虾夷扇贝裙边酶解物美拉德反应产物的自由基清除活性

以虾夷扇贝裙边为原料,利用中性蛋白酶制备其酶解物及美拉德反应产物。扇贝裙边蛋白的条带主要分布在200,97 ku和42 ku。其经中性蛋白酶酶解3 h后,水解度达28.95%。将酶解物与核糖反应制备美拉德反应产物,并分析其抗氧化活性和风味物质组成。结果表明：美拉德反应生成较多的中间产物和褐色物质。经美拉德反应后,酶解物生成较多挥发性成分,尤其是杂环化合物种类增加。此外,酶解物的羟基和ABTS自由基清除能力仅分别为42.7%和31.64%,且未表现出明显的DPPH自由基清除能力。然而,经12 h的美拉德反应后,酶解物的羟自由基、DPPH和ABTS自由基清除能均力得到显著提高,表明扇贝裙边酶解物-核糖美拉德反应产物具有良好的抗氧化能力,可作为抗氧化剂应用于食品工业中。     

扇贝性腺多糖提取物的抗氧化及免疫调节活性

通过酶解法制备扇贝性腺多糖提取物(SGP),研究其抗体外氧化及免疫调节活性。采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼DPPH体系反应、Fenton反应和还原反应测定SGP的抗氧化活性;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法测定SGP 对活性氧叔丁基脂氢过氧化物(tBOOH)致细胞氧化损伤及淋巴细胞增殖活性的调节作用;分光光度法测定SGP 对补体活性的影响。结果表明：SGP具有DPPH自由基清除能力(IC50=9.92mg/mL)和羟自由基清除能力(IC50=7.31mg/mL)及还原能力(AC20=7.74mg/mL);0.2μg/mL的SGP可明显改善tBOOH致RAW264.7细胞的氧化损伤作用,还可显著提高脾淋巴细胞的增殖活性及补体经典途径活性。     

虾夷扇贝柱粗多糖不同提取工艺优化及其化学性质与抗氧化活性的比较

目的 优化虾夷扇贝柱粗多糖2种提取工艺,并对比分析2种提取方式对扇贝柱粗多糖的化学性质及抗氧化活性的影响。方法 以提取率为指标,在单因素实验基础上,通过响应面分析法对扇贝柱粗多糖热水浸提法及酶解提取法进行优化,并比较2种粗多糖红外光谱、单糖组成及抗氧化活性。结果 热水浸提法的最优工艺为:料液比1:3(g/mL)、浸提时间6h、浸提温度90℃;酶解法最优工艺为:木瓜蛋白酶添加量0.3%(鲜重)、pH 7.0、酶解温度55℃、酶解时间5 h、料液比1:3 (g/mL)。2种粗多糖组成单糖相同,但各单糖物质的量之比有所不同;红外光谱结果表明,2种粗多糖结构相似,主要由α-D型吡喃糖构成,且含有糖醛酸。抗氧化结果表明,不同提取方式得到的扇贝柱粗多糖具有不同的抗氧化活性,酶解法提取的粗多糖具有较高的抗氧化活性。结论 本研究确定了虾夷扇贝柱粗多糖2种提取方式的最优条件,酶解法粗多糖提取率较高且具有较好抗氧化活性,为后续研究提供了理论依据。     

虾夷扇贝裙边多肽提高鲢鱼肌原纤维蛋白结构稳定性

采用添加0、2、4 g/100 mL虾夷扇贝裙边多肽（Patinopecten yessoensis mantle polypeptide,PMP）修饰鲢鱼肌原纤维蛋白（myofibrillar protein,MP）,通过测定修饰前后MP的巯基含量、羰基含量、傅里叶变换红外光谱、紫外吸收光谱及内源荧光光谱,研究PMP对鲢鱼MP结构的影响。结果表明：MP总巯基、活性巯基、羰基含量均随PMP添加量升高而降低;修饰后的MP α-螺旋相对含量无显著变化,但β-折叠相对含量随PMP添加量增加降低,β-转角相对含量随PMP添加量增加而升高,PMP的添加有利于延缓MP的展开,维持MP结构的稳定性;PMP也有效延缓了MP的羰基化。PMP可作为潜在的天然抗氧化剂、低温保护剂和凝胶质构增强剂。     

虾夷扇贝多糖提取及纯化方法的优化

以青岛虾夷扇贝为原料,利用单因素试验以及正交试验,对水提、酶提醇沉法结合超声波辅助提取扇贝柱多糖工艺及多糖脱蛋白进行研究,并对三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)和D-葡萄糖酸-δ-内酯(D-glucono-δ-lactone,GDL)的脱蛋白效果进行对比,其中利用GDL对多糖中的蛋白质进行脱除尚属首次。结果显示,多糖提取最佳工艺条件为液料比40∶1(m L/g)、加酶量2.5%、60℃提取3 h,在此条件下虾夷扇贝多糖得率可达10.90%;TCA法脱蛋白的最佳工艺条件为脱蛋白时间5 h、TCA质量分数5%、脱蛋白次数3次;GDL法脱蛋白的最佳条件为反应时间1 h、反应温度45℃、GDL质量分数0.3%。在两者最佳条件下,分别进行3次平行实验,TCA蛋白脱除率为88.654%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.905%;GDL蛋白脱除率为99.062%,RSD为0.679%;对比两种脱蛋白方法,GDL法脱蛋白效率更高,实验效果也更为稳定。     

虾夷扇贝脏器硫酸酯多糖的制备及性质研究

采用氯磺酸- 甲酰胺法对扇贝脏器粗多糖进行硫酸化修饰。经红外光谱分析表明,修饰产物具有典型的多糖吸收峰和硫酸基吸收峰。硫酸酯多糖经Bio-Gel P-6 凝胶过滤柱分离后获得SSVP-I 和SSVP-II 两种多糖组分,其中组分SSVP-I 的平均分子量约为5900u,硫酸基取代度为0.98,主要由鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖以摩尔比为1.0:1.3:2.4:3.0:1.3:4.1:2.5 组成。体外抗凝血实验表明,SSVP-I 能显著延长人活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)和凝血酶时间(TT),且具有一定的剂量- 效应依赖关系。     

响应面优化虾夷扇贝抗氧化肽酶解液工艺研究

为制备富含抗氧化肽的扇贝酶解液,以虾夷扇贝为原料,以水解度和DPPH自由基清除率为指标,应用响应面法优化扇贝蛋白的生物酶解工艺,并测定了富含活性肽酶解液的体外抗氧化性。结果表明:扇贝蛋白生物酶解适宜工艺参数为蛋白酶用量3.1%,酶作用温度45℃,作用时间4.5 h,此工艺参数下酶解液DPPH自由基清除率为82.06%,总抗氧化能力为0.11 U/mg prot,抗超氧阴离子活力为0.37 U/g prot,羟自由基清除率为55.31%。     

虾夷扇贝肌肉丝氨酸蛋白酶的研究

为了探究虾夷扇贝肌肉冷藏过程中内源蛋白酶对其质构的影响,本文对虾夷扇贝肌肉在4 ℃下冷藏7 d过程中肌肉质构及蛋白变化进行测定,结果表明,整个冷藏过程中扇贝肌肉硬度、弹性、咀嚼性和粘性整体呈下降趋势。SDS-PAGE分析显示肌肉蛋白在第3 d开始出现明显降解。在内源酶活力方面,丝氨酸蛋白酶（Serine proteinase,SP）活力在冷藏2 d后开始急剧下降。通过硫酸铵盐析、离子交换、凝胶过滤和疏水柱层析等从虾夷扇贝肌肉中获得高度纯化的丝氨酸蛋白酶并对其酶学性质进行研究。SDS-PAGE和明胶酶谱结果表明,SP在天然状态下主要以分子量约为52 kDa的二聚体形式存在。SP的最适pH为9.0,最适温度为37 ℃。SP特异性水解羧基侧P₁位含有精氨酸或赖氨酸残基的底物。丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂PMSF、Leupeptin、Pefabloc SC、Benzamidine分别能抑制其97%、98%、90%和85%的酶活力;金属离子Fe2+、Zn2+、Cu2+也能明显抑制SP的酶活力。37 ℃下SP可有效降解扇贝肌原纤维蛋白,为揭示SP对扇贝肌肉蛋白的品质影响提供参考。     

虾夷扇贝内脏多糖SVP-12的分离纯化及性质研究

采用蛋白酶水解提取法提取虾夷扇贝内脏粗多糖。采用2步蛋白酶-sevag法脱除粗多糖中的蛋白质。粗多糖先后经Sephacryl-S 200凝胶过滤层析柱和DEAE-52阴离子交换层析柱分离得到多糖组分SVP-12。SVP-12经高效液相色谱鉴定为均一的多糖,其分子质量约为170 ku,其中多糖含量为72.05%,蛋白含量为2.74%,硫酸根含量为12.57%,氨基己糖含量为8.46%。气相色谱法检测结果表明,SVP-12含有鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖、葡萄糖,其摩尔比例约为1.65∶2.54∶4.05∶5.60∶1.48∶4.90∶1.00。     

扇贝裙边活性肽的制备及其降血糖活性研究

为研究扇贝裙边对正常小鼠血糖及糖耐量的影响,以扇贝裙边为原料,用复合蛋白酶进行酶解获得活性肽。通过单因素和正交试验,确定酶解最佳工艺条件为:底物浓度7%,加酶量100 U/m L,酶解4 h。此时扇贝裙边多肽的α-葡萄糖苷酶抑制率为93.31%。扇贝裙边活性肽对正常小鼠体内血糖及糖耐量影响结果表明:与空白组相比,给予淀粉溶液0.5 h后,高剂量组的血糖值(14.23±2.33 mmol/L)和糖耐量曲线下面积均有一定程度的降低。因此,扇贝裙边活性肽可以改善正常小鼠对血糖浓度的调节能力,对机体的糖耐受能力具有一定的增强作用。     

扇贝裙边抗氧化肽酶解液的体内体外抗氧化性研究

采用复合蛋白酶酶解法,以扇贝裙边为原材料,在pH7.5、温度50℃、时间3h的酶解条件下,制备了一种抗氧化肽酶解液。该抗氧化肽酶解液对DPPH自由基的体外清除率可达93.14%。对超氧阴离子和DPPH自由基的清除活性IC50分别为7.97mg/mL和2.89mg/mL。动物实验表明,该酶解液可以提高小鼠体内过氧化氢酶(CAT)活力20.1%,提高超氧化物歧化酶(SOD)活力4.2%,降低丙二醛(MDA)含量57.4%。由此可见,本实验制备的抗氧化肽酶解液在体内和体外均具有很强的抗氧化活性。      

扇贝裙边抗氧化肽酶解液的体内体外抗氧化性研究

采用复合蛋白酶酶解法,以扇贝裙边为原材料,在pH7.5、温度50℃、时间3h的酶解条件下,制备了一种抗氧化肽酶解液.该抗氧化肽酶解液对DPPH自由基的体外清除率可达93.14％.对超氧阴离子和DPPH自由基的清除活性IC50分别为7.97mg/mL和2.89mg/mL.动物实验表明,该酶解液可以提高小鼠体内过氧化氢酶(CAT)活力20.1％,提高超氧化物歧化酶(SOD)活力4.2％,降低丙二醛(MDA)含量57.4％.由此可见,本实验制备的抗氧化肽酶解液在体内和体外均具有很强的抗氧化活性.     

回归正交旋转法优化制备扇贝裙边抗氧化肽

以扇贝加工副产物———裙边为原料,以水解度和超氧阴离子清除率为考察指标,从6种蛋白酶中筛选出中性蛋白酶作为水解制备抗氧化肽的较优蛋白酶,研究反应温度、pH值、加酶量、底物质量浓度和反应时间等单因素对酶解效果的影响;通过三元二次回归正交旋转设计对水解条件进行优化,建立单因素与水解度和抗氧化活性的回归方程,确定中性蛋白酶水解扇贝裙边蛋白的最佳水解条件是:反应温度45℃,pH 8,底物质量浓度40 mg/mL,加酶量12.9%,反应时间6 h。最佳水解条件下超氧阴离子清除活性为25.64%。     

虾夷扇贝生殖腺酶解物-核糖美拉德反应产物抗氧化特性研究

本文选用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶及木瓜蛋白酶制备虾夷扇贝雌性生殖腺酶解物,再与核糖进行美拉德反应获得虾夷扇贝雌性生殖腺酶解物-核糖美拉德反应产物。采用DPPH自由基和亚油酸过氧化体系,评价美拉德产物的抗氧化能力。结果显示,碱性蛋白酶酶解效果较好,在酶解3 h时其水解度及TCA可溶性寡肽得率最高,分别达24.16%和20.79%。以DPPH自由基清除活性及亚油酸过氧化抑制活性为指标,确定了pH7条件下制备的虾夷扇贝雌性生殖腺酶解物-核糖美拉德产物抗氧化能力相对较强。通过比较半抑制浓度（IC50）,美拉德产物的抗氧化能力较酶解物及核糖本身均显著提高（p<0.05）,但弱于抗氧化剂2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）。以上研究结果说明,虾夷扇贝生殖腺酶解物-核糖美拉德反应产物具有一定的抗氧化能力,具有潜在的开发价值。      

酶解联合美拉德反应制备具有抗氧化活性的扇贝裙边调味基料

目的 探究酶解联合美拉德反应制备具有抗氧化活性的扇贝裙边调味基料的工艺参数。方法 以扇贝裙边为原料,采用酶解法制备扇贝裙边调味基料,并利用美拉德反应增强调味基料的抗氧化活性。以水解度为指标,通过单因素实验探索复合蛋白酶添加量、酶解温度、酶解时间和pH对扇贝裙边酶解效果的影响,并通过正交实验对酶解工艺进行优化,确定扇贝裙边酶解最佳条件。将扇贝裙边酶解液与葡萄糖混合加热进行美拉德反应,测定样品的褐变度、抗氧化活性,并进行感官评价。结果 扇贝裙边最佳酶解工艺为:蛋白酶添加量3%、酶解温度50℃、酶解时间8 h、pH 8。扇贝裙边酶解液与葡萄糖110℃加热3.0 h后, 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除能力提高1.7倍,扇贝裙边调味基料滋味鲜美,香气浓郁,无腥臭味道。结论 在最佳工艺参数条件下,联合美拉德反应处理制得的扇贝裙边调味基料具有较好的抗氧化活性,本研究可为功能性调味料的开发及扇贝裙边高值化利用提供理论支持。     

虾夷扇贝生殖腺酶解物-核糖美拉德反应产物抗氧化特性研究

本文选用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶及木瓜蛋白酶制备虾夷扇贝雌性生殖腺酶解物,再与核糖进行美拉德反应获得虾夷扇贝雌性生殖腺酶解物-核糖美拉德反应产物。采用DPPH自由基和亚油酸过氧化体系,评价美拉德产物的抗氧化能力。结果显示,碱性蛋白酶酶解效果较好,在酶解3 h时其水解度及TCA可溶性寡肽得率最高,分别达24.16%和20.79%。以DPPH自由基清除活性及亚油酸过氧化抑制活性为指标,确定了pH7条件下制备的虾夷扇贝雌性生殖腺酶解物-核糖美拉德产物抗氧化能力相对较强。通过比较半抑制浓度(IC50),美拉德产物的抗氧化能力较酶解物及核糖本身均显著提高(p0.05),但弱于抗氧化剂2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)。以上研究结果说明,虾夷扇贝生殖腺酶解物-核糖美拉德反应产物具有一定的抗氧化能力,具有潜在的开发价值。     

虾夷扇贝中大肠杆菌的累积及净化技术研究

研究大肠杆菌在扇贝体内累积及组织分布的规律.将污染后的虾夷扇贝放入经臭氧系统灭菌后的海水中,净化处理,以大肠菌群为指标,探讨影响虾夷扇贝净化效果的几个关键因素,并对净化前后虾夷扇贝的营养成分进行检测.结果表明,虾夷扇贝各组织中大肠菌群浓度由高到低依次为:消化腺>性腺>腮和外套膜>闭壳肌.当臭氧浓度为0.03 mg/kg时,最佳净化工艺条件为,贝水比1:8(m:m);盐度3.3%;净化时间为32 h.净化前后,虾夷扇贝中各营养成分含量并无明显变化.试验证明,臭氧净化法能清除虾夷扇贝的微生物污染,且不影响扇贝的营养成分.     

扇贝裙边酱油的开发与研究

以扇贝裙边、豆粕、麸皮、小麦为原料,采用多菌种混合制曲,低盐固态发酵酿造扇贝裙边酱油.通过试验得出制曲最佳配料比为扇贝裙边200g、豆粕400g、麸皮400g、水700mL、小麦400g.发酵条件为盐度12%、曲水比11,前10d发酵温度为50℃,后20d发酵温度为45℃.扇贝裙边酱油与传统工艺酿造的酱油相比,海鲜风味浓郁,氨基酸态氮、全氮、牛磺酸、氨基多糖含量分别达到0.83/100mL、1.70g/100mL、7.82×10-5g/100mL、3.51×10-5g/100mL.     

白灵菇多糖抗氧化活性研究

通过与Vc的对比实验进一步研究白灵菇多糖的抗氧化活性。分别采用铁氰化钾还原法、DPPH·自由基测定法、邻苯三酚自氧化法、分光光度法测定Fenton法产生的羟自由基以及硫代巴比妥酸法,研究白灵菇多糖和Vc的还原能力,清除DPPH·自由基、超氧阴离子(O2-·)和羟基自由基(·OH)的能力,以及抑制脂质过氧化的能力。随着白灵菇多糖浓度的增加,其还原能力和DPPH·、O2-·、·OH的清除率以及抑制蛋黄脂质过氧化能力均有所增加。当多糖浓度为2 mg/m L时,表现出较强的还原能力,对DPPH·、O2-·和·OH的清除率分别为72.32%、9.30%和94.56%,脂质过氧化抑制率为84.78%。白灵菇多糖具有明显的抗氧化活性。