黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选及鉴定研究

黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)污染花生、玉米等农产品和食品,具有极强的毒性和致癌性。采用香豆素为唯一碳源从海水中分离降解AFB_1菌株,其中菌株M8能降解71.8%的AFB_1。通过上清液、菌悬液、胞内液降解AFB_1分析,初步判断菌株M8分泌至胞外的活性物质主导AFB_1的生物降解作用。通过菌株形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因系统发育学分析,鉴定菌株M8属于假单胞菌属,命名为Pseudomonas sp. M8。从海水中分离菌株M8丰富了降解AFB_1降解微生物资源,为研究其作用机理和应用于黄曲霉毒素的脱毒奠定了基础。     

黄曲霉毒素B_1降解菌株的筛选鉴定

黄曲霉毒素B_1(AFB_1)具有极强的毒性和致癌性,严重危害人和动物健康。通过富集培养、初筛和复筛从土壤中筛选到能降解黄曲霉毒素的菌株,鉴定降解效率最高菌株并研究其降解特征。结果表明,筛选出多株能降解AFB_1菌株,其中菌株A12降解效率最高,通过形态学、生理生化特征及16S rRNA基因系统进化分析鉴定菌株A12为枯草芽孢杆菌,命名为Bacillus subtilis subsp. InaquosorumA12。研究发现枯草芽孢杆菌A12上清液、菌悬液、胞内液能分别降解87.6%、17.3%和10.8%的AFB_1,表明菌株A12分泌至胞外活性物质主导生物降解作用。菌株A12上清液降解AFB_1的最适反应温度为37℃,最适p H为7.0。将该菌接种到AFB_1污染的花生样品,能显著降低AFB_1的含量。为枯草芽孢杆菌A12应用于AFB_1的生物脱毒奠定了基础。     

抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体细胞株的筛选

研究筛选到抗黄曲霉毒素M1的单克隆抗体细胞株,用AFM1-oxim e-BSA偶联物免疫Balb/C小鼠后,取小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,经过3次克隆和亚克隆得到两株稳定分泌抗黄曲霉毒素M1抗体的杂交瘤细胞株,经过检测两株均为IgG1亚类,并且经过鉴定其各项性质均符合标准。     

黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选及鉴定

该研究以香豆素为唯一碳源,从豆类发酵食品、土壤、动物肠道及其内容物中筛选黄曲霉毒素B1（AFB1）降解菌株;然后通过复筛,从中筛选出AFB1降解能力较好的菌株,并对其降解作用与吸附作用进行区分;最后,通过形态观察、生理生化试验及分子生物学技术对其进行鉴定。结果表明,共筛选得到9株AFB1降解菌株,其中菌株YC2的AFB1降解能力最强,AFB1降解率达到90.7%,并确定菌株YC2通过降解作用去除AFB1。最后,菌株YC2被鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）。     

稻谷中产黄曲霉毒素菌株的筛选与鉴定

采用传统微生物筛选方法,及ELISA与PCR相结合的方法,对稻谷中污染主要霉菌进行分析,并从中筛选出4株优势菌株进行产毒试验,获得2株产毒能力较高菌株,对其中产毒能力最强的4号菌株做进一步的分子鉴定,结果与黄曲霉菌的同源性达到100%,通过聚类分析,结合形态学和分子生物学鉴定结果,该试验筛选到的产黄曲霉毒素菌株为黄曲霉菌(A.flavus)。     

黄曲霉毒素M1模拟表位的筛选和鉴定

目的:从噬菌体表面7肽库中筛选出黄曲霉毒素M1抗原的模拟表位。方法与结果:经过4轮淘选,筛选获得了4个与抗AFM1单克隆抗体具有较高亲和性的阳性噬菌体克隆,编号为A1、A2、A3和A4。间接竞争抑制实验结果表明:当噬菌体滴度为2.5×1010CFU时,噬菌体A1、A2、A3和A4对AFM1与抗AFM1单克隆抗体结合的抑制率分别为41.8%、40.6%、36.7%和37.6%。测定其核酸序列,其中A1、A2为同一克隆,氨基酸序列为LTSFPRH;A3、A4为同一克隆,氨基酸序列为MAPSSWR。结论:从噬菌体7肽库中筛选到2个AFM1的理想模拟表位。     

细菌降解黄曲霉毒素B1的研究进展

黄曲霉毒素B1是目前已发现的黄曲霉毒素中毒性最强的一种,其具有强肝毒性、高致突变性和高致畸性。广泛存在于农产品及饲料食品中,对人类健康存在严重威胁,同时对粮食和畜牧业造成严重的经济损失。细菌降解黄曲霉毒素B1是一种有效、安全和环保的解毒方法,该文通过对黄曲霉毒素B1降解的影响因素、细菌胞外酶和胞内酶等对黄曲霉毒素B1的降解机理以及黄曲霉毒素B1降解菌活性产物的应用研究等方面对细菌降解黄曲霉毒素B1进行了论述,并对细菌降解黄曲霉毒素B1应用前景进行展望,为以后更进一步研究提供较为全面的资料。     

乳品中黄曲霉毒素M1残留检测方法研究进展

黄曲霉毒素M1(aflatoxin M_1,AFM_1)具有强致癌性和致突变性,主要存在于动物的肉、尿、乳汁、肝脏、肾脏、肌肉、血液中,其中以乳汁中最为常见。本文综述了薄层色谱法、高效薄层色谱法、高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、免疫亲和柱-荧光光度法、酶联免疫吸附法、放射免疫法、免疫胶体金法、电化学法、化学发光法等检测残留在乳制品中AFM_1方法的研究进展,概述了各方法优缺点,并对未来检测方法进行了展望,为保证乳品安全和提高我国AFM_1的检测能力提供技术支持。     

黄曲霉毒素B1 降解菌株的分离鉴定、发酵条件的 优化及活性组分分析

为筛选出一株高效降解黄曲霉毒素B1（AFB1）的菌株，选取土壤为菌株来源，进行富集培养，经过以香豆素为唯一碳源的初筛和添加AFB1的复筛后，对筛选得到的各菌株进行16S rDNA鉴定，比对其测序结果，选取降解AFB1最高的菌株，探究发酵时间、发酵温度、初始pH、接种量、培养基对菌株降解AFB1的影响规律，通过正交试验优化发酵条件，并对降解方式进行初步探索。结果表明：经过初筛和复筛得到7株能够降解AFB1的菌株，经鉴定均为伯克霍尔德菌属，其中Burkholderia sp. D6的AFB1降解率最高；最优发酵条件为以LB培养基为发酵培养基、发酵时间84 h、发酵温度37 ℃、初始pH 7.0、接种量10%，在此条件下Burkholderia sp. D6对AFB1的降解率为（87.91±2.32)%；初步判断降解AFB1的活性组分是蛋白质或者酶。综上，通过筛选得到了一种能够高效降解AFB1的菌株，蛋白质或酶参与了AFB1的降解。     

全脂加糖炼乳中黄曲霉毒素M1的检测方法

研究全脂加糖炼乳中黄曲霉毒素M1的检测方法.本方法测定的基础是抗原抗体反应.微孔板包被有针对黄曲霉毒素M1的特异性单克隆抗体.加入黄曲霉毒素M1标准品或样品溶液,抗体与样品结合,其余未结合部分抗体与黄曲霉毒素M1酶标记物相结合.没有结合的酶标记物在洗涤步骤中被除去.将基质/发色剂加入到孔中并且孵育.结合的酶标记物将基质/发色剂转化为蓝色的产物.加入反应停止液后颜色由蓝转变为黄色.在450nm处测量,吸收光强度与样品中的浓度成反比.本方法为半定量检测,灵敏度是5pg/mL(ppt),试剂盒标准曲线检测范围是5～ 100pg/mL.     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及有效降解组分初探

黄曲霉毒素B₁(AFB₁)是具有强毒性、强致癌性的一种真菌毒素。为了筛选出AFB₁降解菌,将实验室保藏的真菌菌株与AFB₁共培养,选取降解率最高的菌株,经形态学和ITS rDNA分析确定其种属,分离菌株不同组分(菌悬液、菌体、孢子液、发酵液)后探究其降解AFB₁的有效组分,并将有效组分菌体破碎后作进一步探究。结果表明:培养72 h后的郝克氏青霉MD1菌悬液和未破碎菌体对AFB₁降解率分别为98.15%和28.20%,菌体破碎后对AFB₁的降解效果更好,培养24 h后对AFB₁的降解率为55.40%。因此,郝克氏青霉MD1的菌悬液和菌体内的活性组分能有效降解AFB₁。本研究筛选出的郝克氏青霉MD1扩大了AFB₁降解菌的菌种库,为AFB₁的生物降解提供了一定的参考价值。     

牛奶及奶粉中黄曲霉毒素M1的快速测定

采用免疫亲和柱－荧光光度法快速测定了牛乳及乳制品中黄曲霉毒素M1。试样经过离心、脱脂、过滤后滤液经过键合有黄曲霉毒素M1特殊抗体的免疫亲和柱净化，此抗体对黄曲霉毒素M1具有专一的识别能力，黄曲霉毒素M1键合在分离柱中的抗体上，用甲醇与水之比为10：90的混合液将免疫亲和柱上杂质除去；以甲醇与水之比为80：20的混合液通过分离柱洗脱；加入溴溶液衍生，以提高测定灵敏度，衍生化后的洗脱液于荧光光度计中测定黄曲霉毒素M1，检测低限为0．1μg/kg；在0．1－1．0μg/kg范围内，回收率为89．6％－96．1％，变异系数为0．52％－5．8％，分析一个样品的时间小于30min，分析过程中不使用黄曲霉毒素M1标准物质，结果表明，本方法具有准确、简单、快速、安全等优点，可以满足少量和批量样品的检测需要。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选及生物学特性分析

筛选具有降解黄曲霉毒素B₁（aflatoxin, AFB₁）的菌株以用于黄曲霉毒素的生物降解。该实验采用以香豆素为唯一碳源的培养基进行初筛,采用ELISA试剂盒检测初筛菌株AFB₁降解率的方法进行复筛,然后通过测定筛选菌株的生长曲线,对酸、胆碱、肠胃液的耐受性以及抑菌性能,对其抗逆性和抑菌性进行初步分析。通过初筛和复筛,筛选到1株具有较强的AFB₁降解能力的菌株ZJ20,其降解率可达84.23%,经形态学观察、生理生化试验及16S rRNA序列测定,鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,将其命名为Bacillus subtilis ZJ20。菌株Bacillus subtilis ZJ20耐酸处理后存活率在69.11%以上,胆盐处理后存活率在68.12%以上,人工胃肠液中处理后存活率在62.39%以上,抑菌实验结果表明该菌对鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella enterica subsp）ATCC14028、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureaus）A...     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及发酵条件优化

该研究采用香豆素筛选模型,从酒醅、大曲、榨菜、酸豆角等样品中分离筛选降解黄曲霉素B1（AFB1）菌株,通过形态学观察及分子生物学技术对筛选菌株进行鉴定,并以黄曲霉毒素B1降解率为评价指标,采用单因素及正交试验对筛选菌株的发酵条件进行优化。结果表明,共初筛出23株可利用香豆素菌株;采用高效液相色谱（HPLC）法复筛出1株AFB1高效降解菌,其降解率最高,为86.22%,菌株编号为HB022。菌株HB022被鉴定为地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis）,其最优发酵条件为发酵温度37 ℃、初始pH 7.2、接种量5%、发酵时间72 h。在此优化条件下,AFB1的降解率为91.13%。     

黄曲霉毒素B1降解菌的筛选鉴定及降解酶挖掘

目的 筛选、鉴定一株高效降解黄曲霉毒素B1 (aflatoxin B1, AFB1)菌株,并对其降解特性和降解酶基因进行分析。方法 通过形态学观察、生理生化鉴定及同源性分析,对具有高效降解AFB1能力的菌株进行鉴定。通过菌株发酵液、上清液、细胞悬液、胞内提取物对AFB1降解能力的不同确定降解活性部位,使用冷冻干燥方法探索其粗酶制剂对AFB1降解效果。结合全基因组分析进行降解酶基因的挖掘。结果 通过鉴定,菌株HNGD-B3为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis),菌株上清液对AFB1降解效果最好,72 h降解率为88.24%±2.02%。上清液蛋白酶K处理后,对AFB1降解效果大幅下降,热处理后上清液降解效果基本无变化,判断其降解活性成分为胞外酶。粗酶制剂可显著提高AFB1降解效率,结合全基因组分析与Blastp比对筛选得到3条具有AFB1降解潜力的候选基因序列。结论 菌株HNGD-B3对AFB1具有良好降解效果,在生物降解真菌毒素具有较大潜力。     

去除黄曲霉毒素B_1的菌株筛选

作者从花生土壤和花生粕中筛选能去除黄曲霉毒素B1(AFB1)的菌。利用营养特异性方法进行去除AFB1菌株的初筛,之后将初筛的7株菌的细胞和发酵上清液作用于质量浓度为200μg/L的AFB1。结果表明:筛选得到的TRS-3菌株,其活细胞和死细胞对AFB1的去除率分别达到48.26%和53.56%,其发酵上清液降解AFB1的能力达到78.55%,均明显高于其它菌株。通过对TRS-3菌株的鉴定,最终确定为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)。     

HPLC法测定乳制品中的黄曲霉毒素M1

目的 建立孔制品中黄曲霉毒素M1的HPLC的检测方法.方法 样品经提取、过免疫亲和柱净化后,用高效液相色谱-荧光检测器进行分析.结果 黄曲霉毒素M1在0.1～1 μg/L范围内线性关系良好,γ＞0.999.回收率在90%～110%之间,定量限为5 pg,检测限为2 pg.结论 该方法快速、简便、准确,改善了现有国标GB/T18980-2003操作繁琐,测定结果易受操作影响的缺点.可作为乳制品中黄曲霉毒素M1的定量测定.     

定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留高灵敏度检测卡的研制

研制定性测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留的高灵敏度检测卡.在硝酸纤维素膜上预包被黄曲霉毒素M1全抗原作为检测线,以及预包被羊抗鼠二抗作为质控线.将抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体用胶体金标记作为金标垫.将样品垫、金标垫、预包被黄曲霉毒素M1的硝酸纤维素膜以及吸水垫依次粘贴在PVC板上,切割成试纸条并组装成检测卡.结果表明:该检测卡的检测限为0.5μg/L,对黄曲霉毒素M1的交叉反应率为100％,而与同族的其他物质的交叉反应率小于5％.假阳性率小于5％,假阴性率为0％,检测卡常温储存,保质期18个月.本研究的检测卡,可快速准确地应用于羊奶中黄曲霉毒素M1残留的定性检测,为快速准确地测定羊奶中黄曲霉毒素M1残留提供了依据.     

抗黄曲霉毒素M1免疫亲和柱的制备

制备黄曲霉毒素M1污染样品的净化前处理免疫亲和柱.利用无血清培养基制备的高纯度抗黄曲霉毒素M1单克隆抗体和溴化氰活化的Sepharose 4B进行偶联、装柱后通过IC-ELSIA对免疫亲和柱的性能评价确立了最佳反应条件.免疫亲和柱的有效柱容量为500ng,经添加回收试验测定的平均回收率为92.46%0,变异系数2.3%...     

牛奶中黄曲霉毒素的来源与控制

本文概述了牛奶中黄曲霉毒素的存在种类,来源及其性质.对近年来国内外对牛奶中黄曲霉毒素毒素的检测方法、控制和消除方法进行了研究.