普通烟草与野生烟草体细胞杂种植株育成

普通烟草与黄花烟草叶肉原生质体,用体细胞杂交方法育成的种间体细胞杂种植株,前文已经报道。在原生质体融合试验过程中,我们曾经观察到融合体稳定性差,培养不久,融合体就逐渐解体,最后聚集成团,导致试验失败。当然,影响融合体稳定性的因子很多,诸如原生质体活力、各种溶液组分、渗透浓度、培养条件以及各个环节的操作技术等,都可能直接或间接地影响到融合体的稳定性,因此,如何保持融合体的稳定性,是体细胞杂交过程中的一个重要方面。     

抗虫转基因烟草8611纯合系的选育

对获得的表达江豆胰蛋白酶抑制剂的转基因８６１１进行了抗虫性研究，从转基因当代植株中筛选出两株高抗单株８６１１－６、８６１１－１１，在用其离体叶片饲养烟方虫８天后，对烟青虫的杀死率分别达到５０％和４０％。在田间接种及自然（不施药）条件下，８６１１－６、８６１１－１１子代植株的虫害指数分别为６３．５％、６９．３％（接种后１５天）和３７．７％、３９．８％（移栽后２５天），而未转基因对照植株的虫害指数分别为９３．５％和５７％。     

烟草根细胞原生质体的制备

根细胞是植物单细胞多组学研究的重要材料,烟草作为重要的模式生物之一,其根细胞原生质体的高效分离也越来越重要。为了获得产量和活性较高的烟草根细胞原生质体,以本氏烟草和栽培烟草K326为材料,采用酶解法制备了烟草根细胞原生质体,同时优化了影响原生质体分离纯化的酶解液组合、酶解时间和酶解渗透压等条件,并通过显微镜观察和台盼蓝染色鉴定其活性。结果表明：(1)以1.5%纤维素酶+1.5%果胶酶+0.4 mol/L甘露醇的酶解液组合,经过2h酶解、500 r/min离心10 min得到的根尖细胞原生质体产量和活性相对较高;(2)最终获得了活性大于70%、数量达到105数量级的较高质量烟草根原生质体。     

广东烟草青枯病菌菌系研究

广东主要烟区南雄县和梅州市的烟草青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）没有本质上的差异。供试的菌株对烟草、茄子、番茄、辣椒都有强致病力,均为小种１,对２个花生品种（汕油７１,蔓生型）的致病力均分化为３个类型。所有菌株都能利用３糖３醇产酸,为生化型Ⅲ。琼脂双扩散试验结果表明,绝大部分菌株都能与南雄菌株和大埔菌株的抗血清形成３条吻合相连的沉淀带,说明这两个烟草青枯病菌菌株的亲缘关系十分密切。     

烤烟新品系L6-2选育研究

用氮离子注入处理烟草SpeightG80干种子产生突变,在L2代选择性状优良的变异单株,其中一株系L6-2(氮离子处理剂量脉冲20次,能量30keV的后代)其形态特征与亲本存在着明显的差异,开白花(亲本花色粉红),叶较宽大,经连续选择鉴定选育出一个性状稳定,优质抗病新品系。      

烟草抗花叶病新品系“转墓因NC89”选育技术的研究

本文报导了国内首例抗烟草花叶病毒（ＴＭＶ）和黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）的转基因双抗烟草新品系的选育方法，获得了具有抗ＴＭＶ和ＣＭＶ的双抗优质新品系。在新品系第４—６代的田间试验中，验证了其抗病毒特性的遗传稳定性；与对照品种ＮＣ８９在农艺性状、品质和烘烤特性等方面进行比较，证明转基因抗病新品系除抗病性显著增强外，其它特性均略优于原ＮＣ８９良种。１９９２年在河南省示范推广６６６７ｈｍ~２，转基因抗病新品系对烟草花叶病的相对控制效果为５０％－７０％，防病增产的经济效益显著。     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

诱导子对烟草细胞辅酶Q10生物合成的影响

比较了甘露醇、纤维素酶、果胶酶、水杨酸及茄子黄萎病菌和番茄叶霉病菌菌丝灭活物等几种诱导子对烟草NC89细胞生长和辅酶Q10合成的影响.结果表明:适宜浓度的甘露醇有利于NC89细胞生长,但抑制胞内辅酶Q10合成,当其浓度为5.0 mg/L时,NC89细胞干重提高14.6%,辅酶Q10产量仅提高1.9%;水杨酸、果胶酶及番茄叶霉病菌诱导子对NC89细胞生长有一定抑制作用,但可促进胞内辅酶Q10的合成,当水杨酸浓度和番茄叶霉病菌诱导子浓度分别为5.0 mg/L和25 mL/L时,胞内辅酶Q10含量分别提高25.8%和66.1%,但辅酶Q10产量分别降低7.0%和1.9%,当果胶酶浓度为3 U/L时,胞内辅酶Q10含量增加54.0%,辅酶Q10产量增加40.0%;茄子黄萎病菌诱导子及纤维素酶既有利于NC89细胞的生长,又可促进其胞内辅酶Q10的合成,当其浓度分别为25 mL/L和2 U/L时,辅酶Q10产量分别提高71.1%和36.6%.     

茶树新品系‘606’乌龙茶在不同季节的品质分析

为探究不同季节对茶树新品系‘606’乌龙茶品质的影响,本研究采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱（UPLC-QqQ MS）靶向代谢组学、顶空固相微萃取法结合气相色谱-飞行时间质谱联用（HS-SPME-GC-TOFMS）技术及电子鼻技术（Electronic nose）对新品系‘606’乌龙茶的品质成分进行定性定量测定,通过偏最小二乘-判别分析（PLS-DA）获取不同季节茶样组间差异。结果表明,氨基酸总量呈现春季>秋季>夏季,春季鲜味类氨基酸显著高于秋季与夏季（P<0.05）,苦味类氨基酸在夏茶中相对含量较春、秋茶高。儿茶素总量呈现秋茶>夏茶>春茶的规律。氨基酸与儿茶素的差异是造成春、夏、秋茶不同风味品质特征的重要原因。3个季节新品系‘606’乌龙茶共鉴定86种主要特征挥发性成分,醇类和碳氢化合物挥发性组分含量较高,酮类物质是春茶的特征挥发性成分,α-法呢烯是夏茶的特征挥发性成分,反式-橙花叔醇、吲哚、己酸叶醇酯是秋茶的特征挥发性成分。通过建立PLS-DA模型可将3个季节的茶样明显区分,鉴定出23种区分不同季节新品系‘606’乌龙茶的差异挥发性化合物。电子...     

烤烟新品种云烟87的选育及特征特性

烤烟新品种云烟87是用云烟2号为母本,K326作父本杂交,经系谱选择育成,2000年7月通过云南省烟草品种审评委员会审评,12月通过全国烟草品种审定委员会审定,云烟87主要农艺状稳定,变异系数小于对照K326,田间生长整齐一致,据多年异地试验结果,云烟87自然株高181．5cm打顶株高115cm,大田着生叶数26片,有效叶数18－20片,腰叶长77．5cm,宽31．0cm,大田生育期112d左右,节距6．0cm,上下节距分布均匀,中抗黑胫病,南方根结线虫病和青枯病,抗抓哇根结线虫病,耐肥水,适应性广,叶片厚薄均匀,层落黄好,易烘烤,平均产量2613kg/hm^2,均价4．84元/kg,上等烟比例45．07％,产值12259．5元／hm^2;比对照品种K326产量增加3．2％,均值提高0．52元,上等烟比例提高10．14个百分点,产值增加13．3％。初烤原烟多金黄色,色度强,油分多,叶片结构疏松,厚度适中,主要化学成分含量适宜,比例协调,烟碱平均含量2．2％,原烟香气质好,综合评吸指标优于生产推广主栽品种K326。云烟87具有优良,稳产、适应性广,抗逆力强,易烘烤等特点。     

烤烟新品种龙江911的选育及特征特性

烤烟新品种龙江911（911－21）是以龙江851（Windel)为母本，以CV91为父本杂交，系谱法选育而成，2000年12月通过全国烟草品种审定委员会审定，经多年多点试验，其主要农艺性状遗传稳定，田间生长整齐一致，田间自然株高140－160cm，打顶株高95－105cm有效叶数19－21片，腰叶长62．3厘米，腰叶宽26．3厘米，叶形长椭圆，叶面稍皱，叶片厚薄适中，着生均匀，花序离散，花色淡红色，田间生长势较强，大田生育期111－115d，抗赤星病，中抗黑胫病，根结线虫病，PVY，中感TMV，耐肥性好，叶片落黄成熟快，早熟，易烘，烤后原烟“金黄到深黄”，油分“较多”，色度“强到浓”，结构尚疏松，还原糖平均含量20．3％，总糖24．4％，烟碱2．33％，总氮1．79％，蛋白质8．64％，钾含量为1．45％，主要成分含量适宜，内在化学成分协调，平均产量2755.5kg/hm^2左右,均价5.79元/kg,上等烟27.0%,产值16390.86元/hm^2,综合性状优于NC89,到2001年底已经累计种植近2万hm^2/.     

烤烟新品种云烟85的选育及其特征特性

烤烟新品种云烟８５是根据基因重组和累加效应原理，用红花大金元与ＳｐｅｉｇｈｔＧ２８杂交选育的云烟２号为母本，Ｋ３２６作父本杂交，经系谱选择，于１９９５年育成，１９９６年１２月通过省松，厚度适中，总糖为２６．０９％，烟碱２．６６％，总氮１．８９％，糖碱比９．８１，氮碱比０．７１，主要化学成分适宜，比例协调，卷烟评吸香气质好，较对照Ｋ３２６稍细腻，香气量足，劲头适中，口感舒适柔和，具有典型的清香型风格     

芥蓝与菘蓝族间原生质体融合及杂种愈伤分析

运用聚乙烯乙二醇（PEG）和二甲基亚砜（DMSO）共同诱导融合的方法,成功获得芥蓝与菘蓝原生质体融合的再生愈伤。利用9对SRAP随机引物对亲本和再生愈伤DNA进行扩增以鉴别再生愈伤的基因组成,结果表明：在再生愈伤的DNA条带中,与供体菘蓝相同的带占93．07％～94．16％,与受体芥蓝相同的条带占70．24％～75．78％,并有少量新增带和缺失带出现,再生愈伤的DNA带型为双亲的叠加,为真正的族间杂种愈伤。类平均法（UPGMA）聚类分析表明,5个杂种愈伤明显聚在一起,其遗传组成十分相似,与菘蓝的遗传关系较近,而与芥蓝的遗传关系稍远。     

碱熔离子色谱法同时测定烟叶中氯和硫的含量

用碱熔-离子色谱法同时测定烟叶中氯和硫的含量.采用三因素三水平正交试验设计法确定了样品前处理的最佳条件:加入1％碳酸钠溶液3 mL,马弗炉温度550℃加热2h,样品冷却后用纯水超声浸提.平均回收率Cl为97.4％,S为105.7％,相对标准偏差Cl为1.71％,S为0.72％.     

转fps基因烟草纯合系的获得及其特性分析

携带有外源法呢基焦磷酸合酶（fps）基因和卡那霉素抗性基因（Npt—Ⅱ）的烟草种子在含卡那霉素（300mg／L）的培养基上能够正常地萌发和生长，对照种子虽能萌发，但幼苗形态与对照有着明显的差异。转fps基因植株所具有的卡那霉素抗性和与其抗病性之间密切相关，由此建立了一种鉴定转基因烟草后代纯合度的简易方法，得到4个fps转基因烟草纯合系（K-4、K-6、K-17、K-35），并对其农艺性状、田间抗性、化学成份和品质进行了评估，其中K-4转基因品系的综合性状较原有品种有所提高。     

烟草根际土壤浸出液刺激烟草疫霉产孢和接种研究

通过烟草疫霉游动孢子接种处理,研究了烟草黑胫病菌的产孢条件和人工接种方法。结果表明:根际草炭土和田间肥沃土浸出液均能刺激黑茎病菌产生孢子囊和游动孢子,施加40μL烟草根际草碳土浸出液和60μL田间肥沃土浸出液,两种处理的孢子囊最高产量分别为1.43×104个/mL和1.06×104个/mL;2种土壤浸出液均在40μL处理时游动孢子的产量最高,分别为3.12×106个/mL和2.30×106个/mL。烟草黑胫病菌接种方法的比较结果表明,茎基部注射接种致病效果要明显优于灌根接种。     

Amino acids as modulators of lipoxygenase oxidation mechanism. The identification and structural characterization of spin adducts intermediates by electron spin resonance and tandem mass spectrometry

Antioxidant activity is displayed by amino acids, such as tryptophan (Trp), tyrosine (Tyr) and histidine (His) in the spontaneous oxidation of linoleic acid (LA). In addition, when Trp was incubated with soybean lipoxygenase (LOX 1) and LA, a modulating effect was observed. The elucidation of the reaction pathways was achieved through the identification, by electron spin resonance (ESR) spectroscopy, of α-[4-pyridyl 1-oxide]-N-t-butyl nitrone (POBN) adducts with the selected amino acids. The latter, when electrosprayed (ESI) were detected in the gas-phase as radical cations. They were structurally characterized by tandem mass spectrometry (MS/MS) through collision-induced dissociation (CID) of the adducts. The kinetic data obtained from selected model systems suggested a reversible radical scavenging activity of tryptophan on the intermediate dienyl radical formed in the lipids lipoxygenase cascade.