析评定,确定测量结果的不确定度。     

饲料级磷酸氢钙中氟含量的快速测定

介绍了一种采用氟离子电极标准加入法测定饲料级磷酸氢钙中氟含量的简便、快速的方法。方法准确可靠,可推广使用。     

过磷酸钙中硫酸根含量的分析测定

确认了用硫酸钡重量法测定过磷酸钙中硫酸根含量的分析方法，该方法与艾士卡法比较，绝对误差在0．21％～0．51％之间，相对标准偏差在0．20％～0．47％之间，回收率在98．8％～101．5％之间，操作简单，结果准确度高，重现性好，适应工业产品分析要求。