甲胺磷人工抗原的合成与鉴定

采用重氮法直接用甲胺磷连接牛血清白蛋白合成了人工抗原。通过鉴定,该人工抗原的紫外吸收光谱呈现出与半抗原、载体蛋白的紫外吸收光谱均不同的吸收峰;红外光谱图中也同时呈现了半抗原与载体蛋白的特征吸收带;并测得人工抗原中甲胺磷与载体蛋白的结合比为15∶1,表明该人工抗原合成成功。      

甲胺磷衍生物的合成及人工抗原的制备

O,S-二甲基硫代磷酰氯与β-丙氨酸反应,得到一种甲胺磷的结构衍生物,经薄层层析和1HNMR鉴定,推测预期产物生成。分别采用活泼酯法和混合酸酐法将产物与BSA、OVA偶联制备了人工抗原MZB和MGO,通过紫外光谱鉴定证明偶联成功。用TNBS比色法测定了MZB、MGO与载体蛋白的克分子结合比,分别为16:1和9:1。以MZB为免疫原免疫Balb/c小鼠,以MGO为包被抗原对小鼠血清进行间接竞争ELISA分析表明,小鼠经免疫后产生了针对甲胺磷的特异性抗体,抗血清效价为51:200,从而进一步证明抗原合成成功。本方法简便易行,为研究建立甲胺磷的免疫分析方法奠定了基础。     

磺胺喹恶啉人工抗原合成及鉴定

国内首次用重氮化法将磺胺喹恶啉（SQ）分别与牛血清白蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联,制备免疫抗原SQ-BSA和包被抗原SQ-OVA。紫外扫描法与SDS-PAGE凝胶电泳法鉴定表明偶联成功,偶联比分别为10.1∶1、9.8∶1。将SQ-BSA免疫BALB/C小鼠,获得了高效价、敏感性好的抗SQ血清,表明ELISA方法鉴定偶联成功,为进一步制备抗SQ单抗奠定了基础。      

丁香酚半抗原及人工抗原的合成与鉴定

目的 合成丁香酚半抗原及人工抗原并对其结构进行鉴定。方法 采用氯乙酸对丁香酚进行结构改造, 以获得含羧基的丁香酚半抗原。将经重结晶纯化后的半抗原与牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)经碳化二亚胺(carbide dimethylamine, EDC)偶联制备人工抗原。采用电喷雾串联三重四极杆质谱法对丁香酚半抗原的结构进行鉴定。采用紫外光谱及基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-flight time mass spectrometry, MALDI-TOF MS)对偶联物的结构进行鉴定。结果 紫外光谱结果表明, 与载体蛋白相比, 偶联物的特征吸收峰强度有一定的增强; MALDI-TOF MS结果表明, 表明丁香酚半抗原与BSA的偶联比为12.5:1。结论 本研究成功建立了丁香酚半抗原及人工抗原的制备方法, 为丁香酚抗体的制备提供了前期研究基础。     

氯吡脲人工抗原的合成与鉴定

为合成新的、有效的氯吡脲（forchlorfenuron,CPPU）人工抗原,在无水三氯化铝的催化作用下,采用傅克反应对CPPU小分子进行结构改造。采用碳二亚胺（carbodiimide,EDC）法将半抗原分别与牛血清白蛋白（bovine serum albumin,BSA）和卵清蛋白（ovalbumin,OVA）进行偶联,获得CPPU的免疫抗原（CPPU-BSA)和包被抗原（CPPU-OVA）。采用质谱、元素分析和核磁共振氢谱对CPPU半抗原（CPPU-COOH）的分子结构式进行鉴定;采用紫外光谱和高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱对偶联物的结构和相对分子质量进行鉴定。结果显示成功合成出CPPU人工抗原,为其抗体的制备和免疫学方法的构建提供了参考。     

百菌清人工抗原的制备与鉴定

以杀菌剂百菌清为起始反应物,通过两步化学反应合成百菌清的衍生物(半抗原);采用活化酯法与混合酸酐法分别将半抗原与载体蛋白(牛血清蛋白、卵清蛋白)进行偶联,制备百菌清的人工抗原,同时通过免疫新西兰大白兔获得抗血清,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定其效价。利用红外光谱(IR)、质谱(MS)、核磁共振波谱(NMR)对百菌清半抗原进行表征,并用紫外扫描的方法对人工抗原进行鉴定。结果表明,成功制备出百菌清半抗原及人工抗原,并且半抗原与载体蛋白的偶联比分别为27.86:1 和12.32:1,抗血清效价约为1:1.28 × 104。     

拟除虫菊酯类农药通用人工抗原的合成与鉴定

根据拟除虫菊酯公共结构设计合成一种拟除虫菊酯通用半抗原,所有中间体及半抗原经电喷雾电离质谱(ESI-MS)、红外光谱(IR)和核磁共振(1H NMR)鉴定确定结构.通过活化酯法将通用半抗原与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联制备出免疫原,紫外吸收法鉴定表明免疫原偶联成功,研究为建立拟除虫菊酯多残留免疫分析方法奠定了基础.     

环丙沙星人工抗原的合成及鉴定

通过化学方法制备了环丙沙星的免疫抗原和包被抗原;分别采用碳二亚胺(EDC)法和氯甲酸乙丁酯法把环丙沙星与BSA进行了偶联制备了人工免疫抗原CIP-BSA,EDC法制备了包被抗原CIP-OVA,经PAGE、紫外分光光度法测定了人工合成抗原的偶联比,EDC法和氟甲酸乙丁酯法制得的CIP-BSA两分子结合比率分别为4:1和11:1,CIP-OVA中两分子结合比率为12:1.这为环丙沙星单克隆抗体的制备奠定了基础.     

杀草丹半抗原及其人工抗原的制备与鉴定

以乙基羟乙胺、升华硫、一氧化碳气体和对氯氯苄为原材料,合成羟基化杀草丹;经纯化后与琥珀酸酐反应,合成杀草丹半抗原,采用薄层层析色谱法、质谱法和红外光谱法分析鉴定为预期产物;利用碳二亚胺法将半抗原与牛血清蛋白BSA偶联制备杀草丹人工抗原,应用紫外光谱和荧光光谱法分析鉴定。结果表明,羟基化杀草丹经薄层层析展开效果良好,杀草丹半抗原经红外光谱分析具有明显的羧酸基团,有利于后续偶联操作;在26 ℃室温条件下制备的杀草丹人工抗原,其半抗原与载体蛋白偶联比为6.59:1。杀草丹半抗原与杀草丹人工抗原的成功制备,可为进一步研制杀草丹抗体奠定基础。     

杀菌剂抑霉唑人工抗原的合成和鉴定

以咪唑乙醇为原料,与6- 溴己酸乙酯发生取代反应后再经水解反应合成抑霉唑半抗原(6-[1-(2,4- 二氯苯基)-2-(1- 咪唑基)乙氧基]己酸)。产物经薄层层析和1H-NMR 鉴定后,采用活化酯法分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联得到免疫原(HIA-BSA)和包被原(HIA-OVA),紫外光谱分析法计算得其偶联比分别为13:1 和7:1,初步说明人工抗原合成成功。通过免疫动物获得效价为1:64000 的抗体,采用间接竞争ELISA 法测定抗体的IC50 值为1.76μg/mL,从而进一步证明人工抗原合成成功,所得的抗体可用于ELISA 检测试剂盒的研制。     

雪卡毒素人工抗原合成及鉴定

雪卡毒素是一种存在于珊瑚鱼中的海洋毒素,极低剂量就会引起中毒。为了建立雪卡毒素的免疫分析方法,必须合成其人工抗原才能制备抗体。以雪卡毒素的结构类似物莫能菌素为半抗原,采用琥珀酸酐法将其改造成莫能菌素-琥珀酰半酯（MON-HS）,再用混合酸酐法将其与大分子载体牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联,成功制备出了雪卡毒素人工抗原MON-HS-BSA和MON-HS-OVA。以MON-HS-BSA为免疫抗原免疫Balb/c小鼠,以MON-HS-OVA为包被抗原,用间接竞争酶联免疫吸附法（Ci-ELISA）检测到小鼠血清中产生了雪卡毒素的抗体,说明已成功合成雪卡毒素人工抗原,该抗原可用于制备雪卡毒素单克隆抗体。      

菜克多巴胺人工抗原的光谱表征及免疫鉴定研究

盐酸菜克多巴胺(Ractopamine hydrochloride,RCT)是一种β-肾上腺素受体激动剂,即使极低剂量残留对人类健康也有危害.为了建立简单、快速并适应现场检测的免疫分析方法,必须先合成它的人工抗原并进行鉴定.通过对莱克多巴胺进行结构修饰,用碳二亚胺将结构修饰了的莱克多巴胺与牛血清蛋白相偶联,经透析得到纯的莱克多巴胺人工抗原并冷冻干燥备用.结果表明,紫外光谱图中合成的人工抗原的特征吸收峰介于蛋白质和莱克多巴胺的特征吸收峰之间;人工抗原红外光谱图中呈现莱克多巴胺和牛血清蛋白的红外特征吸收峰;通过竞争ELISA实验表明用合成的人工抗原免疫的Balb/c小鼠血清中产生了莱克多巴胺的抗体,三种方法综合鉴定结果表明,莱克多巴胺人工抗原合成成功,该人工抗原可以进一步用于制备抗莱克多巴胺的单克隆抗体.     

新型氨基甲酸乙酯人工抗原的制备与表征

目的合成新型氨基甲酸乙酯(ethylcarbamate,EC)人工抗原并对其效果进行表征分析。方法用4-(二苯基羟甲基)苯甲酸对EC衍生化合成半抗原,用核磁氢谱(proton nuclear magnetic resonance, NMR)、核磁碳谱和质谱法(massspectrometry,MS)对其结构进行表征;用活化酯法将EC半抗原与牛血清蛋白(bovine serum albumin, BSA)偶联得到EC人工抗原。用紫外光谱和荧光光谱法对人工抗原进行表征并计算偶联比,用考马斯亮蓝法测定蛋白含量,间接竞争酶联免疫法鉴定其免疫活性。结果 EC半抗原结构与理论结构一致,半抗原与BSA成功偶联,偶联比为13:1,冻干粉的蛋白含量为0.695 mg/mg,用该新型人工抗原免疫小鼠,得到的抗血清效价为1:10000,且特异性较好。结论该新型氨基甲酸乙酯半抗原具有较好的免疫活性。     

氯霉素人工抗原的合成

以重氮化法分别将氯霉素(chloramphenicol,CAP)与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)及卵清白蛋白(ovaibumin,OVA)进行偶联,得到复合物CAP-BSA和CAP-OVA。对复合物紫外扫描显示其扫描谱图与BSA和氯霉素的图谱有明显的差异,BSA及OV与氯霉素偶联成功。分析CAP-BSA中CAP与BSA的摩尔比,偶联时,CAP与BSA的起始质量比为1∶1、1∶2、2∶1时,偶联物中CAP:BSA摩尔比分别为4.69∶1、8.90∶1、7.94∶1,说明反应起始时不同的CAP与蛋白质配比会对偶联效果有较大的影响。以摩尔比为8.90∶1的CAP-BSA免疫BALB/c小鼠65d后,间接ELISA检测测定效价达1∶20000。     

盐酸可乐定人工抗原的合成及鼠源多抗血清ELISA鉴定

目的：获得敏感性高,特异性强的新型瘦肉精盐酸可乐定（Clonidine hydrochloride,CLO）鼠源多抗血清。方法：以CLO的衍生物盐酸阿可乐定（Apraclonidine hydrochloride,ACLO）为半抗原,采用戊二醛法将ACLO分别与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）和鸡卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）偶联,合成免疫抗原CLO-BSA和包被抗原CLO-OVA。采用紫外扫描和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定其偶联效果后,免疫BALB/c小鼠,制备多抗血清。利用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其免疫学特性。结果：合成的人工抗原免疫效果较好,所获小鼠多抗血清效价均达到1∶12 800以上,其中3号小鼠敏感性最好,半数抑制质量浓度（IC₅₀）为82.75 ng/mL,与其他几种常见的瘦肉精类药物的交叉反应率均小于0.9%,特异性良好。结论：通过戊二醛法成功合成了高免疫原性的CLO人工抗原,并获得敏感性高,特异性强的CLO鼠源多抗血清。     

重金属镉人工抗原的制备与鉴定

目的 制备重金属镉人工抗原并对其进行理化性质和免疫原性鉴定。方法 以乙二胺四乙酸二钠(EDTA.2Na)或二乙基三胺五乙酸(DTPA)为双功能螯合剂,将牛血清白蛋白(BSA)和Cd_²⁺进行螯合,制备镉人工抗原,通过二喹啉甲酸(BCA)法、紫外全波长扫描、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、火焰原子吸收法以及动物免疫的方法对人工抗原进行分析鉴定。结果 紫外全波长扫描和SDS-PAGE电泳初步证明人工抗原合成成功;BCA法测定人工抗原BSA-EDTA-Cd_²⁺和BSA-DTPA-Cd_²⁺的蛋白质浓度分别为0.9488、0.5506 mg/mL;火焰原子吸收法测得BSA-EDTA-Cd_²⁺和BSA-DTPA-Cd_²⁺的Cd_²⁺浓度分别为22.8、20.1 μg/mL,说明人工抗原合成成功,且BSA-EDTA-Cd_²⁺和BSA-DTPA-Cd_²⁺的偶联比分别为14.2：1和21.6：1;用BSA-EDTA-Cd_²⁺和BSA-DTPA-Cd_²⁺分别免疫小鼠,四免后血清效价均能达到1：25600,且两组血清敏感性分别达到208.63和98.43 ng。结论 人工抗原BSA-EDTA-Cd_²⁺、BSA-DTPA-Cd_²⁺合成成功,为制备单克隆抗体和建立重金属镉快速免疫分析技术提供研究基础。     

伏马菌素B1人工抗原的制备及其鉴定

本试验采用戊二醛一步法将小分子半抗原(伏马菌素B1,FB1)与载体蛋白OVA进行偶联,制备人工抗原FB1-OVA。分别采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)、紫外扫描法(UV)、质谱法(MS)和免疫芯片法来检测FB1与OVA的偶联效果。结果证明,成功得到了人工抗原FB1-OVA,而且通过质谱法检测得出FB1-OVA和OVA的分子量分别是51928.612和44265.718,分析其偶联比为10.6:1。     

降解甲胺磷农药菌株的选育及鉴定

以常年石油浸渍土壤为筛选原料,通过驯化、筛选和诱变的方法选育出对甲胺磷农药降解最显著的菌株。通过在培养基中先后加入不同浓度的甲胺磷农药进行菌株的梯度驯化,以驯化后菌株对甲胺磷农药的降解率为指标,筛选出降解效果最好的菌株XY-C,经紫外照射诱变后测得菌株对甲胺磷农药的降解率为79.2%,且六次传代稳定性良好。通过对菌株的形态学观察,生理生化实验,透射电镜鉴定,确定经紫外诱变后得到的XY-C-3为葡萄球菌属（Staphylococcus rosehbach）。