环介导等温扩增技术检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的研究

采用环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)快速检测小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)。以小肠结肠炎耶尔森氏菌(AY004311.1)Ail基因序列作为靶序列,设计内、外引物,通过肉眼观察沉淀判断检测结果。结果表明:LAMP检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的灵敏度为6.3cfu/mL,人工污染鸡肉的检出限为340cfu/g。PCR检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的灵敏度为630cfu/mL,人工污染鸡肉的检出限为3.4×104cfu/g。采用试剂盒法提取DNA,从样品处理到报告结果,LAMP方法耗时2h,PCR方法耗时3h。因此,LAMP检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的灵敏度高,耗时短,特异性好,操作简便,无需特殊的仪器设备,适合在我国广大基层实验室开展应用,为快速检测食源性致病菌构建了一个新的技术平台。     

食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌分离鉴定方法研究进展

小肠结肠炎耶尔森氏菌是一种具有嗜冷特性的食源性致病菌,广泛存在于食品中,对人们健康构成较大威胁。建立高效的分离鉴定技术对该菌进行监控是相关食品安全的重要保障。本文对小肠结肠炎耶尔森氏菌的分离过程,包括分离前增菌、分离前碱处理和平板分离,以及传统生化和血清型鉴定、分子生物学鉴定、免疫学鉴定和谱学鉴定方法等方面的研究进展进行了阐述。小肠结肠炎耶尔森氏菌的深入检测研究不仅有赖于现有分离鉴定方法的不断优化,还需要开发更多新型检测技术应用于菌株溯源分析、流行病学和耐药性等方面的研究,以期为该类菌株资源数据库的建立和整理,预防相关耶尔森氏菌疾病的爆发提供良好的保障。     

RF-LAMP技术检测鸡肉中小肠结肠炎耶尔森氏菌

本研究建立实时荧光环介导等温扩增技术检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的方法,扩增产物经电泳和酶切鉴定,表明扩增结果正确。本研究验证该方法特异性,对灵敏度和人工污染鸡肉的检出限进行测定。结果表明小肠结肠炎耶尔森氏菌株呈阳性结果,非小肠结肠炎耶尔森氏菌株均呈阴性结果。该方法检测纯菌的灵敏度为61 CFU/m L,人工污染鸡肉的检出限为46 CFU/g。该方法特异性强、灵敏度高、可实时检测小肠结肠炎耶尔森氏菌,能够实现对小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速检测。     

小肠结肠炎耶尔森菌前增菌方式的选择

小肠结肠炎耶尔森菌作为一种食源性致病菌逐渐引起了关注。本实验利用胰蛋白胨培养基、改良磷酸盐缓冲液和氯苯酚-替卡西林-氯酸钾培养基对小肠结肠炎耶尔森菌前增菌,并采用实时荧光PCR方法对增菌效果进行检验。结果表明：在纯菌体系中胰蛋白胨培养基对小肠结肠炎耶尔森菌的增菌作用优于其他两种培养基,并且增菌24h后即可检测到该菌。在混菌体系中小肠结肠炎耶尔森菌经过改良磷酸盐缓冲液增菌后灵敏性最高,并且增菌时间可缩短至8h。因此在实际检测中可采用改良磷酸盐缓冲液对该菌进行增菌检测。     

小肠结肠炎耶尔森氏菌PCR反应体系的快速优化

影响PCR反应结果的因素较为复杂．为了快速、准确地得到PCR反应的最适条件，避免假阴性或假阳性结果的发生，在研究小肠结肠炎耶尔森氏菌PCR反应体系优化中，采用了正交试验法．通过设计两组正交试验，准确地找出了检测小肠结肠炎耶尔森氏菌的最佳扩增条件，结果表明该方法高效快速，是PCR反应体系优化中值得推广使用的方法。     

食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的检测方法

小肠结肠炎耶尔森氏菌广泛分布于自然界,是一种人畜共患的病原菌。耶氏菌对人的致病性早在1964年为Carlsson和Mollaret等氏所证实,本病临床表现多样,所致疾病涉及     

食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌污染调查和ERIC-PCR分型研究

通过调查全国17个城市中,七大类食品的小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yesinia enterocolitica)污染情况,了解其分布规律与遗传多样性,从而为我国食品中Y.enterocolitica污染的溯源和控制供相应的数据支持。本研究采用了稍作修改的《食品微生物学检验-小肠结肠炎耶尔森氏菌检验(GB/T 4789.8-2008)》和GB/T4789.8-2003两种方法对食品中Y.enterocolitica进行检测,同时运用ERIC-PCR技术对分离菌株进行分型研究。研究显示在946份食品样品中检出共50份Y.enterocolitica阳性样品,总污染率为5.29%。在检出的阳性样品中包括肉与肉制品24份、速冻食品25份和食用菌1份,污染率分别为12.06%、16.89%和0.74%,速冻食品和肉与肉制品是目前我国Y.enterocolitica污染的主要食品类型。采用GB/T4789.8-2008检出阳性样品25份,检出率为2.64%;采用GB/T4789.8-2003检出34份,检出率为3.59%明显高于GB/T4789.8-2008法。ERIC-PCR指纹图谱进行聚类分析,结果显示72个分离株可分为四簇,主要污染基因型在C簇,初步建立了Y.enterocolitica的ERIC-PCR指纹图谱数据库。     

致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌分离鉴定及三重PCR检测方法的建立

为鉴定导致患病鲫鱼肛门红肿、腹部有出血点症状的病原菌,并建立一种快速检测该病原菌的方法.本研究从患病鲫鱼中分离了病原菌,采用形态学、理化特性分析及16SrDNA序列分析方法鉴定菌株.采用PCR扩增法检测该菌毒力基因,琼脂纸片扩散法检测该菌株的耐药性,致病性能验证试验检测其致病性.针对该菌ail基因、inv基因和intB...     

致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌实时荧光RPA检测方法的建立

本研究建立了致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-timeRecombinasePolymerase Amplification,real-time RPA)检测方法。根据致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌黏附侵袭位点ail致病基因序列设计特异性引物和exo探针,在37℃恒温下20 min内即可完成检测,方法特异性高,对目的DNA的检测限为0.1 ng/μL。在稳定性实验中,对10 ng/μL、0.1ng/μL、0.01 ng/μL、0.001 ng/μL的目的DNA各进行8个平行的测试,0.1 ng/μL及以上浓度的DNA均可稳定检出;当DNA为0.1 ng/μL时,8个平行的阈值时间和最大荧光值的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)最低且≤7.06%。致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌在奶粉和牛肉的人工污染样品中初始污染量为3 CFU/25 g时,培养20 h后,可用本方法检出。对20份各种类实际样品进行检测,本方法与国标方法结果一致。本方法对致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的常温现场快速定性检测具有重要意义。     

Enteropathogenic Yersinia in the Pork Production Chain: Challenges for Control

Enteropathogenic Yersinia comprising pathogenic Yersinia enterocolitica and Yersinia pseudotuberculosis, are zoonotic pathogens causing foodborne intestinal illness in humans. Y. enterocolitica is common in pork production and pork is associated with infections in humans. Therefore, there is a need to reduce the occurrence and spread of these pathogens within the pork production chain. It would be most effective to control enteropathogenic Yersinia at the farm level. However, at present, feasible intervention methods are lacking and more research is needed. The most effective way to prevent the spread of Y. enterocolitica is to buy piglets from Y. enterocolitica‐negative farms. At slaughterhouses, the occurrence of enteropathogenic Yersinia can be reduced but not completely removed by slaughter hygiene and changing slaughter methods. After slaughter, it is difficult to control enteropathogenic Yersinia, since they can survive and even multiply during cold storage and under modified atmosphere. In addition, current knowledge and actions in both domestic and professional kitchens are insufficient for the prevention of yersiniosis. The significance of Y. pseudotuberculosis carried by pigs is uncertain. Although data are still lacking for pathogenic Y. enterocolitica in many aspects, there is even a greater lack of information regarding Y. pseudotuberculosis in pork production. There is a definite need for further research on these pathogens.     

不同厂家小肠结肠炎耶尔森氏菌微量生化鉴定试剂盒的比对

评价本实验室研制的小肠结肠炎耶尔森氏菌微量生化鉴定试剂盒（简称EasyID）的使用性能。用36株菌（包括小肠结肠炎耶尔森氏菌2株标准株,19株分离株;弗氏耶尔森氏菌5株分离株;中间型耶尔森氏菌5株分离株;克氏耶尔森氏菌5株分离株）,测试EasyID,传统液态生化管（简称HKM）以及国内其他品牌（简称KIT）的三种鉴定试剂盒。结果表明：36株测试菌株的鉴定结果,EasyID、KIT两种干制鉴定试剂盒与HKM传统液态鉴定试剂盒鉴定结果相比总体符合率分别为99.69%、98.15%,EasyID相比KIT,与HKM的符合率更高;EasyID、HKM、KIT三种鉴定试剂盒与标准要求相比总体符合率分别为99.37%、99.07%、97.83%,EasyID符合率最高,HKM其次,KIT略低。结论：EasyID小肠结肠炎耶尔森氏菌微量生化鉴定试剂盒的可靠性优于KIT,与HKM相当。在使用方便性上,采用一步加样的技术的EasyID优于HKM和KIT。     

肉制品鉴别的分子生物学方法研究进展

世界各国每年的肉类掺假事件频发。多种基于核酸、蛋白质和脂质的技术被开发出来并实际应用于检测肉类真伪。近二十年来,随着分子生物学检测技术的迅猛发展,肉制品鉴别有了真正敏感稳定而高效的检测手段,目前分子生物学检测方法主要包括常规PCR技术、多重PCR技术、限制性片段长度多态性PCR技术、DNA杂交与基因芯片技术、实时荧光PCR技术、数字PCR技术和DNA条形码技术,其中实时荧光PCR技术为现在监管部门对肉制品鉴别的常用技术手段。本文主要介绍这七种技术的研究与进展,对未来的研究方向进行了探讨和展望,为监管部门和科学研究者提供参考。     

Survival of Yersinia enterocolitica During Fermentation and Storage of Yogurt

The fate of Yersinia enterocolitica was investigated during the manufacture and storage of yogurt produced using commercial starter cultures YC470 (rapid acid-producer), YC180 (slow acid-producer), both containing Streptococcus thermophilus and Lactobacillus bulgaricus , and a "home-use" culture that contained these bacteria as well as Lactobacillus acidophilus. Preparations were fermented at 44°C and stored at 4°C. During the first few hours of fermentation, Y. enterocolitica populations increased in all preparations. Y. enterocolitica populations were reduced to undetectable levels after 72 and 96h in YC470 and YC180 yogurt, respectively, but survived up to 144h in "home-use" yogurt. The home-use starter produced lactic acid in greater amounts and more rapidly (p<0.05) than YC470 or YC180 starters, but enabled longer survival. Y. enterocolitica survival was least (p<0.05) in yogurt produced using the YC470 starter culture.     

鲜肉中小肠结肠炎耶尔森菌的半定量风险评估

目的:分析南京市售鲜肉中小肠结肠炎耶尔森菌的风险程度。方法:将国内外文献报道及市场调查数据的统计分析相结合,运用经典的半定量风险评估软件"Risk Ranger"进行风险分级。结果:南京市售猪肉和牛肉中小肠结肠炎耶尔森菌的风险评分分别为31和24,每人每天因食用污染该菌的鲜肉造成食物中毒的概率分别为3.62×10-9,3.12×10-10,前者为后者风险的11.6倍。通过进一步研究发现,加工后采取有效的控制体系,均使两者的风险均降低到10%。结论:南京市售牛肉中小肠结肠炎耶尔森菌的风险程度较低,而市售猪肉中已接近中等程度,需做好预防措施,加强监管。