凯氏定氮法测定牛乳中酪蛋白含量

酪蛋白是牛乳中的特征性成分,其含量可作为牛乳掺假检验的定量指标。实验结果表明等电点法结合凯氏定氮法能够有效地检测牛乳中酪蛋白含量,测定结果准确,重复性好。实验验证了纯牛乳中酪蛋白含量为2.5%。     

等电点沉淀结合凯氏定氮法测定市售纯牛奶中酪蛋白的含量

在酪蛋白测定方法的前期研究基础上,对等电点沉淀法进行改进,结合凯氏定氮法对市售纯牛奶中的乳蛋白组分进行了测定。确定了制备纯品酪蛋白的最佳洗涤剂和洗涤次数,NaOH溶液碱复溶酪蛋白等电点沉淀物最佳添加范围。实验结果表明,改进后的等电点沉淀方法,测定酪蛋白质量分数都在74%~76%。pH4.6HAc-NaAc缓冲溶液作为洗涤剂,对于体系pH的维持更加稳定。仅沉淀的处理方式可以将大部分乳清蛋白和酪蛋白进行分离。NaOH溶液最佳添加范围是25mL~35mL。改进后的等电点沉淀结合凯氏定氮法高效准确,简单易行,重现性好,可以用于纯牛奶中酪蛋白的掺假鉴定。     

酪蛋白沉淀检测方法及其在牛乳经济掺假鉴定中的应用

试验表明酪蛋白等电点沉淀检验方法的最适检测条件为:10%乙酸溶液,磁力搅拌,pH4.4～4.8,3000 r/min离心15 min,102℃直接干燥法。通过检测,生牛乳、银桥纯牛奶、市售便宜奶粉、乳清粉、食用明胶、三聚氰胺、大豆分离蛋白粉的酪蛋白质量分数(g/g蛋白质)分别为79.8%、78.7%、0、0、0、0和90.3%。结果表明,本检测方法能够很好的检测正常牛乳的酪蛋白含量,并能对市售便宜奶粉、乳清粉、食用明胶和三聚氰胺进行经济掺假鉴定,结合对产品豆腥味的感官评价和对假酪蛋白色泽偏暗的颜色测定的方法,可以对大豆分离蛋白粉进行掺假鉴定,验证了纯牛乳制品掺假检验的定量指标:酪蛋白质量分数(g/g蛋白质)≥73%。     

国内外乳品真蛋白检测方法的进展

介绍了乳品真蛋白的定义,比较了国内外牛乳蛋白质检测的标准方法,简述了乳品真蛋白的快速检测方法,提出了我国国家标准需要改进的方向,即在样品处理前先用150g/L的三氯乙酸溶液使乳中的蛋白质沉淀,用滤纸分离,再用凯氏定氮法分别测定沉淀和滤液中的蛋白态氮含量和非蛋白态氮含量,计算蛋白质含量。如果改用pH4.6来沉淀酪蛋白,同样的方法还可以用于测定乳品中酪蛋白。     

牛乳中蛋白质的快速测定

采用对牛乳中蛋白质的快速测定与凯氏定氮法测定牛乳中蛋白质的含量,结果相对标准偏差<±0.5%,与凯氏定氮法的结果无差别,且此法操作省时省力,费用低,为一种简便、快速、准确、实用的牛乳蛋白质快速检测方法。     

电位滴定法测定牛乳中蛋白质含量

为排除三聚氰胺等非蛋白氮的干扰,探索研究了牛乳中蛋白质含量快速准确的测定方法——电位滴定法。用甲醛固定蛋白质中的氨基从而释放出游离的羧基。并用氢氧化钠标准溶液滴定,通过测定牛乳中蛋白质的游离氨基酸的含量,可以计算蛋白质中的氮含量,从而求得牛乳中蛋白质含量。经t检验t〈t0.95,5,电位滴定法和凯氏定氮法之间未发现有显著性差异,且测定时间只需10min左右。本方法操作简便、测定结果准确,并有效地排除了三聚氰胺等非蛋白氮的干扰．适用于牛乳中蛋白质的快速定量检验。     

不同沉淀方法对牛乳中蛋白质质量分数测定的影响

通过单因素试验和正交试验优化硫酸铜、饱和食盐水、乙醇、乙酸铅、三氯乙酸沉淀牛乳中蛋白氮的最佳沉淀条件,并对分别添加了尿素、硝酸铵、亚硝酸钠、三聚氰胺、三种水解蛋白的牛乳样品进行前处理,采用凯氏定氮法测定各样品蛋白质质量分数,研究不同沉淀剂对含非蛋白氮牛乳中蛋白质质量分数测定的影响。结果表明,三氯乙酸为沉淀牛乳中蛋白质的最佳沉淀剂,沉淀效果优劣顺序为三氯乙酸乙醇饱和食盐水硫酸铜乙酸铅,本研究旨在为进一步提高凯氏定氮法测定牛乳中蛋白质质量分数的准确性提供理论依据。     

牛羊乳酪蛋白制备及电泳分析比较

采采用新鲜和复原的牛羊乳为原料,等电点沉淀,通过洗涤、干燥等步骤分别制得牛乳和羊乳酪蛋白,用凯氏定氮法对其进行定量检测,应用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析比较牛羊乳酪蛋白组分差异。结果表明：牛乳酪蛋白得率为86．75％,羊乳酪蛋白得率为90．55％,高含量的酪蛋白主要集中在电泳图谱的中分子量组,可分为ds,CN、as2-CN、β-CN和K—CN,牛羊乳as2-CN分子量羊乳大于牛乳,牛乳a-CN含量比较多,羊乳β—CN含量比较多,鲜乳与复原乳全蛋白主要组分在电泳图谱中除酪蛋白差别外,上端的高分子量组清蛋白区羊乳IgG重链的分子量比牛乳小。应用蛋白质电泳分析技术可以区分羊乳和牛乳的蛋白质组分,等电点沉淀法制备酪蛋白的方法简单,易于操作。     

新疆驼乳中所含蛋白质和氨基酸的质量分数测定

通过用凯氏定氮法和高效液相色谱法测定了新疆驼乳中蛋白质和氨基酸含量。结果表明,新疆驼乳中蛋白质质量分数为4．45％,其中乳清蛋白占1．25％,大约是牛乳乳清蛋白质量分数的两倍;并含有18种氨基酸,其中8种必需氨基酸质量分数占总氨基酸质量分数的40．70％,药效氨基酸占总氨基酸质量分数的63．95％。     

饮料中提取酪蛋白的方法选择

目的探索4种沉淀蛋白质的方法在提取饮料酪蛋白过程中对其复溶率的影响,为建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法鉴别饮料中酪蛋白亚型及相应含量的测定寻找最佳前处理方法。方法选取乳粉、以乳粉或牛乳为原料的饮料、添加酪蛋白或酪蛋白酸钠的饮料作为测试样品,用pH 8.5的Tris-HCl溶液溶解,采用等电点沉淀法、乙腈沉淀法、丙酮沉淀法和乙醇沉淀法提取样品中的蛋白质,低温离心后对沉淀的蛋白质进行复溶,用考马斯亮蓝法分别测定沉淀前和复溶后样品溶液中可溶性蛋白质的含量,计算类酪蛋白的复溶率。结果乳粉和3类饮料中的酪蛋白经等电点沉淀法提取后,乳粉的类酪蛋白复溶率在64.95%~66.20%之间,3种饮料中的类酪蛋白复溶率在69.73%~84.95%之间,等电点沉淀法优于其他3种沉淀方法。αs-酪蛋白标准物质和β-酪蛋白标准物质的复溶率分别为70.16%和87.17%,且经高分辨质谱确证其复溶后的主成分为酪蛋白。另外对45种含酪蛋白饮料中的类酪蛋白含量进行了测定,其含量在0.10~42.36 mg/g(mg/mL)之间。结论等电点沉淀法提取类酪蛋白的复溶率较其他3种沉淀方法相对稳定,为饮料中酪蛋白的亚型鉴别及相应含量测定提供了回收率较高的前处理方法,为今后测定酪蛋白含量的液相质谱法的研究奠定了较好基础。     

烟草中蛋白质测定方法的改进

为了快速准确地测定烟草中蛋白质的含量,对烟草中蛋白质的经典测定方法进行了改进,即①采用醋酸超声抽提法去除可溶性氮;②改进了凯氏定氮法的消化方式,用过氧化氢 浓硫酸混合液(体积比=2∶1)作消化液,加热消化,消化时间只有10min,而凯氏定氮法的消化时间超过2.5h;③消化好的试样以水杨酸比色法测定。该法的回收率为101.1%,RSD<2%,操作简便,可用于烟草中蛋白质的快速测定。     

黑龙江市售乳制品蛋白质质量评价

为评价黑龙江省市售乳制品中蛋白质的质量,采用凯氏定氮法和三氯乙酸沉淀法测定黑龙江市售不同厂家生产的全脂加糖乳粉、纯酸牛乳、配制型乳饮料和灭菌纯牛乳中的蛋白质和非蛋白氮含量,计算各乳制品的蛋白氮指数和非蛋白氮指数。结果表明, 利用蛋白氮指数和非蛋白氮指数评价乳制品中蛋白质质量是可行的,并建立了4种乳制品的蛋白氮指数和非蛋白氮指数模型。黑龙江市售合格的全脂加糖乳粉、纯酸牛乳、配制型乳饮料和灭菌纯牛乳的蛋白氮指数范围分别为0.990～0.995、0.870～0.956、0.402～0.633和0.929～0.943,其非蛋白氮指数范围分别为0.005～0.010、0.084～0.130、0.367～0.598和0.069～0.071。总体来说,黑龙江市售乳制品蛋白质含量大多数符合国家标准规定,但部分乳制品的蛋白质质量有待提高。     

采用蛋白质定量方法检测掺假牛乳比较研究

研究非蛋白质掺假牛乳样品中的乳蛋白质检测方法。样品用15%三氯乙酸溶液处理牛乳样品,沉淀分离乳蛋白质,通过凯氏定氮法和四种分光光度法对液态乳中添加尿素和三聚氰胺常见掺假物进行检测比较研究。结果表明,凯氏定氮法、双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测牛乳中掺入不同比例尿素溶液蛋白质含量,结果不受尿素溶液的影响,准确度高。对于牛乳中掺入三聚氰胺溶液,三氯乙酸结合凯氏定氮法检测相对误差较大,而三氯乙酸结合双缩脲比色法、Folin-酚试剂法、BCA法检测结果不受三聚氰胺溶液影响,准确度高。考马斯亮蓝法测定牛乳中掺入尿素溶液和三聚氰胺溶液相对误差均很大。     

基于有机元素分析的粉状食品中蛋白质含量的测定

目的 建立基于有机元素分析的粉状食品中蛋白质含量的测定方法。方法 采用VarioEL III型元素分析仪对16种粉状食品中蛋白质含量进行测定, 并与传统经典蛋白质测定方法——凯氏定氮法进行比较。结果 元素分析法可准确测定样品中蛋白质含量, 方法重复性和准确度均很好, 与凯氏定氮法相比, 测定结果相近, 并且具有相当的测量精度, 且有操作简单、无需复杂样品前处理、无溶剂和污染、样品需求量少、分析速度快、自动化程度高等优点。结论 元素分析法可作为凯氏定氮法的替代和补充方法, 用于粉状食品中蛋白质含量的测定。     

山西吕梁地区牛、羊乳及其制品的蛋白质组成分析研究

利用考马斯亮蓝G-250法定量测定了吕梁地区的牛羊乳中的蛋白质含量;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)分析了牛羊乳中的蛋白质种类。结果表明:羊乳中的蛋白质含量显著高于牛乳,新鲜牛乳的碱性磷酸酶(ALP)活力和过氧化物酶(PLO)活力均显著高于新鲜羊乳。牛羊乳中蛋白质的种类差别比较的最佳试验方案:分离胶、浓缩胶浓度分别为12.5%和5%,电压分别为150 V和120 V。从电泳图谱可知:牛乳中的α-酪蛋白含量比羊乳高,而分子量却小于羊乳;牛乳中的β-酪蛋白分子量小于羊乳。因此,α-酪蛋白和β-酪蛋白可作为电泳法区别牛羊乳的特征性蛋白条带。     

酪蛋白质量分数作为乳品掺假检验指标的探讨

论述了我国乳品掺假的原因、方式和危害,以及掺假鉴定的必要性和重要性,分析了酪蛋白是牛乳中的特征性成分,根据乳品中酪蛋白占乳蛋白的质量比例（即酪蛋白质量分数）一般会稳定在77%～78%左右,提出了酪蛋白质量分数≥73%,可以作为乳品掺假检验的定量指标,探讨了国内外酪蛋白定量检测方法的研究现状。结果表明,等电点沉淀法无疑是一种适合我国国情的、操作简单的酪蛋白检验方法,对防治乳品掺假具有重要的现实意义,并通过分析提出了该检验方法所需研究的内容。     

牛奶及乳制品中蛋白质含量测定——蛋白质黄色反应比色法

<正>测定个乳和乳制品(全脂奶粉、甜炼奶等)中蛋白质,常规方法沿用凯氏定氮法,该法的缺点是操作繁琐,易受外界环境干扰.本文介绍的蛋白质黄色反应比色法测定牛乳和乳制品中蛋白质含量,操作快速简     

牛奶蛋白质的测定方法优化

国标方法测定牛奶蛋白质检测时间长,利用改进后的凯氏定氮法测定牛奶蛋白质的含量.样品加入硫酸钾、硫酸铜、浓硫酸进行消化,消化后用碱蒸馏,硼酸滴定,通过减少样品的称样量和药品量进行方法优化,优化后消化时间变短,约2 h,且消化后不需要定客即可直接蒸馏滴定.改进后的方法检测结果与国标凯氏定氮法结果无差异,操作简单.省时省力,可快速检测牛奶中蛋白质的质量分数.     

酶联免疫法快速测定原料乳中κ-酪蛋白含量

用牛κ-酪蛋白纯品免疫新西兰白兔,制得兔抗牛κ-酪蛋白的多克隆抗体。以牛κ-酪蛋白包被抗原,自制抗体为一抗,辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为二抗,邻苯二胺(OPD)为底物,建立了牛乳中κ-酪蛋白的间接ELISA检测方法。检测的线性范围是25～1400ng/mL,相关系数是0．9831,回收率在95．83％～125．83％之间,证明可以用酶联免疫法简单快速地测定牛乳中的κ-酪蛋白,因为该蛋白在酪蛋白中含量稳定,所以可以计算出牛乳中酪蛋白的含量。显然该方法可以用于牛乳掺杂使假的鉴别和原料奶酪蛋白含量是否合格的快速检测。     

荞麦中蛋白质含量的分析

用改进的凯氏定氮方法对荞麦中的蛋白质含量进行测定,测得辽宁朝阳、锦州、黑山、铁岭、西丰地区荞麦中蛋白质含量分别为12.48%、9.19%、9.48%、10.16%和11.44%,并用传统凯氏定氮方法进行了验证,结果表明该方法简便、快速、准确可行。